هذا البروتوكول يحفز ارتفاع السكر في الدم في سمك الحمار الوحشي في نمط الارتفاع والانخفاض الذي يحاكي ارتفاع السكر في الدم الذي ينظر إليه في مرض السكري من النوع الثاني. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تقنية غير الباضعة التي تجعل من الممكن التأكد من أن فرط السكر في الدم هو سبب أي تعديلات لوحظت في الأسماك التي تعاني من فرط السكر في الدم. يمكن استخدام هذا البروتوكول لاستكشاف السبل العلاجية أو المستحضرات الصيدلانية التي تستهدف مضاعفات ارتفاع السكر في الدم.
هذا البروتوكول لديه الكثير من الخطوات، ولكن عندما يتم اتباع الخطوات بشكل صحيح وبعناية، فإنه ينبغي أن تصبح بسرعة طبيعة ثانية. تذكر مع ذلك، أن تعامل الحيوانات دائما بلطف وإنسانية في جميع أنحاء البروتوكول بأكمله. ابدأ بإعداد ستة خزانات، اثنتان لكل مجموعة تجريبية.
استخدام خزانات لترين، إذا كان العدد الإجمالي للأسماك أقل من 20 وأربعة لتر خزانات إذا كان العدد الإجمالي للأسماك أكثر من 20. تسمية واحدة من اثنين من الدبابات، وخزان الإسكان وخزان الحل الأخرى. الحفاظ على الخزانات في حمام مائي في 28 إلى 29 درجة مئوية للحفاظ على درجة حرارة المياه.
في اليوم الأول، ضع السمكة في حلول العلاج الخاصة بها لمدة 24 ساعة. في اليوم الثاني، نقل الأسماك من حلول المعالجة الخاصة بهم إلى الماء لمدة 24 ساعة. في اليوم الثالث، نقل الأسماك من الماء إلى حلول المعالجة.
استمر في هذا التعرض المتناوب لبقية التجربة. نقل المياه المعالجة السيطرة على الأسماك من الماء إلى الماء يوميا. تأكد من تغذية الأسماك ونقلها في نفس نافذة ساعتين كل يوم طوال مدة التجربة.
نقل الأسماك في كل مجموعة معالجة من خزان الإسكان إلى خزان الحل المقابل باستخدام شبكة سمك قياسية. ضع الخزان الذي يحتوي على السمكة مرة أخرى في حمام الماء واستبدل حجر الهواء وغطاء الخزان. هذا الخزان هو الآن خزان الإسكان والصهريج الذي كان يحمل الأسماك في السابق هو الآن خزان الحل.
تجاهل الحل القديم وتنظيف الخزان جنبا إلى جنب مع أغطية الخزان، وخطوط الهواء، وأحجار الهواء والشباك لمنع تراكم الجلوكوز والمانيتول. استخدام المياه والإسفنج مخصصة لكل حالة العلاج لتنظيف الخزانات بشكل صحيح. جفف خزانات الحلول التي تم تنظيفها حديثا بمنشفة ورقية واستعد الحلول لليوم التالي باستخدام هذا الخزان.
تأكد من تجفيف العناصر الأخرى وفصلها من قبل مجموعات العلاج المناسبة. لإعداد حلول السكر، قم بتعبئة كل خزان حل بلترين أو أربعة لترات من مياه النظام. قياس الكمية الصحيحة من الجلوكوز والمانيتول باستخدام مقياس التحميل العلوي وقوارب وزن منفصلة لكل مادة كيميائية.
إضافة الجلوكوز وزنها أو مانيتول aliquot إلى خزان الحل النظيف المناسب. يحرك المحاليل بقضبان زجاجية منفصلة حتى تذوب السكريات تماما. ثم العودة خزانات الحل إلى حمام الماء وتغطيتها مع الأغطية المقابلة لها.
لإعداد محلول المياه، وملء خزانات تجريبية مع مياه النظام عودة هذه الخزانات حل لحمام المياه وتغطيتها مع الأغطية المقابلة لها. ورتفعت قيم السكر في الدم بشكل ملحوظ بعد كل من أربعة أسابيع وثمانية أسابيع من علاجات الجلوكوز. مع ارتفاع السكر في الدم كما هو معرف بثلاثة أضعاف متوسطات التحكم من كل من معالجة المياه والمجموعات المعالجة مانيتول.
أنسجة الشبكية التي تم جمعها بعد أربعة أسابيع من ارتفاع السكر في الدم كان زيادة في البروتين الحمضي الرجفان الدبقية أو مستويات GFAP. لوحظ تعبير GFAP في خلايا مولر الدبقية في شبكية العين ، والتي يتم تغييرها في اعتلال الشبكية السكري. وارتبطت هذه الزيادة في برنامج العمل العالمي بزيادة في مستويات العامل النووي كاباب.
مما يشير إلى أن فرط السكر في الدم المستحث يؤدي إلى استجابة التهابية وغلية تفاعلية. حددت تسجيلات ERG بعد أربعة أسابيع من العلاج استجابة انخفاض في شبكية العين المعالجة بالجلوكوز مقارنة بعناصر التحكم المعالجة من مانيتول. وانخفضت السعة لكل من المستقبل الضوئي ومكونات الخلايا ثنائية القطب في الأسماك المفرطة السكر في الدم.
يمكن استكمال هذا الإجراء باختبارات أخرى لارتفاع السكر في الدم. على سبيل المثال، يمكن استخدام فحص الذاكرة للنظر في العجز المعرفي أو تسجيل الاستجابات البصرية القائمة مثل الاستجابة البصرية لتقييم المضاعفات القائمة على الرؤية. بمجرد إنشاء هذه التقنية ، تمكن مختبرنا من استخدامها لدراسة المضاعفات الناجمة عن فرط السكر في الدم في نموذج سمك الحمار الوحشي.
لاحظنا هذه المضاعفات بسرعة نسبية، بعد أربعة أسابيع من العلاج.
