يستخدم هذا البروتوكول التحليل النسيجي للحصول على قياسات مورفومية قوية لجروح ختان الماوس. باستخدام هذه التقنية، يمكننا تحليل الجرح بأكمله باستخدام مجموعة فرعية من المقاطع التسلسلية، مما يسمح لنا بالكشف بشكل أكثر دقة عن العيوب التي قد لا يمكن تفويتها. إثبات الإجراء سيكون ليندسي ريا، باحث مشارك من مختبري.
بعد التأكد من عدم وجود استجابة لدواسة منعكس في الماوس الكبار تخدير، وتطبيق مرهم على عيون الحيوان واستخدام مقص الحلاقة الكهربائية في حركة caudal-rostral لإزالة الفراء على الجزء الخلفي من الماوس على مستوى الكتف. استخدام شفرة الحلاقة التي عقدت في زاوية 20 درجة من الخلف في حركة rostral-caudal لإزالة أي الشعر المتبقية من الجلد المكشوف، ثم تنظيف الجلد مع اليود povidone واحد واحد 70٪ isopropyl الكحول الإعدادية مسح وسادة. لتحريض الجرح، ستائر منشفة نظيفة على ورقة على سطح مستو مغطاة بالشمع الأسنان ووضع الماوس على منشفة في موقف عرضة.
قرصة جلد الماوس بين ريش الكتف على طول خط الوسط الظهر وسحب الجلد تقع أضعاف بعيدا عن الجسم. تحويل الماوس إلى وضعية جانبية، وضع لكمة خزعة من حجم الجرح المطلوب أقرب إلى الجسم قدر الإمكان والسماح للبشرة الاسترخاء. اضغط لأسفل على لكمة باستخدام حركة هزاز لثقب جميع طبقات الجلد وإزالة الخزعات لكمة من الجرح باستخدام مقص معقم وملاقط لتحرير لكمة من الجلد المحيطة بها عند الضرورة.
ثم تسمح للماوس لاسترداد مع الرصد وال مسكن. لتحليل morphometric من سرير الجرح، وفتح صورة الجرح الملون الرقمية. لتعيين تفضيلات المقياس والقياس، ضمن تحليل، حدد تعيين مقياس وأدخل المسافة بالبكسل والمسافة المعروفة ووحدة الطول.
حدد العمومية و موافق للاحتفاظ بالمقياس نفسه لكل صورة مفتوحة وحدد تحليل و تعيين قياسات للتأكد من تحديد خانة المنطقة. لقياس طول الجرح، حدد حر، واستخدام أداة لتتبع على طول تقاطع الجلد البشرة، بدءا من بصيلات الشعر الأخيرة من الأنسجة غير المصابة على جانب واحد من الجرح إلى بصيلات الشعر الأولى من الأنسجة غير المصابة على الجانب الآخر. إذا لم تغطي البشرة الجرح بأكمله ، فاتبع تقاطع البشرة الجلدي على جانب واحد من الجرح حيث ينتهي اللسان المهاجر ويستمر في متابعة الجانب المتفوق من أنسجة التحبيب أو التقاطع بين أنسجة التحبيب والجرب حتى يتم الوصول إلى اللسان المهاجر وجريب الشعر الأول من الأنسجة غير المصابة على الجانب الآخر من الجرح.
ثم انقر فوق تحليل وقياس. سيظهر طول القياس في نفس الوحدات كما هو مُحدد في المقياس. إذا لم يغطي البشرة الجرح بأكمله، قم بقياس المسافة بين كل حافة رائدة للبشرة تتبع الجانب المتفوق من نسيج التحبيب أو الوصل بين أنسجة التحبيب والجرب إلى بصيلات الشعر الأولى.
لقياس منطقة الجرح، استخدم أداة اليد الحرة لتتبع على طول الجانب المتفوق من البشرة أو الجانب المتفوق من نسيج التحبيب بدءا من بصيلات الشعر الأخيرة من الأنسجة غير المصابة على جانب واحد من الجرح إلى بصيلات الشعر الأولى من الأنسجة غير المصابة على الجانب الآخر. الاستمرار في تتبع عموديا على طول بصيلات الشعر في أنسجة التحبيب. مرة واحدة يتم التوصل إلى بصيلات الشعر المقابلة والأنسجة الدهنية أو العضلات، اتبع الحدود السفلية من أنسجة التحبيب إلى الجانب الآخر من الجرح والانضمام إلى نقطة البداية على طول بصيلات الشعر لإغلاق المنطقة.
إذا لم يكن الجرح ظهاراً كاملاً، فتتبعه على طول الجانب المتفوق من البشرة حتى الحافة الرائدة واعود إلى نقطة البداية التالية لتقاطع البشرة الجلدي. كما هو موضح، عند أخذ قياسات 2D في جميع أنحاء الجرح بأكمله، كنا قادرين على حساب المعلمات غير ممكن مع تحليل 2D على منتصف الجرح فقط، وهو أسلوب شائع الاستخدام في هذا المجال. في هذه التجربة، استخدمت قياسات 2D لمنطقة الجرح ومتوسط على الجرح كله أو مجموعة فرعية الأوسط من الجرح وكشفت عن أي فرق كبير بين المجموعات التجريبية أو طرق التحليل.
غير أن حجم الجرح المحسوب كان مختلفاً اختلافاً كبيراً بين المجموعات التجريبية، مما يدل على أهمية التحليل النسيجي المتعمق لبارامترات التئام الجروح. إن توليد جروح ذات حجم ثابت للتحليل النسيجي وإجراء أقسام تسلسلية صارمة أمران حاسمان لتحليل دقيق للمورفوميات. يمكن استخدام الأقسام غير الملطخة للفلوروس المناعية أو تلطيخ ماسون ثلاثي الألوان لقياس جوانب أخرى من التئام الجروح بينما يمكن استخدام الجروح المجمدة إلى جانب القياس المرفّع للتحليل الكمي للبروتين.
