Bu protokol, fare eksizyonel yaralarının sağlam morfometrik ölçümlerini elde etmek için histolojik analizi kullanır. Bu tekniği kullanarak, seri bölümlerin bir alt kümesini kullanarak tüm yarayı analiz edebilir, böylece aksi takdirde gözden kgelebilecek kusurları daha doğru bir şekilde tespit edebiliriz. Prosedürü gösteren Lindsey Rhea, benim laboratuvar bir araştırma görevlisi olacaktır.
Anestezili yetişkin farede pedal refleksine yanıt eksikliğini doğruladıktan sonra, hayvanın gözlerine merhem uygulayın ve omuz seviyesinde farenin arka sındaki kürkü çıkarmak için kaudal-rostral hareketle elektrikli jiletli makas kullanın. Maruz kalan tüyleri açığa çıkarmak için arkadan 20 derecelik açıyla tutulan bir jilet kullanın, ardından bir povison iyot ve %70 isopropil alkol hazırlık pedi silme ile cildi temizleyin. Yara indüksiyonu için, temiz bir kağıt tabanlı havluyu diş balmumuyla kaplı düz bir yüzeye yerleştirin ve fareyi uygun pozisyonda havlunun üzerine yerleştirin.
Farenin derisini sırt orta hattı boyunca kürek kemikleri arasında sıkıştırın ve sandviçli deriyi vücuttan katlamaya çekin. Fareyi yan yatan bir pozisyona getirerek, istenilen yara büyüklüğünde bir biyopsi yumruğu nu vücuda mümkün olduğunca yakın bir yere yerleştirin ve cildin rahatlamasını bekleyin. Derinin tüm katmanlarını delmek için sallanan bir hareket kullanarak yumruğu bastırın ve gerekli olduğu gibi çevredeki deriden yumruk serbest etmek için steril makas ve cımbız kullanarak yaradan yumruk biyopsileri kaldırın.
Sonra fare izleme ve analjezi ile kurtarmak için izin verin. Yara yatağının morfometrik analizi için dijital lekeli yara görüntüsü açın. Ölçek ve ölçüm tercihlerini belirlemek için, Analiz altında Ölçek Ayarla'yı seçin ve piksellere, bilinen uzaklıkta ve uzunluk birimine mesafeyi girin.
Her açık görüntü için ölçeği aynı tutmak için Genel ve Tamam'ı seçin ve alan kutusunun işaretli olduğunu doğrulamak için Ölçümleri Analiz ve Ayarla'yı seçin. Yara uzunluğunu ölçmek için, serbest el seçin ve dermal-epidermal kavşak boyunca izlemek için aracı kullanın, yaranın bir tarafında yaralanmamış dokunun son saç folikülbaş diğer tarafta yaralanmamış doku ilk saç folikül. Epidermis yaranın tamamını kaplamazsa, göçük dilin bittiği yaranın bir tarafındaki dermal-epidermal kavşağı takip edin ve granülasyon dokusunun üstün yönünü veya granülasyon dokusu ile kabuk arasındaki kavşağı takip etmeye devam edin, ta ki göç eden dil ve yaranın diğer tarafındaki yaralanmamış dokunun ilk saç folikülü ne kadar.
Ardından Analiz et ve Ölç'i tıklatın. Ölçümün uzunluğu, ölçekte ayarlanan birimlerde görünür. Epidermis yaranın tamamını kaplamazsa, granülasyon dokusunun üstün yönünü veya granülasyon dokusu ile ilk saç folikülüne giden kabuk arasındaki kavşağı takip eden her epidermal öncü kenar arasındaki mesafeyi ölçün.
Yara alanını ölçmek için, yaranın bir tarafındaki yaralanmamış dokunun son saç folikülünden başlayarak epidermisin üstün yönünü veya granülasyon dokusunun üstün yönünü takip etmek için serbest el aracını kullanın. Granülasyon dokusuiçine saç folikülü boyunca dikey takip etmeye devam edin. Karşı saç folikülü ve yağ dokusu veya kas ulaşıldıktan sonra, yaranın karşı tarafına granülasyon dokusunun alt sınırını takip edin ve alanı kapatmak için saç folikülü boyunca başlangıç noktasına katılın.
Yara tam olarak epitelize değilse, önden gelen etekkadar epidermisin üstün yönü boyunca iz ve dermal-epidermal kavşak aşağıdaki başlangıç noktasına dönmek. Gösterildiği gibi, yaranın tamamında 2D ölçümler yaparken, sadece yaranın ortasında 2D analizi ile mümkün olmayan parametreleri hesaplayabildik, bu da sahada yaygın olarak kullanılan bir yöntemdir. Bu deneyde yara alanının 2D ölçümleri kullanıldı ve yaranın tüm veya orta alt kümesi üzerinde ortalama olarak kullanıldı ve deney grupları ile analiz yöntemleri arasında anlamlı bir fark saptanmama.
Ancak hesaplanan yara hacmi deney grupları arasında anlamlı olarak farklı ydı ve yara iyileşme parametrelerinin derinlemesine histolojik analizinin önemini gösterdi. Histolojik analiz için sürekli boyutlu yaralar üretmek ve doğru bir morfometrik analiz için çok önemlidir. Lekesiz kesitler, yara iyileşmesinin diğer yönlerini ölçmek için immünoresans veya Masson'un trikrom boyaması için kullanılabilirken, flaş dondurulmuş yaralar kantitatif protein analizi için morfometri ile birlikte kullanılabilir.
