Этот метод может быть использован для оценки терапевтического воздействия NIR-PIT на опухоли грудной клетки в клинически значимой модели опухоли. Процедуры NIR-PIT с использованием модели диссеминированного рака плевры просты для понимания и выполнения. Чтобы создать модель распространения мыши, используйте пенополистирол для изготовления пробки и дезинфицируйте ее 70% этанолом.
Прикрепите иглу к пробке с наконечником, выходящим на пять миллиметров от пробки. Согните кончик иглы 30-го калибра чистыми щипцами или против твердого предмета, очищенного 70% этанолом, и заполните шприц одним раз 10 до шести опухолевых клеток-мишеней в 100 микролитрах PBS. Подтверждают отсутствие реакции на педальный рефлекс у анестезируемой, от 19 до 21 грамм, от восьми до 12 недель, самки, гомозиготной, атипичной обнаженной мыши.
Вставьте иглу в грудную клетку через межреберное пространство, перемещая иглу вверх и вниз, чтобы избежать контакта с ребрами. Когда наконечник пройдет через межребрюшное пространство, расположите шприц так, чтобы он был прижат к мыши, и введите весь объем клеток-мишеней. После инъекции перекатывайте мышь два-три раза, чтобы распределить клетки по всей грудной полости, и верните мышь в свою клетку с наблюдением до полного выздоровления.
Через 24 часа после инъекции клеток и каждый день после этого вводите анестезированным мышам, введенным опухолевым клеткам, 200 микролитров по 15 миллиграммов на миллилитр D-люциферина. Через 10 минут поместите мышей в биолюминесцентный изобразователь и откройте панель управления сбором в программном обеспечении для работы с изображением. Выберите Люминесцентный, Фотографический и Наложенный.
Установите время экспозиции в значение Auto, binning в Small, F/Stop в один для Люминесцентного и в восемь для Фотографии, а поле зрения в C.Click Acquire для изображения биолюминесценции. Задайте для параметра Формат отображения значение Radians и выберите круг в палитре «Область интереса» на панели «Палитра инструментов». Щелкните Измерить интересующих областей, чтобы измерить интенсивность биолюминесцентной поверхности, и используйте Настроить измерение для выбора значений, относящихся к эксперименту.
Экспортируйте эту таблицу данных в виде CSV-файла. Затем используйте общие значения потока для количественной оценки интенсивности биолюминесцентных веществ в файле. Прежде чем выполнять фототерапию мышей, введенных в ближний инфракрасный диапазон, используйте измеритель мощности для измерения световой дозы лазера с длиной волны 690 нанометров и отрегулируйте выход до 100 милливатт на квадратный сантиметр.
За 24 часа до начала лечения внутривенно вводят 100 мкг фотосенсибилизатора антител, конъюгированных в 50-200 микролитрах PBS через заднюю вену опухолевого инъецированного животного. В день лечения фототерапией поместите анестезированную конъюгированную, насыщенную опухолью мышь в положение лежа на спине и защитите нецелевые участки алюминиевой фольгой. Когда все щиты будут размещены, используйте лазер со счетом 100 джоулей на квадратный сантиметр для облучения грудной полости ближним инфракрасным светом в течение примерно 30 секунд.
Когда облучение завершено и мышь проснулась, верните животное в клетку и ежедневно измеряйте биолюминесценцию, как показано. В этом репрезентативном анализе конъюгация антитела против подопланина с IR700 была подтверждена анализом SDS-PAGE. После инъекции опухолевых клеток следует выполнить биолюминесцентную визуализацию и диффузную люминесцентную томографию, чтобы определить, какие мыши экспрессуют достаточную активность люциферазы в грудной полости для дальнейшего изучения.
На пятый день после инъекции мыши, введенные антитела ir700, демонстрируют высокую флуоресценцию IR700 и активность люциферазы в опухолях грудной клетки, что указывает на то, что внутривенно вводимо вводимое IR700-конъюгированное антитело достигает диссеминированных участков плевральной опухоли. Примечательно, что плевральные диссеминированные мыши, получавших фотоиммунотерапию в ближнем инфракрасном диапазоне, демонстрируют снижение активности люциферазы, в то время как относительные световые единицы в контрольной группе демонстрируют постепенное увеличение интенсивности. Поскольку требуемая энергия облучения NIR зависит от клеточной линии и антител, обязательно заранее проверьте условия in vitro.
