ゼブラフィッシュで長期高血糖を生み出すグルコースの交互浸漬

このプロトコルは、2型糖尿病に見られる高血糖を模倣する上昇と下降パターンでシマウマ魚の高血糖を誘導する。この技術の主な利点は、高血糖が高血糖魚に観察されるあらゆる変化の原因であることを保証することを可能にする非侵襲的な技術である。このプロトコルは、高血糖の合併症を標的とする治療手段または医薬品を探索するために使用される可能性があります。

このプロトコルには多くの手順がありますが、手順が正しく、注意して実行されると、すぐに第 2 の性質になるはずです。しかし、常にプロトコル全体を通して穏やかに人道的に動物を扱うことを覚えておいてください。最初に、実験グループごとに2つずつ、6つのタンクを設置します。

魚の総数が20を超える場合は、魚の総数が20未満の場合は2リットルのタンクを使用し、4リットルのタンクを使用してください。2つのタンクのうちの1つ、ハウジングタンクと他のソリューションタンクのラベル。水温を維持するために、水浴槽に28〜29°Cに保ちます。

1日目に、魚をそれぞれの治療溶液に24時間置きます。2日目に、魚を処理液から24時間水に移します。3日目に、魚を水から処理液に移します。

実験の残りの部分については、この交互の露出を続けます。水から水への魚を水から毎日処理した制御魚を移動します。魚が毎日同じ2時間のウィンドウ内で、実験の間、餌を与えられ、転送されることを確認します。

各処理群の魚を、標準的な魚網を使用して、住宅タンクから対応する溶液タンクに移します。魚を含むタンクを水浴に戻し、エアストーンとタンク蓋を交換します。このタンクは現在、住宅タンクであり、以前に魚を保持していたタンクは、現在、ソリューションタンクです。

古い溶液を捨てて、タンクの蓋、エアライン、エアストーン、ネットとともにタンクを清掃して、グルコースとマンリトールの蓄積を防ぎます。水と専用スポンジを使用して、各処理条件にタンクを適切に洗浄します。新しく洗浄した溶液タンクをペーパータオルで乾かして、このタンクを使用して翌日の溶液を準備します。

他の項目は乾燥し、適切な処置群によって分離されていることを確認してください。砂糖溶液を調製するには、各溶液タンクに2~4リットルのシステム水を充填します。トップローディングスケールを使用してグルコースとマンニートールの正しい量を測定し、各化学物質のボートを別々に計量します。

適切なクリーン溶液タンクに、計量したグルコースまたはマンリトールアリコートを加えます。砂糖が完全に溶解するまで、別々のガラス攪拌棒で溶液をかき混ぜます。その後、水浴に溶液タンクを返し、対応する蓋でそれらをカバーしています。

水溶液を準備するには、実験用タンクをシステム水で満たし、これらの溶液タンクを水浴に戻し、対応する蓋で覆います。血糖値は、4週間と8週間の両方のグルコース治療の後に有意に上昇した。高血糖症を3倍と定義すると、水処理群とマンリトール処理群の両方からの対照平均が示された。

4週間の高血糖後に採取したレチナル組織は、グリア性原線維性酸性タンパク質またはGFAPレベルの増加を有していた。GFAP発現は、糖尿病性網膜症で変化する網膜のミューラーグリア細胞で観察される。GFAPのこの増加は、核因子κBレベルの増加に関連していた。

誘発された高血糖が炎症反応および反応性神経症を引き起こすことを示唆する。4週間の治療後のERG記録は、マンニトール処理対照と比較してグルコース処理されたレチナにおける応答の減少を同定した。高血糖魚では、光受容体とバイポーラ細胞成分の両方の振幅が減少した。

この手順は、高血糖の他のテストによって補完することができます。.例えば、メモリアッセイを使用して、認知障害を調べたり、視覚に基づく合併症を評価するための眼運動応答などの視覚ベースの応答を記録することができます。この技術が確立されると、私たちの研究室はシマウマ魚モデルにおける高血糖誘発合併症を研究するためにそれを使用することができました。

我々は、治療の4週間後に、比較的迅速にこれらの合併症を観察した。