פרוטוקול זה גורם היפרגליקמיה בדגי זברה בדפוס עלייה ונפילה המחקה את היפרגליקמיה הנראית בסוכרת מסוג 2. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא כי היא טכניקה פולשנית המאפשרת להבטיח כי היפרגליקמיה היא הגורם לכל שינויים שנצפו דגים היפרגליקמיים. פרוטוקול זה יכול לשמש באופן פוטנציאלי כדי לחקור אפיקים טיפוליים או תרופות כי היעד סיבוכים של היפרגליקמיה.
פרוטוקול זה יש הרבה צעדים, אבל כאשר השלבים מתבצעים כראוי ובזהירות, זה צריך להפוך במהירות טבע שני. זכור עם זאת, תמיד להתייחס לבעלי החיים בעדינות ובהומאניות לאורך כל הפרוטוקול. התחל על ידי הקמת שישה טנקים, שניים לכל קבוצת ניסוי.
השתמש שני מיכלי ליטר, אם המספר הכולל של דגים הוא פחות מ 20 וארבעה מיכלי ליטר אם המספר הכולל של דגים הוא יותר מ 20. סמן את אחד משני הטנקים, מיכל הדיור ואת מיכל הפתרון השני. שמור את המיכלים באמבט מים ב 28 עד 29 מעלות צלזיוס כדי לשמור על טמפרטורת המים.
ביום הראשון, מניחים את הדגים בפתרונות הטיפול שלהם במשך 24 שעות. ביום השני, מעבירים את הדגים מפתרונות הטיפול שלהם למים למשך 24 שעות. ביום השלישי, להעביר את הדגים ממים לפתרונות טיפול.
המשיכו בחשיפה לסירוגין להמשך הניסוי. העברת מים מטופלים דגי בקרה ממים למים מדי יום. ודא שהדגים ניזונים ומועברים באותו חלון של שעתיים בכל יום לאורך כל תקופת הניסוי.
מעבירים דגים בכל קבוצת טיפול ממיכל הדיור למיכל הפתרון המתאים באמצעות רשת דגים סטנדרטית. מניחים את המיכל המכיל את הדגים בחזרה באמבט המים ומחליפים את אבן האוויר ואת מכסה המיכל. הטנק הזה הוא עכשיו מיכל הדיור והמיכל שהחזיק בעבר את הדגים הוא עכשיו מיכל הפתרון.
השלך את הפתרון הישן ונקה את המיכל יחד עם מכסי המיכל, קווי האוויר, אבני האוויר והרשתות כדי למנוע הצטברות של גלוקוז ומניטול. השתמש במים וספוג ייעודי עבור כל מצב טיפול כדי לנקות כראוי את המיכלים. יבש את מיכלי הפתרון החדשים שנוקו במגבת נייר והכן את הפתרונות ליום המחרת באמצעות מיכל זה.
ודא שהפריטים האחרים מיובשים ומופרדים על ידי קבוצות טיפול מתאימות. כדי להכין את פתרונות הסוכר, מלאו כל מיכל פתרון בשניים או ארבעה ליטרים של מי מערכת. למדוד את הכמות הנכונה של גלוקוז ומניטול באמצעות סולם טעינה העליון וסירות שקילה נפרדות עבור כל כימיקל.
מוסיפים את גלוקוז שקל או aliquot מניטול למיכל פתרון נקי המתאים. מערבבים את הפתרונות עם מוטות ערבוב זכוכית נפרדים עד שהסוכרים מומסים לחלוטין. ואז להחזיר את מיכלי הפתרון לאמבט המים ולכסות אותם עם העפעפיים המתאימים שלהם.
כדי להכין את פתרון המים, מלאו מיכלים ניסיוניים במים מערכתיים החזירו מיכלי פתרונות אלה לאמבט המים וכיסו אותם במכסים המתאימים להם. ערכי הסוכר בדם היו גבוהים באופן משמעותי לאחר טיפולי גלוקוז של ארבעה שבועות ושמונה שבועות. עם היפרגליקמיה מוגדרת פי שלושה מהממוצעים בשליטה הן מקבוצות מטופלות במים והן מקבוצות מאניטול.
רקמת רשתית שנאספו לאחר ארבעה שבועות של היפרגליקמיה היה עלייה בחלבון חומצי פרפור גליה או רמות GFAP. ביטוי GFAP נצפתה בתאי גליה מולר ברשתית, אשר משתנים רטינופתיה סוכרתית. עלייה זו GFAP היה קשור לעלייה ברמות קאפה-בי גורם גרעיני.
מה שמרמז על כך שההיפרגליקמיה המושרה מעוררת תגובה דלקתית וגליוזיס תגובתי. הקלטות ERG לאחר ארבעה שבועות של טיפול זיהו ירידה בתגובה ברשתית שטופלה בגלוקוז בהשוואה לבקרות מטופלים מניטול. אמפליטודות של רכיבי פוטורצפטור ותאים דו קוטביים ירדו בדגים היפרגליקמיים.
הליך זה יכול להיות בתוספת בדיקות אחרות של היפרגליקמיה. לדוגמה, ניתן להשתמש בפקודת זיכרון כדי לבחון ליקויים קוגניטיביים או לתעד תגובות מבוססות ויזואלית כגון התגובה האופטו-מוטורית להערכת סיבוכים מבוססי ראייה. לאחר טכניקה זו הוקמה, המעבדה שלנו היה מסוגל להשתמש בו כדי לחקור סיבוכים הנגרמת היפרגליקמיה במודל דג זברה.
ראינו סיבוכים אלה במהירות יחסית, לאחר ארבעה שבועות של טיפול.
