يسمح مورين أومايا، الذي يحاكي خزان أومايا المستخدم سريريا، للباحثين باختبار مجموعة متنوعة من العلاجات المستهدفة المباشرة لنقائل الدماغ ومرض اللبتومينينeal القاتل عالميا في نموذج ما قبل السريرية. ميزة هذه التقنية هي أن الباحثين يمكن أن يسلم حجم microliter من الأدوية مباشرة إلى السائل النخاعي لعلاج الانبثاث الجهاز العصبي المركزي، متجاوزا حاجز الدم في الدماغ. تم تصميم بروتوكول زرع مورين أومايا هذا للباحثين أو الفنيين الذين لديهم خبرة في الجراحة المجسمة والتدريب على التقنية العقيمة ، والتي تعتبر ضرورية لضمان نجاح هذا الإجراء.
وسوف يكون إثبات الإجراء مارجي بالدوين وميشيل دانيلسون من الطب المقارن في جامعة جنوب فلوريدا، وفنسنت لو، وهو باحث مشارك كبير من مختبر الدكتور بيتر فورسايث في مركز موفيت للسرطان ومعهد البحوث. تبدأ عن طريق حقن الماوس تحت الجلد مع ملليغرام واحد لكل كيلوغرام من البوبرينورفين الإفراج المستمر. بعد تخدير الماوس، قم بإعداده للجراحة.
قص موقع الجراحة مع ما يكفي من منطقة الحدود للحفاظ على الفراء من تلويث موقع شق. حلق فرو كامل سطح الرأس، وإعداد الجلد باستخدام تقنية معقمة. ثم تشبع الموقع بمطهر الجلد المبيد للجراثيم ، والعمل من وسط الموقع إلى المحيط ، والسماح له بالجفاف.
وضع الجسم لضمان الحفاظ على مستوى العمود الفقري مع ماجنا cisterna. أثناء تطبيق الجر طفيف على الذيل، ضع الشريط في قاعدة الذيل لتأمينه. ضعي إما ستارة معقمة أو مادة بلاستيكية معقمة تدعمها مادة لاصقة لحماية الموقع الجراحي من التلوث.
مع الرقبة في التمديد الكامل، تشغيل نصائح مقص الجراحية إلى أسفل مع ضغط طفيف عبر العظام القذالي، بدءا فقط بين بينا. جعل صغيرة من ثلاثة إلى خمسة ملليمتر شق خط الوسط، أعلى قليلا من الارتجاج palpated. رسم خمسة ميكرولترات من تعليق الخلية في حقنة هاملتون قياس 30.
استخدام ملقط يميل حادة مع طرف 1-2 ملليمتر للضغط بلطف إلى أسفل على ماجنا cisterna. تقديم نصائح في موقف مغلق، وفتحها في حين تطبيق الضغط النزولي على دورا. كرر تشريح حادة حتى يتم التعرف بسهولة على الغشاء الجافي والأوعية الدموية المرتبطة بها مرئية في المنطقة المعرضة.
في حين عقد ملقط مفتوحة للتراجع عن العضلات المحيطة بها، وإدخال إبرة قياس 30 غير coring تحت دورا لتصور شطبة، والتأكد من أن يتم إدخال الإبرة فقط وراء شطبة نفسها. نشر ببطء المكبس حقنة وتسليم الخلايا فقط تحت دورا. إذا لوحظ تسرب في موقع الحقن، وتطبيق ضغط لطيف مع قضيب القطن يميل.
أغلق الجلد عن طريق وضع مقطع جرح أو قطرة صغيرة من لاصق الجلد. مراقبة الفئران يوميا بعد الجراحة للأسبوع الأول. إذا كان الماوس يبدو في الألم أو الضيق، وعلاجه مع حقن تحت الجلد من 10 ملليغرام لكل كيلوغرام كاربروفين مرة واحدة كل 12 إلى 24 ساعة لمدة تصل إلى خمسة أيام على أساس التشاور البيطري والتوجيه.
تجميع جهاز حقن مورين أومايا باستخدام منفذ حقن مصغر قياس 25 وقرص فاصل ملليمتر واحد. استخدم لاصقة معقمة سيانواكريلات لضمان اختراق ما يقرب من 2.5 ملليمتر من القنية المعدنية في نصف الكرة الدماغي الأيمن، وإعداد الجلد وفقا لتقنية معقمة. إجراء شق الجلد الصغيرة تليها تشريح حادة من الأنسجة تحت الجلد الكامنة لفضح الجمجمة.
جفف الجمجمة باستخدام بيروكسيد الهيدروجين المنقوع بالعصي قضيب القطن. حفر ثقب 0.9 ملليمتر بور في الجمجمة 0.5 ملليمتر الخلفي و 1.1 ملليمتر الجانبية من bregma لفضح المادة دورا. تحريك microdrill جانبا ويسجل بلطف العظام المحيطة مباشرة حفرة بور.
لصق منفذ حقن على الجمجمة باستخدام لاصق معقم سيانواكريلات، وإدراجه على عمق 2.5 ملليمتر تقريبا. خياطة الشق باستخدام 4-0 خياطة نايلون غير قابلة للامتصاص في نمط غرزة متقطعة أو خياطة المحفظة. فئران ما بعد الجراحة في أقفاص فردية للتعافي.
لجرعة الماوس، والوصول إلى أومايا مورين باستخدام محول حقن الميناء وحقنة هاملتون. باستخدام ملقط، اضغط على الجزء العلوي من منفذ حقن مصغرة وإدراج بلطف محول حاقن الميناء تماما في الحاجز الميناء. بمجرد إجراء الحقن، فصل أومايا مورين من محول حقن الميناء مع ملقط.
لغرض تصور مسار الحقن، تم حقن 2٪ إيفانز الأزرق عن طريق نموذج مورين أومايا. نجحت الصبغة في اختراق البطينين والدماغ في 15 دقيقة. بعد 30 دقيقة، أصبحت الصبغة مرئية على الحبل الشوكي.
كدليل على المفهوم ، تم حقن فئران BALB / c بخط خلايا سرطان الثدي Her2 + TUBO المسمى ب luciferase intracisternally ، وتم زرع مورين أوماياس. بعد أسبوع واحد تقريبا من الحقن ، بدأت الفئران في تطوير LMD. عولجت هذه الفئران مرة واحدة في الأسبوع لمدة تصل إلى أربعة أسابيع مع العلاج المناعي للأجسام المضادة Her2 ، إما من خلال العلاج الجهازي عن طريق الحقن داخل الصفاق أو داخل الرحم عن طريق مورين أومايا.
في حين أن الفئران غير المعالجة ماتت بحلول اليوم 19 ، نجت جميع الفئران التي استعادت العلاج داخل الثكال من خلال مورين أومايا. بحلول الأسبوع الرابع ، لوحظ تراجع كامل للأورام. بالمقارنة مع الفئران التي عولجت بالعلاج الجهازي ، كان للفئران التي تلقت العلاج داخل الثكال بقاء عام أطول بكثير.
عند محاولة هذا الإجراء، من المهم أن الجمجمة جافة قبل وضع أومايا مورين. استخدام كمية صغيرة من الغراء ووضع أومايا مورين لمدة 10 ثوان تقريبا على الانضمام إلى الجمجمة. مع هذه التقنية، يمكن للباحثين استكشاف مجموعة واسعة من أدوية السرطان في نماذج الماوس التي هي ذات الصلة سريريا لتصميم استراتيجيات علاجية عقلانية للمرضى الذين يعانون من انبثاث الجهاز العصبي المركزي.
