Klinik olarak kullanılan Ommaya rezervuarını taklit eden Murine Ommaya, araştırmacıların beyin metastazları ve evrensel olarak ölümcül leptomeningeal hastalık için çeşitli doğrudan hedefli tedavileri preklinik bir modelde test etmelerini sağlar. Bu tekniğin avantajı, araştırmacıların kan-beyin bariyerini atlayarak merkezi sinir sistemi metastazlarını tedavi etmek için mikroliter hacimli ilaçları doğrudan beyin omurilik sıvısına teslim edebilmesidir. Bu Murine Ommaya implantasyon protokolü, stereotaktik cerrahi deneyimine ve bu prosedürün başarısını sağlamak için gerekli olan aseptik teknik eğitimine sahip araştırmacılar veya teknisyenler için tasarlanmıştır.
Prosedürü gösterenler, Güney Florida Üniversitesi Karşılaştırmalı Tıp'tan Margie Baldwin ve Michelle Danielson ve Moffitt Kanser Merkezi ve Araştırma Enstitüsü'ndeki Dr. Peter Forsyth'in laboratuvarından kıdemli bir araştırma görevlisi olan Vincent Law olacak. Fareyi deri altından kilogram başına bir miligram sürekli salınım buprenorfin enjekte ederek başlayın. Fareyi uyuşturuktan sonra ameliyata hazırlayın.
Kürkün kesi bölgesini kirletmesini önlemek için cerrahi bölgeyi yeterli sınır bölgesiyle kırpın. Başın tüm yüzeyinin kürkünü tıraş edin ve cildi steril teknik kullanarak hazırlayın. Daha sonra siteyi mikrop öldürücü cilt antiseptiği ile doyur, sitenin merkezinden çevresine kadar çalışır ve kurumasına izin verin.
Omurganın sarnıç magna ile aynı seviyede tutulmasını sağlamak için vücudu konumlandırın. Kuyruğa hafif çekiş uygularken, sabitlemek için kuyruk tabanına bant yerleştirin. Cerrahi bölgeyi kontaminasyondan korumak için steril bir örtü veya steril yapışkan destekli plastik bir örtü malzemesi uygulayın.
Boyun tam uzatmalı olarak, cerrahi makas uçlarını oksipital kemik boyunca hafif bir basınçla aşağı doğru çalıştırın, pinnae'nin hemen arasından başlayarak. Palpatlanmış konsavitenin biraz üzerinde, üç ila beş milimetrelik küçük bir orta hat kesiği yapın. 30 kalibrelik Hamilton şırıngasına hücre süspansiyonunun beş mikrolitresini çizin.
Sarnıç magnasına hafifçe bastırmak için bir ila iki milimetre uçlu künt uçlu tokmaklar kullanın. Uçları kapalı bir konumda tanıtın ve dura üzerinde aşağı doğru basınç uygularken açın. Dural zar kolayca tespit edilene ve ilişkili kan damarları açıkta kalan bölgede görünene kadar künt diseksiyonu tekrarlayın.
Forsepsleri çevreleyen kasları geri çekmek için açık tutarken, eğimi görselleştirmek için duranın altına 30 kalibrelik koringsiz bir iğne sokarak iğnenin sadece eğimin hemen ötesinde tanıtıldığından emin olun. Yavaşça bir şırınna pistonu dağıtın ve dura'nın hemen altındaki hücreleri teslim edin. Enjeksiyon yerinde sızıntı dikkat edilirse, pamuk uçlu bir aplikatör ile hafif basınç uygulayın.
Bir yara klipsi veya bir mikro damla cilt yapıştırıcısı uygulayarak cildi kapatın. İlk hafta ameliyattan sonra fareleri günlük olarak izleyin. Bir fare ağrı veya sıkıntı içinde görünüyorsa, veteriner konsültasyonuna ve direktifine dayanarak beş güne kadar her 12 ila 24 saatte bir kilogram başına 10 miligram deri altı enjeksiyonu ile tedavi edin.
Murine Ommaya enjeksiyon cihazını 25 kalibrelik minyatür enjeksiyon portu ve bir milimetrelik ara disk kullanarak monte edin. Metal kanonun yaklaşık 2,5 milimetresinin sağ serebral yarımküreye nüfuz etmesini sağlamak için siyanoakrilat steril yapıştırıcı kullanın ve cildi steril tekniğe göre hazırlayın. Kafatasını ortaya çıkarmak için alttaki deri altı dokularının künt diseksiyonu ile birlikte küçük bir cilt kesisi yapın.
Kafatasını hidrojen peroksit batırılmış pamuk uçlu aplikatör çubukları kullanarak kurutun. Dura maddesini ortaya çıkarmak için kafatasında 0,5 milimetre posterior ve bregmanın 1,1 milimetre yanal 0,9 milimetre çapak deliği açın. Mikrodril kenara hareket ettirilin ve çapak deliğini çevreleyen kemiği hafifçe puanlayın.
Siyanoakrilat steril yapıştırıcı kullanarak kafatasına bir enjeksiyon portu yapıştırın ve yaklaşık 2,5 milimetre derinliğe yerleştirin. Kesiği, 4-0 emilemez naylon dikiş kullanarak, kesintiye uğramış bir dikiş deseninde veya pursestring dikişinde dikin. Ameliyat sonrası fareleri iyileşmek için bireysel kafeslerde barındır.
Fareyi dozlamak için, bir port enjeksiyon adaptörü ve bir Hamilton şırınnası kullanarak Murine Ommaya'ya erişin. Tokmaları kullanarak minyatür enjeksiyon bağlantı noktasının üst kısmını tutun ve bağlantı noktası enjektör adaptörünü tam olarak bağlantı noktası septumuna yerleştirin. Enjeksiyon yapıldıktan sonra, Murine Ommaya'yı port enjeksiyon adaptöründen asalarla ayırın.
Enjeksiyonun rotasını görselleştirmek amacıyla, Murine Ommaya modeli ile% 2 Evans Blue enjekte edildi. Boya 15 dakika içinde ventriküllere ve beyne başarıyla sızdı. 30 dakika sonra boya omurilikte görünür hale geldi.
Kavram kanıtı olarak, BALB/c farelerine luciferaz etiketli Her2+TUBO meme kanseri hücre hattı intraisternally enjekte edildi ve Murine Ommayas implante edildi. Enjeksiyondan yaklaşık bir hafta sonra, fareler LMD geliştirmeye başladı. Bu fareler, intraperitoneal enjeksiyon yoluyla sistemik tedavi yoluyla veya Murine Ommaya aracılığıyla intratekal olarak Her2 antikor immünoterapisi ile haftada bir kez Her2 antikor immünoterapisi ile tedavi edildi.
Tedavi edilmeyen fareler 19. Dördüncü haftaya gelindiğinde tümörlerde tam bir gerileme gözlendi. Sistemik tedavi ile tedavi edilen farelere kıyasla, intratekal tedavi alan fareler çok daha uzun bir genel sağkalıma sahipti.
Bu prosedürü denerken, Murine Ommaya'yı yerleştirmeden önce kafatasının kuru olması önemlidir. Az miktarda tutkal kullanın ve Murine Ommaya'yı kafatasına yapışması için yaklaşık 10 saniye konumlandırın. Bu teknikle araştırmacılar, merkezi sinir sistemi metastazı olan hastalar için rasyonel terapötik stratejiler tasarlamak için klinik olarak ilgili fare modellerinde çok çeşitli kanser ilaçlarını keşfedebilirler.
