Этот протокол вызывает гипергликемию у рыб данио в режиме подъема и падения, который имитирует гипергликемию, наблюдаемую при диабете второго типа. Основным преимуществом этой методики является то, что она является неинвазивной методикой, которая позволяет гарантировать, что гипергликемия является причиной любых изменений, наблюдаемых у гипергликемических рыб. Этот протокол потенциально может быть использован для изучения терапевтических путей или фармацевтических препаратов, которые нацелены на осложнения гипергликемии.
Этот протокол имеет много шагов, но когда шаги соблюдаются правильно и с осторожностью, он должен быстро стать второй натурой. Помните, однако, что всегда относитесь к животным мягко и гумано на протяжении всего протокола. Начните с установки шести резервуаров, по два для каждой экспериментальной группы.
Используйте два литровых резервуара, если общее количество рыб менее 20 и четыре литровых резервуара, если общее количество рыб больше 20. Навесьте этикетку на один из двух резервуаров, корпус резервуара и другой резервуар для раствора. Держите резервуары на водяной бане при температуре от 28 до 29 градусов по Цельсию для поддержания температуры воды.
В первый день поместите рыбу в соответствующие лечебные растворы на 24 часа. На второй день перенесите рыбу из ее лечебных растворов в воду на 24 часа. На третий день перенесите рыбу из воды на лечебные растворы.
Продолжайте это попеременно воздействие в течение оставшейся части эксперимента. Ежедневное перемещение очищенной воды контрольной рыбы из воды в воду. Убедитесь, что рыба кормится и переносится в течение одного двухчасового окна каждый день на протяжении всего эксперимента.
Перенесите рыбу в каждой группе обработки из резервуара корпуса в соответствующий резервуар для раствора с помощью стандартной рыбной сети. Поместите резервуар с рыбой обратно на водяную баню и замените воздушный камень и крышку резервуара. Этот резервуар теперь является резервуаром для корпуса, а резервуар, в котором ранее содержались рыбы, теперь является резервуаром для раствора.
Выбросьте старый раствор и очистите резервуар вместе с крышками резервуара, воздушными линиями, воздушными камнями и сетками, чтобы предотвратить накопление глюкозы и маннитола. Используйте воду и специальную губку для каждого состояния обработки, чтобы правильно очистить резервуары. Высушите недавно очищенные резервуары для раствора бумажным полотенцем и приготовьте растворы на следующий день, используя этот резервуар.
Убедитесь, что другие предметы высушены и разделены соответствующими группами обработки. Для приготовления растворов сахара заполните каждый резервуар раствора двумя или четырьмя литрами системной воды. Измерьте правильное количество глюкозы и маннитола с помощью весов с верхней загрузкой и отдельных весовых лодок для каждого химического вещества.
Добавьте взвешенную глюкозу или аликвот маннит в соответствующий резервуар для чистого раствора. Перемешайте растворы с помощью отдельных стеклянных стержней для перемешивания до полного растворения сахаров. Затем верните емкости с раствором на водяную баню и накройте их соответствующими крышками.
Чтобы приготовить водный раствор, заполните экспериментальные резервуары системной водой Верните эти емкости раствора на водяную баню и накройте их соответствующими крышками. Значения сахара в крови были значительно повышены после четырехнедельного и восьминедельного лечения глюкозой. При гипергликемии определяется как в три раза больше контрольных средних значений как из групп, обработанных водой, так и из групп, обработанных маннитом.
Ткань сетчатки, собранная после четырех недель гипергликемии, имела увеличение уровня глиального фибриллярного кислого белка или GFAP. Экспрессия GFAP наблюдается в глиальных клетках Мюллера в сетчатке, которые изменяются при диабетической ретинопатии. Это увеличение ГФПБ было связано с повышением уровня каппаБ ядерного фактора.
Предполагая, что индуцированная гипергликемия вызывает воспалительную реакцию и реактивный глиоз. Записи ERG после четырех недель лечения выявили снижение ответа у сетчатки, получавших глюкозу, по сравнению с контрольной контролем, получавших маннитол. Амплитуды как фоторецепторных, так и биполярных клеточных компонентов были снижены у гипергликемических рыб.
Эта процедура может быть дополнена другими тестами на гипергликемию. Например, анализ памяти может быть использован для анализа когнитивного дефицита или записи визуальных реакций, таких как оптомоторный ответ, для оценки осложнений, основанных на зрении. Как только этот метод был установлен, наша лаборатория смогла использовать его для изучения осложнений, вызванных гипергликемией, в модели рыбы данио.
Мы наблюдали эти осложнения относительно быстро, после четырех недель лечения.
