قياس معدل ضربات القلب الجوهري هو مؤشر مهم على صحة القلب. تقيس هذه التقنية بدقة هذا المعدل مع استبعاد غالبية التأثيرات المحيرة على العقدة الصينية. يلتقط تسجيل MEA لمعدل ضربات القلب الجوهري بيانات معدل إطلاق دقيقة مشابهة لتسجيلات الخلية الواحدة دون تدريب مكثف على علم الفيزيولوجيا الكهربية.
قد يكافح الأفراد الذين يستخدمون هذه التقنية للحصول على مستحضرات أنسجة صحية في التجارب المبكرة ، لذلك مارس التشريح وتحسين المخازن المؤقتة وإعدادات جمع البيانات قبل البدء في جمع البيانات الحقيقية. إثبات الإجراء سيكون الطبيبان مان سي وبرافين كومار، باحثا ما بعد الدكتوراه في مختبري. تبدأ عن طريق عقد الجلد من الماوس القتل الرحيم مع hemostat واستخدام مقص الجراحية لجعل شق عرضية في الجلد فقط تحت الجزء السفلي من القفص الصدري من القوس كوستال الأيسر إلى قوس كوستال الأيمن.
استخدام مقص الجراحية لقطع فتح الصفاق وفصل بعناية الكبد من الحجاب الحاجز دون سرقة الكبد لمنع النزيف المفرط. انسي الحجاب الحاجز على طول الصدر لفضح تجويف الصدر. استخدم المقص الجراحي لقطع الجدران الجانبية للضلع من حواف الأقواس costal حتى الترقوة لفضح القلب، ثم استخدم إبرة حقنة قياس 23 لتثبيت القفص الصدري على الكتف.
استخدام ماصة نقل لإسقاط الحارة heparinized حل تايرود كاملة على القلب للحفاظ على رطوبة. عقد الرئتين مع ملقط Graefe غرامة اضافية وقطع القصبة الهوائية مع مقص الجراحية لإزالة الرئتين. لإزالة القلب، عقد قمة القلب مع ملقط Graefe غرامة اضافية وقطع الشريان الأورطي وأدنى فينا كافا مع مقص الجراحية.
نقل القلب إلى طبق بيتري التي تحتوي على إلستومر السيليكون الشفاء واستخدام ماصة نقل للاستحمام القلب مع اثنين إلى ثلاثة ملليلتر من محلول تايرود الكامل الدافئة. إرفاق قمة القلب إلى الطبق مع دبوس تشريح. عقد كافا فينا أدنى مع دومون 2 ملقط استئصال الأمين.
إدراج إبرة حقنة قياس 22 من خلال الوريدا كافا أدنى ومتفوقة لتحديد موقعها في الأذين الأيمن، والذي يحدد أيضا الموقف التقريبي للعقدة سيناويني. عقد الزوائد الأذينية الحق مع ملقط استئصال اللامينكتوم دومون 2، ووضع دبوس تشريح من خلال الملحق الأذيني الأيمن لعقد في مكانه. كرر نفس الإجراء للزوائد الأذينية اليسرى، ثم قم بإزالة إبرة الحقنة التي تمتد إلى الكافا.
استخدام مقص كاستروفيجو لإزالة قمة القلب عن طريق إجراء شق عرضية عبر البطينين للافراج عن الدم من القلب، ثم غسل القلب عن طريق إضافة محلول تايرود الكامل الدافئة heparinized. استخدم مقص Castroviejo لقطع الحاجز الأذيني البطيني حتى يتم فصل الأذينين والحفاظ على الشق أقرب إلى البطين. قطع على طول الحاجز بين الارتواز لإزالة الأذين الأيسر.
ضع دبابيس التشريح في محيط الأذين الأيمن لجعله مسطحا. إزالة أي الدهون المتبقية، والأوعية، أو الأنسجة من الأذين باستخدام مقص كاستروفيجو وتحديد موقع العقدة sinoatrial في الأذين الأيمن. إضافة حل تايرود لنموذج حل الإدخال وبدوره على تدفق غاز كاربوجين لأوكسجين حل التيرود.
تعيين مضخة التجبير إلى 25 دورة في الدقيقة، والذي يعطي معدل تدفق من اثنين من ملليلتر في الدقيقة الواحدة. بعد بدء تشغيل المضخة، تأكد من أن المخزن المؤقت لا يتسرب من النظام وتعيين وحدة تحكم درجة الحرارة إلى 37 درجة مئوية. استخدام دومون 55 ملقط لنقل الأنسجة تشريح من طبق بيتري تشريح على شبكة صفيف microelectrode.
ضع الأنسجة برفق مع فرشاة طلاء ناعمة لتراكب منطقة العقدة الصينية الصناعية لشبكة القطب الكهربائي. ثم ضع الشبكة فوق الأنسجة باستخدام ملقط العظام أو أي ملقط منحني. باستخدام ملقط العظام، ضع مرساة القيثارة على الشبكة لعقد كل شيء في مكانه.
ترتيب طبق صفيف microelectrode على لوحة موصل. ضع بعناية غطاء التغلغل على طبق الصفيف microelectrode دون إزعاج مرساة شريحة القيثارة وتأمين فجوة التغلغل مع الشريط. قم بتشغيل مكبر الصوت وإعداد سير عمل للتسجيل في البرنامج.
حدد beat_recording. قالب موفلو. فتحه وتعيين عدد من آثار، مدة التتبع، الفاصل الزمني تتبع، الجهد المدخلات، معدل أخذ العينات، وغيرها من المعلمات تسجيل وفقا لشروط التسجيل المطلوب.
انقر فوق الزر سجل وتشغيل لبدء التسجيل والحصول على البيانات لمدة 10 من مدة دقيقة واحدة مع دقيقتين من الفواصل الزمنية بين آثار. وقفة المضخة والتبديل أنابيب تدفق مضخة من حل تسجيل العادي إلى حل تايرود التي تحتوي على الدواء المطلوب من الاختيار. أعد تشغيل المضخة واستأنف التسجيل.
بمجرد وصول محلول التيرود المشبع بالمخدرات إلى الأنسجة ، سجل 10 آثار بنفس الطريقة التي تم إجراؤها سابقا للتسجيلات الأساسية. التقاط صورة نهائية لتحديد المواقع من الأنسجة على مجموعة microelectrode. افتح ملف البيانات المسجل المحفوظ في قالب تحليل تردد فوز برنامج التحليل.
انقر على اللعب والسماح للتسجيل بأكمله لتشغيل التصور البيانات ومن ثم تعيين معلمات التحليل المناسبة. حدد القنوات التي سيتم تضمينها في التحليل وتعيين الحد الأقصى للسعة المطلوبة أو قيم عتبة السعة المصغرة لتحديد ذروة الموجي الآلي. انقر على أيقونة التشغيل مرة أخرى لإعادة تشغيل مجموعة البيانات وتأكيد أن معلمات التحليل مناسبة لاستخراج الارتفاع.
وللتحليل، حدد الآثار الثلاثة الأكثر استقرارا على التوالي التي تظهر معدل ضرب مستقر لكل أثر عبر معظم القنوات خلال فترة خط الأساس للتجربة وثلاثة آثار مستقرة متتالية أخرى خلال فترة التعرض للمخدرات. انقر فوق رمز التشغيل والتسجيل لبدء التحليل. تم جمع البيانات من الذكور من النوع البرية 45 يوما الماوس السويسري الأسود لعقدة sinoatrial فاز قياس التردد.
وقد لوحظت الأشكال الموجية ذات الأشكال والسعات المختلفة في قنوات مختلفة وأظهرت جميع القنوات فترات فاصلة متطابقة وترددات إطلاق. ومع ذلك، فإن درجة ملامسة الأنسجة للقطب الكهربائي قد تؤثر أيضا على خصائص الشكل الموجي مثل السعة. ومن بين الآثار العشرة المسجلة، اختيرت القنوات الثلاث المتتالية ذات التردد الثابت للنبض والفاصل الزمني بين البينيات لإجراء مزيد من التحليل.
يجب أن تكون أنماط الارتفاع المستخرجة السيئة غائبة ، ولكن إذا كانت موجودة إما تتأثر بالضوضاء أو غير مستقرة. تعكس الأشكال الموجية التي تتوافق مع نبضات القلب الفردية نشاط القلب الجوهري. يسمح نظام صفيف microelectrode بسهولة تطبيق عوامل المخدرات لتحليل الآثار الدوائية.
وتبين أن معدل الإطلاق الجوهري لثلاثة آثار مختارة عبر جميع القنوات ال 64 يبلغ حوالي 320 نبضة في الدقيقة في بيانات أخذ العينات. إدخال 4-aminopyrimidine زيادة فترات بين السبايك كما هو متوقع، مما أدى إلى انخفاض وتيرة فوز من 320 إلى 210 نبضة في الدقيقة الواحدة. لجمع بيانات موثوقة للتحليل، من المهم التأكد من صحة الأنسجة أثناء التسجيل من خلال التحقق من أن الآثار مستقرة وتفي بالمعايير القياسية.
يمكن استخدام MEAs لتسجيل النشاط القلبي في مناطق أخرى من القلب ، مما يسمح بتحديد مفصل للمنطقة قابل لدراسة آثار التلاعب الوراثي والصيدلاني.
