ويمكن أن يساعد إنشاء هذا النموذج الإنساني للماوس في إجراء دراسات بحثية عن فيروس نقص المناعة البشرية قبل التشخيـر. فعلى سبيل المثال، يمكن تقييم كل من السلالات الفيروسية المختلفة والتدخلات الجديدة لفيروس نقص المناعة البشرية. ويمكن استخدام هذه البروتوكولات لتقييم المتبرع بالخلايا الجذعية CCR5 متغير الوضع و لتصيب بكفاءة الفئران أنسانية مع فيروس نقص المناعة البشرية وقياس الأحمال الفيروسية البلازما الماوس.
يمكن تكييف بروتوكول القياس الكمي للرنا بسهولة لتحديد أي تسلسل الحمض النووي الريبي الفيروسي الذي يمكن اختياره ويمكن اكتشافه في عينات البلازما. للفحص الجيني لعينات دم الحبل السري ل CCR5 دلتا 32 المتغيرات، واحتضان 1.25 ميكرولترات من تدفق غير بيليه من خلال مع 11.25 ميكرولترات من مزيج PCR التي تحتوي على 200 مزيج dNTP ميكرومولار، 0.01 وحدة لكل ميكرولتر من البوليميراز الحمض النووي عالية الدقة، والدلاليات الأمامية والالعكسية كما هو مفصل في الجدول. ضبط مستوى الصوت مع المياه الخالية من النوى إلى ما يقرب من 12.5 ميكرولترات لكل تفاعل PCR وتضخيم شظايا الجينوم مع برنامج ركوب الدراجات PCR كما هو مبين في الجدول.
في نهاية التفاعل، وفصل منتجات PCR على جل agarose 2٪. منتجات PCR من أنواع الغيلات البرية و delta 32 alleles تعطي شظايا PCR من 196 زوجا قاعدة و 164 أزواج قاعدة على التوالي، مما يجعل النطاقات يمكن تمييزها بسهولة بواسطة جل electrophoresis. للتعرض لفيروس نقص المناعة المكتسبة بين المهبلين، ضع مصباح تدفئة يركز على وسط مساحة العمل حيث سيتم تحديد مكان الماوس ووضع 20 نصائح ماصة ميكرولتر معقمة في ماصة مناسبة في غطاء محرك السيارة.
ضع حاوية مع مطهر سائل في غطاء محرك السيارة للانكداع الفوري لأي مواد أو سوائل كانت على اتصال مع الفيروس. ضع الماوس المُقنَّع على لوحة زرقاء معقمة في موضع الـ supine تحت المصباح مع ذيل الفأر الذي يواجه الجزء الخلفي من غطاء محرك السيارة وتأكد من عدم الاستجابة لدواسة منعكسة في الماوس. فهم الحيوان في قاعدة الذيل.
رفع بلطف الماوس من قاعدة الذيل، ودعم الحيوان في وضع مستقيم رأسا على عقب. استخدام تلميح أنبوب معقمة لتحفيز المنطقة التناسلية مع التمسيد لطيف حتى نحو فتحة الشرج للحث على إفراغ المستقيم وتخفيف الضغط على المهبل. لفضح فتحة المهبل، التفاف بعناية ذيل الماوس عبر الأصابع، بحيث يفتح الفرج بشكل طبيعي.
باستخدام طرف ماصة جديدة، وضع طرف على مستوى فتحة المهبل وإطلاق أضناماي 20 ميكرولترات من الفيروس في المهبل، مما يسمح للجاذبية لسحب تعليق الفيروسية في المهبل. عندما يتم تسليم كل الفيروس، احتفظ بالماوس في هذا الموقف لمدة خمس دقائق لتجنب تسرب الفيروس الناجم عن الجاذبية. ثم، عودة الماوس بعناية إلى قفصها الرئيسية في موقف supine ورصد حتى الشفاء الكامل.
لعزل الحمض النووي الريبي من عينات بلازما الماوس المذابة، استخدم طقم عزل الحمض النووي الريبي الفيروسي وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة. إضافة العينة التي تربط إلى العمود وإضافة خطوة العلاج DNase على العمود لضمان إزالة جميع الحمض النووي داخل عينة البلازما. ثم تخزين عينات الحمض النووي الريبي في 80 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة على الأقل.
لتجميع cDNA، استخدم النسخ العكسية وفقا للبروتوكولات القياسية، بما في ذلك 0.5 ميكرولترات من مثبط RNase ضمن رد فعل cDNA لتجنب تدهور الحمض النووي الريبي، ثم تنفيذ التوليف cDNA كما هو مفصل في الجدول وتخزين عينات cDNA في 80 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة على الأقل. لإعداد عينات لdPCR، مزيج 11 ميكرولتر من مزيج التفاعل ddPCR التحقيق التي تحتوي على البوليميراز وdNTPs مع 250 نانوموللار من الصغرى أخدود ملزمة التحقيق و 900 نانوموللار من كل من التمهيديات إلى الأمام وعكس، كما هو مبين في الجدول. إضافة ثلاثة ميكرولترات من كل عينة من عينات cDNA وضبط وحدات التخزين PCR الإجمالية إلى 22 ميكرولترات مع المياه الخالية من النوى.
استخدام زيت توليد قطرات لتحقيقات على مولد قطرات وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة للاستفادة من خلط PCR. ثم قم بتشغيل برنامج PCR كما هو موضح في الجدول. لعلاج cART بعد تأكيد الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية، قم بإطعام الفئران بالكريات التي أعدها بائع خارجي يحتوي على نظام CART قياسي، كما هو مبين في الجدول.
استخدم نظام cART ذو الألوان الحمراء لتمييزه بسهولة عن طعام الماوس العادي واستخدم نظام غذائي غذائي من دون cART بلون بني قياسي. لبدء العلاج، ضع نظام الطعام الذي يحتوي على cART في أقفاص معقمة قبل نقل الفئران من القفص القديم إلى القفص الجديد. ثم مراقبة الأوزان من الفئران والتحقق من استهلاك cART التي تحتوي على تشاو يوميا للتأكد من أن الفئران تتكيف مع التغيير.
هنا، يتم تصوير استراتيجية جسور التسالي الخلوية التدفق لتحليل نقاء الخلايا الجذعية، مع نقاء الخلايا الجذعية إيجابية CD34 معزولة تتراوح عادة بين 85 إلى 95٪ مع أقل من 1٪ T تلوث الخلايا. تحليل PCR يوضح CCR5 حالة متغير من الخلايا الجذعية المانحة النقية، مما يجعل CCR5 دلتا 32 heterozygous المانحين يمكن التعرف عليها بسهولة. وكان تواتر النمط الوراثي المتحول في مجموعة من 19 متبرعاً حوالي 15.8 في المائة بالاتفاق مع دراسات وبائية أكبر للسكان الاسكندنافيين.
بعد ثلاثة إلى خمسة أشهر من نقل بالتبني من 7.5 مرات 10 إلى الخلايا الإيجابية 4TH الإنسان CD45 في الفئران المتلقية, 20 إلى 50٪ من خلايا الدم البيضاء التي تم استردادها من المتلقي عينات الدم المحيطية الحيوانية هي الخلايا الإيجابية CD45 الإنسان والفئران سوف تكون قد وضعت الخلايا البشرية B و T. 64٪ من الفئران يصابون بفيروس نقص المناعة البشرية بعد التعرض المهبلي كما هو موضح. بعد أربعة أسابيع من التحول إلى نظام غذائي لمدة 40 يومًا يحتوي على CART قياسي ، تنخفض الأحمال الفيروسية في الفئران المصابة بفيروس نقص المناعة البشرية دون حد الكشف.
بعد توقف النظام الغذائي، ينتعش الفيروس، ويعكس البيانات السريرية. الأهم من ذلك، الفئران على cART تحمل التغيير في النظام الغذائي بشكل جيد. ومن الأهمية بمكان أن نتذكر أن هذه الحيوانات هي المناعة وبالتالي عرضة للبيئة.
ومن ثم فإن الالتزام بالتقنيات المُتعفنة سيزيد من نجاح الصحة العامة للالحيوانات والبروتوكول. وبعد إنشاء الفوج الماوس الأنساني للعدوى بفيروس نقص المناعة البشرية، يمكن تكييف البروتوكول مع القياس الكمي للرنا الفيروسي في الأنسجة أو لاختبار التدخلات الجديدة في سلالات فيروسية مختلفة. وقد مكنت مرونة الفئران البشرية وإمكانية الوصول إليها من دراسات الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية من إحراز تقدم حاسم في مجال علم الفيروسات والمناعة والعلاج.
قبل محاولة وضع بروتوكولات تتضمن فيروس نقص المناعة البشرية المعدية، تأكد من الحصول على موافقة المسؤولين المحليين في بيئة العمل والتقيد بإجراءات إزالة التلوث المعتمدة.
