この方法は、臨床的に関連する腫瘍モデルにおける胸部腫瘍に対するNIR-PITの治療効果を評価するために使用することができる。胸膜播種癌モデルを用いたNIR-PITの処置は理解し、実行しやすい。マウスの普及モデルを設定するには、ポリスチレンフォームを使用してストッパーを作り、70%エタノールで消毒します。
針をストッパーに取り付け、先端を栓から5ミリメートル伸ばします。清潔な鉗子で、または70%エタノールで洗浄された硬い物に対して30ゲージの針の先端を曲げ、PBSの100マイクロリットルの6つの標的腫瘍細胞に1回10で注射器を充填する。麻酔でペダル反射への応答の欠如を確認します, 19〜 21グラム, 8〜12週齢, 女性, ホモ接合, 高胸腺ヌードマウス.
肋間空間を通して針を胸に挿入し、肋骨に接触しないように針を上下に動かします。先端が肋間空間を通過したら、マウスに押し付けられてターゲットセルの全容を注入するようにシリンジを置きます。注射後、マウスを2~3回ロールして胸腔全体に細胞を広げ、完全に回復するまでモニタリングしてマウスをケージに戻します。
細胞注射の24時間後及びその後毎日、麻酔化された腫瘍細胞注入マウスに、D-ルシフェリン1ミリリットル当たり15ミリグラムの200マイクロリットルを注入する。10 分後、マウスを生物発光イメージャーに入れ、取得コントロールパネルをイメージャーソフトウェアで開きます。[ルミネセント]、[写真]、[オーバーレイ]を選択します。
[露出時間] を [自動]、[ビニング] を [小] に、[F/ストップ] を [ルミネセント] に 1、写真用に 8 回に設定し、[C. ビューのフィールド] をクリックして生物発光を画像化します。表示形式をラジアンに設定し、[ツール パレット]パネルの[対象ツールの領域]から円を選択します。[対象領域を測定]をクリックしてサーフェスの生物発光強度を測定し、[測定を設定]を使用して実験に関連する値を選択します。
このデータ テーブルを csv ファイルとしてエクスポートします。次に、ファイル内の生物発光強度定量の合計フラックス値を使用します。腫瘍注入マウスの近赤外光線療法を行う前に、パワーメーターを使用して690ナノメートル波長レーザーの光量を測定し、出力を平方センチメートルあたり100ミリワットに調整します。
治療の24時間前に、腫瘍注入動物の尾静脈を介してPBSの50〜200マイクロリットルに100マイクログラムの抗体光化剤を静脈内注射する。光線療法の日に、麻酔付き共役剤を注入した腫瘍を含むマウスを、スピーニン位置に置き、非標的部位をアルミニウム箔で遮蔽する。すべてのシールドを配置したら、100ジュール/平方センチメートルのレーザーを使用して、胸腔に近赤外光を約30秒間照射します。
照射が完了し、マウスが目覚めると、動物をケージに戻し、実証したように毎日生物発光を測定する。本代表分析では、IR700による抗ポドプラニン抗体の結合がSDS-PAGE分析により確認された。腫瘍細胞注射後、生物発光イメージングおよびびまん性発光イメージング断層撮影を行い、胸腔内で十分なルシメラーゼ活性を発現するマウスを決定して、さらなる研究を行う必要があります。
注射後5日目に、抗ポドプラニン抗体IR700注射マウスは、胸部腫瘍における高いIR700蛍光およびルシメラーゼ活性を示し、IR700結合体抗体が播種された胸膜腫瘍部位に到達することを示す。特に、近赤外光線免疫療法で治療された胸膜拡散マウスはルシファーゼ活性の低下を示し、対照群の相対光単位は徐々に強度の増加を示す。必要なNIR照射エネルギーは細胞系や抗体に依存するため、事前にインビトロで条件を確認してください。
