Bu protokol, zebra balıklarında tip iki diyabette görülen hiperglisemiyi taklit eden bir yükselme ve düşme düzeninde hiperglisemiye neden olur. Bu tekniğin temel avantajı, hiperglisemi balığında gözlenen herhangi bir değişikliğin nedeninin hiperglisemi olmasını mümkün kılan noninvaziv bir teknik olmasıdır. Bu protokol potansiyel olarak hiperglisemi komplikasyonlarını hedefleyen terapötik yolları veya farmasötikleri keşfetmek için kullanılabilir.
Bu protokolün birçok adımı vardır, ancak adımlar doğru ve özenle izlendiğinde, hızla ikinci doğaya dönüşmelidir. Bununla birlikte, tüm protokol boyunca hayvanlara her zaman nazik ve insancıla davranmayı unutmayın. Her deney grubu için iki tane olmak üzere altı tank kurarak başlayın.
Toplam balık sayısı 20'den azsa iki litrelik tank ve toplam balık sayısı 20'den fazlaysa dört litrelik tank kullanın. İki tanstan birini, gövde tankını ve diğer çözelti tankını etiketle. Su sıcaklığını korumak için tankları 28 ila 29 santigrat derecede bir su banyosunda tutun.
İlk gün, balıkları 24 saat boyunca kendi tedavi çözeltilerine yerleştirin. İkinci gün, balıkları arıtma çözeltilerinden 24 saat boyunca suya aktarın. Üçüncü gün, balıkları sudan arıtma çözeltilerine aktarın.
Deneyin geri kalanı için bu alternatif pozlama devam edin. Su arıtılması kontrol balıklarının günlük olarak sudan suya aktarılması. Deney süresince balıkların her gün aynı iki saatlik süre içinde beslendiğinden ve aktarıldığından emin olun.
Her tedavi grubundaki balıkları standart bir balık ağı kullanarak muhafaza tankından ilgili çözelti tankına aktarın. Balıkları içeren tankı tekrar su banyosuna yerleştirin ve hava taşı ve tank kapağını değiştirin. Bu tank artık gövde tankı ve daha önce balığı tutan tank artık çözüm tankı.
Glikoz ve mannitol birikmesini önlemek için eski çözeltiyi atın ve tankın kapakları, hava hatları, hava taşları ve ağlarla birlikte temizleyin. Tankları düzgün bir şekilde temizlemek için her arıtma durumu için su ve özel bir sünger kullanın. Yeni temizlenen çözelti tanklarını bir kağıt havlu ile kurulayın ve bu tankı kullanarak ertesi güne göre çözeltileri hazırlayın.
Diğer eşyaların uygun tedavi grupları tarafından kurutulduğından ve ayrıldığından emin olun. Şeker çözeltilerini hazırlamak için, her çözelti tankını iki veya dört litre sistem suyu ile doldurun. Her kimyasal için üst yükleme ölçeği ve ayrı tartım tekneleri kullanarak doğru miktarda glikoz ve mannitol ölçün.
Tartılmış glikoz veya mannitol aliquot'ı uygun temiz çözelti tankına ekleyin. Şekerler tamamen çözünene kadar çözeltileri ayrı cam karıştırma çubuklarıyla karıştırın. Daha sonra çözelti tanklarını su banyosuna geri verin ve ilgili kapaklarıyla örtün.
Su çözeltisini hazırlamak için deneysel tankları sistem suyuyla doldurun Bu çözelti tanklarını su banyosuna geri verin ve ilgili kapaklarıyla örtün. Kan şekeri değerleri hem dört haftalık hem de sekiz haftalık glikoz tedavilerinden sonra önemli ölçüde yükselmiştir. Hiperglisemi ile hem su arıtılmış hem de mannitol ile tedavi edilen gruplardan kontrol ortalamalarının üç katı olarak tanımlanır.
Dört haftalık hiperglisemi sonrası toplanan retina dokusunda glial fibril asidik protein veya GFAP seviyelerinde artış vardı. GFAP ekspresyolü, diyabetik retinopatide değiştirilen retinadaki Mueller glial hücrelerinde görülür. GFAP'taki bu artış, nükleer faktör kappaB seviyelerindeki artışla ilişkiliydi.
İndüklenen hiperglisemi inflamatuar bir yanıtı ve reaktif gliozu tetiklediğini düşündürmektedir. Dört haftalık tedaviden sonra yapılan ERG kayıtlarında, glikozla tedavi edilen retinalarda mannitol ile tedavi edilen kontrollere kıyasla azalmış bir yanıt tespit edildi. Hipergliptik balıklarda hem fotoreceptör hem de bipolar hücre bileşenlerinin genlikleri azaldı.
Bu prosedür diğer hiperglisemi testleri ile desteklenebilir. Örneğin, bir bellek testi bilişsel eksikliklere bakmak veya görme tabanlı komplikasyonları değerlendirmek için optomotor yanıtı gibi görsel tabanlı yanıtları kaydetmek için kullanılabilir. Bu teknik kurulduktan sonra laboratuvarımız zebra balık modelinde hiperglisemi kaynaklı komplikasyonları incelemek için kullanabildi.
Dört haftalık tedaviden sonra bu komplikasyonları nispeten hızlı bir şekilde gözlemledik.
