이 방법은 임상적으로 관련된 종양 모델에서 흉부 종양에 대한 NIR-PIT의 치료 효과를 평가하는 데 사용할 수 있다. 흉막 전파암 모델을 이용한 NIR-PIT 절차는 이해하기 쉽고 수행이 용이합니다. 마우스 보급 모델을 설정하려면 폴리스티렌 폼을 사용하여 스토퍼를 만들고 70% 에탄올로 소독합니다.
스토퍼에서 5밀리미터 를 연장하는 팁으로 바늘을 스토퍼에 부착합니다. 깨끗한 집게로 30 게이지 바늘의 끝을 구부리거나 70%에탄올로 세척된 단단한 물체에 대해 구부리고, PBS의 100마이크로리터에서 6개의 표적 종양 세포에 1회 10번 주사기를 채웁니다. 마취, 19 ~ 21 그램, 8 ~ 12 주 된, 여성, homozygote, 아티믹 누드 마우스에서 페달 반사에 대한 반응의 부족을 확인합니다.
간 비용을 통해 가슴에 바늘을 삽입하여 바늘을 위아래로 움직이면서 갈비뼈에 닿지 않도록 하십시오. 팁이 늑간 공간을 통과하면 주사기를 배치하여 마우스에 대고 누를 수 있도록 하고 대상 셀의 전체 부피를 주입합니다. 주입 후 마우스를 2~3회 굴려 흉부 구멍 전체에 세포를 퍼뜨리고 마우스를 전체 복구할 때까지 모니터링하여 케이지로 되돌린다.
세포 주입 후 24 시간 및 그 후 매일, 마취 종양 세포 주입 마우스를 주입 200 마이크로 리터 의 15 D-luciferin의 밀리 리터 당 밀리 그램. 10분 후 생발광 이미저에 마우스를 넣고 이미저 소프트웨어에 획득 제어판을 엽니다. 발광, 사진 및 오버레이를 선택합니다.
오토에 노출 시간, 작은 비닝, F/스톱을 발광용으로, 사진에 대한 8개, C.Click에서 의 시야를 사용하여 생물 발광을 이미지화합니다. 디스플레이 형식을 Radians로 설정하고 도구 팔레트 패널의 관심 영역 도구에서 원을 선택합니다. 관심 영역 측정을 클릭하여 표면 생물 발광 강도를 측정하고 측정 구성을 사용하여 실험과 관련된 값을 선택합니다.
이 데이터 테이블을 csv 파일로 내보냅니다. 그런 다음 파일내의 생물 발광 강도 정량화에 대한 총 플럭스 값을 사용합니다. 종양 주입 마우스의 근적외선 광요법을 수행하기 전에 파워 미터를 사용하여 690 나노미터 파장 레이저의 광 용량을 측정하고 출력을 평방 센티미터당 100 밀리와트로 조정합니다.
치료 24시간 전, 종양 주입 동물의 꼬리 정맥을 통해 PBS의 50~200 마이크로리터에 항체 광석 원두 100 마이크로그램을 정맥 주사했다. 광치료 치료 당일, 마취된 공주포를 주입하고 종양이 함유된 마우스를 척추 위치에 배치하고, 알루미늄 호일로 비표적 부위를 보호한다. 모든 방패가 배치되면 평방 센티미터당 100 줄-줄-100-jules-100-jules-10meter 레이저를 사용하여 약 30초 동안 근적외선으로 흉부 구멍을 조사합니다.
조사가 완료되고 마우스가 깨어났을 때 동물을 케이지로 돌려보내서 입증된 대로 매일 생체 발광을 측정합니다. 본 대표적인 분석에서, IR700을 가진 항포도플라닌 항체의 결합은 SDS-PAGE 분석에 의해 확인되었다. 종양 세포 주입 후, 생체 발광 이미징 및 확산 발광 화상 진찰 단층 촬영은 추가 연구를 위해 흉부 에서 충분한 루시파라기 활성을 발현하는 마우스를 결정하기 위해 수행되어야한다.
주사 후 5일째에, 항포도플라닌 항체 IR700-주입마우스는 흉부 종양에서 높은 IR700 형광 및 루시파제 활성을 입증하여 정맥 주사IR700-컨쥬게이트 항체가 보급된 흉막 종양 부위에 도달함을 나타낸다. 특히, 근적외선 광면역요법으로 치료된 흉막 전파 마우스는 감소된 루시파아제 활성을 나타내며, 대조군내 상대광단위는 강도의 점진적 증가를 나타낸다. 필요한 NIR 조사 에너지는 세포주 및 항체에 달려 있기 때문에 시험관 내에서 사전에 상태를 확인하십시오.
