والتسامح الحراري عنصر حاسم في توزيع الأنواع والاستجابات لتغير المناخ. هنا نقدم طرقا لتقييم الحرارة والتحمل البارد بسرعة في الحشرات الصغيرة. هذه الطرق لقياس التسامح الباردة، عن طريق الحد الأدنى الحراري الحرجة والتسامح الحرارة، عن طريق الحرارة طرقت أسفل الوقت هي الإنتاجية العالية، وشبه الآلي وتتطلب الحد الأدنى من المعدات.
إثبات الإجراء سيكون ديفيد أود، وهو ما بعد الدكتوراه من مختبري. لإعداد الحد الأدنى من الكاصير الحرارية الحرجة، والطاقة على درجة حرارة حوض السباحة السائل الضغط على زر التشغيل لتشغيل برنامج، ورفع والحفاظ على درجة حرارة الحمام إلى 25 درجة مئوية. انتظر من خمس إلى عشر دقائق للسماح لعمود الحمام السائل بالوصول إلى 25 درجة مئوية، قبل استبدال المكونات في أعلى العمود بمصفاة قطرها 5.08 سنتيمتر.
اضغط على ما يقرب من 40 الذباب من قارورة الطعام الخاصة بهم في العمود من خلال القمع واستبدال القمع بسرعة مع المكونات، مع الحرص على عدم السماح لأي الذباب الهروب. إذن، اسمح للذباب أن يستقر التنصت في بعض الأحيان على المكونات السفلية لتشجيع الذباب على الصعود.
بعد خمس دقائق، اضغط على زر البداية على كسب حمام السوائل، لبدء برنامج التهيّن الحراري الحرج. انقر لفتح برنامج تسجيل الزوجين الحرارية على الكمبيوتر وانقر فوق سجل لبدء تسجيل درجة الحرارة داخل العمود، كل ثانية لمدة المقايسة. تأكد من أن كل تسجيل درجة حرارة يتضمن الطابع الزمني الخاص بالثاني، بحيث يمكن دمج بيانات درجة الحرارة لاحقًا مع بيانات من شاشة قمع Drosophila.
إضافة خمسة ملليلترات من 90٪ الإيثانول إلى أنبوب جهاز طرد مركزي مخروطي 15 ملليلتر ووضع الأنبوب في رف تحت العمود. انقر أحيانًا على المكونات السفلية للعمود لإغراء أي ذباب في الأسفل لتسلقه. معظم الذباب سيكون على جثم أو بالقرب من أعلى العمود بنسبة 15 درجة مئوية.
عند 15 درجة مئوية، ضع قمعًا زجاجيًا خارجيًا قطره 75 ملليمترًا في جهاز قياس قمع Drosophila. إزالة المكونات السفلية وجمع أي الذباب لا يزال على المكونات في الإيثانول. اضبط الحلقة المُعوَّرة، وشاشة القمع، والتّهم، بحيث تكون تحت العمود.
تأكد من أن شفة القمع تختم أسفل العمود تمامًا وتُدخل أسفل القمع في أنبوب جمع 15 ملليلتر. افتح برنامج مراقبة قمع دروسوفيليا. سيبدأ البرنامج على الفور في تسجيل الوقت والتاريخ اللذين يصل فيهما الذباب إلى الحد الأدنى الحراري الحرج.
الذباب الذي يصل إلى الحد الأدنى الحراري الحرج ، سيفقد وظيفته العصبية العضلية ويسقط من جثمه ، من خلال جهاز قمع Drosophila. لرصد ما إذا كان كل من الذباب قد وصلت إلى الحد الأدنى الحرارية الحرجة، كما تنخفض درجة الحرارة، والتحقق من المكونات العليا والجثم لمعرفة ما إذا كان أي الذباب لا تزال جاثمة. عندما جميع الذباب، وصلت إلى الحد الأدنى الحرارية الحرجة، ونقل رصد قمع Drosophila والقمع بعيدا عن فتح العمود.
في مناسبات نادرة، قد يصل الذباب إلى الحد الأدنى الحراري الحرج، لكنه يبقى عالقًا في العمود. افتح المكونات العلوية لإزالة هذه الذبابات. لإعداد ارتفاع درجة الحرارة الإنتاجية هدمت أسفل فحص، واستخدام غطاء الطامح و الحاجز، لتحميل الذباب مخدّر ثاني أكسيد الكربون الفردية، في كل بئر من 96 تعديل جيدا لا لوحة أسفل وختم لوحة مع غطاء ضيق واضح المناسب.
ثم ضع الطبق على إمدادات من الطعام واسمح للذباب بالتأقلم مع لوحة 96 بئرًا لمدة 48 ساعة على الأقل. في يوم الفحص ، قم بتعيين الحاضنة إلى 37.5 درجة مئوية ، بعد 30 دقيقة ضع لوحة ثقافة الذبابة في الحاضنة مع الجزء السفلي من اللوحة ضد الورقة البيضاء على الجزء السفلي من الدرج. لاحظ اتجاه أسماء العمود والصف على الدرج وفي إطار كاميرا الويب ووضع الشريط الملون على طول جوانب وحواف اللوحة للمساعدة في التحقق من الاتجاه.
عندما اللوحة في موقف، إغلاق باب الحاضنة وانقر فوق سجل في برنامج تسجيل الفيديو. بعد ساعتين، تحقق من التسجيل لمعرفة ما إذا كان كل الذباب، قد وصلت إلى نقطة الراحة النهائية وتوقفت عن الحركة. عندما يتوقف كل الذباب عن الحركة، انقر فوق إيقاف والتخلص من الذباب.
فتح ملف الفيديو وتسجيل الوقت ضربة قاضية من كل ذبابة في كل بئر. المقياس الأكثر اتساقا من الحرارة التي هدمت أسفل التوقف بين التجارب والملاحظات هو الوقت الذي تصل ذبابة بقعة الراحة النهائية. ثم تتبع الفيديو في الاتجاه المعاكس، مع التركيز على بئر واحد و مشيرا إلى الوقت الذي تتحرك فيه الذبابة لأول مرة قبالة بقعة الراحة النهائية.
يمكن أن يكون من الصعب تحديد وقت الراحة النهائي لكل ذبابة. لضمان تحليل دقيق، من المهم أن تأخذ وقتك ومراقبة كل بئر بشكل فردي. في هذا التحليل التمثيلي، كان لدى الإناث من خط لوحة دروسفيلا المرجعية الوراثية، درجات حرارة أقل بكثير من متوسط الحد الأدنى الحراري من الإناث من خط DGRP 714.
وبالإضافة إلى ذلك، فإن الحرارة هدمت الوقت في 37.5 درجة مئوية، تختلف اختلافا كبيرا بين الإناث من خطوط 73 و 461 DGRP. مع تعديلات طفيفة، يمكن استخدام هذه الطريقة لقياس الحرارة هدم الوقت، لقياس الصفات الأخرى التسامح الحراري، مثل فترة الانتعاش البرد غيبوبة أو الحد الأقصى الحراري الحرجة. ومن خلال الحد بشكل كبير من الوقت العملي للمحققين، سمحت هذه الطرق باستكشاف الاختلافات الجينية وسمات التسامح الحراري على نطاق لم يكن ممكناً من قبل.
