بالقرب من العلاج الضوئي بالأشعة تحت الحمراء لنماذج الماوس للنشر الجنبي

يمكن استخدام هذه الطريقة لتقييم الآثار العلاجية ل NIR-PIT على أورام الصدر في نموذج الورم ذي الصلة سريريا. من السهل فهم وتنفيذ إجراءات NIR-PIT باستخدام نموذج السرطان الجنبي المنشور. لإعداد نموذج نشر الماوس، استخدم رغوة البوليسترين لصنع سدادة، وتطهيرها بالإيثانول بنسبة 70٪.

إرفاق الإبرة إلى سدادة مع طرف تمتد خمسة ملليمترات من سدادة. ثني غيض من إبرة قياس 30 مع ملقط نظيفة أو ضد كائن الثابت تنظيفها مع 70٪ الإيثانول، وملء حقنة مع مرة واحدة 10 إلى الخلايا السرطانية الستة المستهدفة في 100 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني. تأكيد عدم وجود استجابة لدواسة منعكس في تخدير، 19 إلى 21 غرام، ثمانية إلى 12 أسبوعا من العمر، أنثى، homozygote، الماوس عارية الترطيب.

أدخل الإبرة في الصدر عبر المساحة البينية، وتحريك الإبرة صعودا وهبوطا لتجنب الاتصال بالأضلاع. عندما يمر طرف من خلال الفضاء الوربي، وضع المحاقن بحيث يتم الضغط عليه ضد الماوس وحقن كامل حجم الخلايا المستهدفة. بعد الحقن، لفة الماوس مرتين إلى ثلاث مرات لنشر الخلايا في جميع أنحاء تجويف الصدر، والعودة الماوس إلى قفصه مع الرصد حتى الشفاء التام.

بعد 24 ساعة من حقن الخلية وكل يوم بعد ذلك، حقن الفئران حقن الخلايا السرطانية تخدير مع 200 ميكرولتر من 15 ملليغرام لكل ملليلتر من D-لوسيفيرين. بعد 10 دقائق، ضع الفئران في صورة الإضاءة الحيوية، وافتح لوحة التحكم في الاستحواذ في برنامج الصور. حدد الإنارة والصورة والتراكب.

تعيين وقت التعرض للسيارات، وBinning إلى الصغيرة، وF / وقف إلى واحد لLumnescent وثمانية للصورة الفوتوغرافية، ومجال الرؤية إلى C.Click الحصول على صورة الإضاءة الحيوية. تعيين تنسيق العرض إلى راديانس، وحدد الدائرة من "أدوات منطقة الاهتمام" في لوحة لوحة الأدوات. انقر فوق قياس المناطق ذات الأهمية لقياس كثافة الإنارة الحيوية السطحية، واستخدم تكوين القياس لتحديد القيم ذات الصلة بالتجربة.

تصدير جدول البيانات هذا كملف csv. ثم استخدم قيم التدفق الكلي لكمية كثافة الإنارة الحيوية في الملف. قبل إجراء العلاج الضوئي بالأشعة تحت الحمراء القريبة من الفئران التي حقنها الورم ، استخدم مقياس الطاقة لقياس الجرعة الخفيفة من ليزر الطول الموجي 690 نانومتر ، وضبط الناتج إلى 100 ملليواط لكل سنتيمتر مربع.

قبل 24 ساعة من العلاج ، حقنت عن طريق الوريد 100 ميكروغرام من جهاز حساسية الأجسام المضادة في 50 إلى 200 ميكرولتر من PBS عبر الوريد الذيل للحيوان الذي حقنه الورم. في يوم العلاج بالضوء ، ضع الماوس المحقون المحقون والمحمل بالورم في موضع السبق ، وحمى المواقع غير المستهدفة بورق الألومنيوم. عندما يتم وضع جميع الدروع، استخدم ليزر 100 جول لكل سنتيمتر مربع لتشعيع تجويف الصدر بضوء الأشعة تحت الحمراء القريب لمدة 30 ثانية تقريبا.

عندما يكتمل التشعيع واستيقظ الفأر ، أعد الحيوان إلى قفصه ، وقاس الإضاءة الحيوية يوميا كما هو موضح. في هذا التحليل التمثيلي، تم تأكيد اقتران الأجسام المضادة للبودوبلانين مع IR700 من خلال تحليل SDS-PAGE. بعد حقن الخلايا السرطانية ، يجب إجراء التصوير بالإضاءة الحيوية والتصوير المقطعي للتسليح المنتشر لتحديد الفئران التي تعبر عن نشاط لوسيفيراز كاف في تجويف الصدر لمزيد من الدراسة.

في اليوم الخامس بعد الحقن ، تظهر الفئران المضادة للبودوبلانين IR700 التي تم حقنها نسبة عالية من الفلورسينس IR700 ونشاط لوسيفيراز في أورام الصدر ، مما يشير إلى أن الجسم المضاد المترافق IR700 بالحقن عن طريق الوريد يصل إلى مواقع الأورام الجنبية المنشورة. وتجدر الإشارة إلى أن الفئران المنشورة الجنبية المعالجة بالعلاج الضوئي بالأشعة تحت الحمراء القريبة تظهر انخفاضا في نشاط لوسيفيراز، في حين تظهر وحدات الضوء النسبية في مجموعة التحكم زيادة تدريجية في الكثافة. نظرا لأن طاقة الإشعاع NIR المطلوبة تعتمد على خط الخلية والأجسام المضادة ، فتأكد من التحقق من الظروف مقدما في المختبر.