تحليل مجهري بالفيديو عالي السرعة لتشخيص الخط الأول لخلل الحركة الهدبوجي الأولي

يعد التحليل المجهري بالفيديو عالي السرعة أداة موثوقة لتشخيص الخط الأول لخلل الحركة الهدبي الأساسي. هذه التقنية سهلة الأداء نسبيا وسريعة وفعالة من حيث التكلفة ، وفي أيدي ذوي الخبرة أداة موثوقة للغاية. وهو ينطبق على المرضى من جميع الفئات العمرية.

يكشف الفحص المجهري بالفيديو أيضا عن وظيفة هدبية ثانوية. مثل ، على سبيل المثال ، بسبب الالتهابات البكتيرية أو الفيروسية. ولكن تم استخدامه بشكل رئيسي لتشخيص خلل الحركة الهدبي الأولي.

يستخدم العلماء هذه الطريقة أيضا لتصور العمليات داخل الخلايا أو الوظائف البيولوجية في الخلايا الحية. ستساعدني في هذا الإجراء السيدة تينا بيروما ، فني المختبر لدينا.

قبل جمع الخلايا الظهارية التنفسية ، اطلب من المريض نفخ أنفه جيدا. عندما يكون المريض جاهزا ، حافظ على رأس المريض ثابتا بيد واحدة واستخدم فرشاة بين الأسنان بحجم 0.6 ملم في اليد الأخرى لتنظيف التوربينات السفلية من فتحة الأنف لجمع شرائط الخلايا الظهارية الكافية. قم بإسقاط شرائط الخلايا التي تم حصادها في أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 ملليلتر يحتوي على DMEM الذي تتغذى عليه الخلية.

بعد إغلاق غطاء أنبوب الطرد المركزي الدقيق ، أمسك الأنبوب بمصدر الضوء وهز الأنبوب لاكتشاف شرائط الخلايا والتكتلات التي تم حصادها. في وقت لاحق ، ضع أنابيب أجهزة الطرد المركزي الدقيقة مع إغلاق الأغطية بشكل صحيح في صندوق البوليسترين. قبل إغلاق الصندوق بإحكام ، تأكد من تثبيت الأنابيب داخل الصندوق.

ثم أضف عبوة باردة إلى الصندوق مع تجنب تجميد العينة. بعد إزالة أنابيب أجهزة الطرد المركزي الدقيقة التي تحتوي على العينات من صندوق البوليسترين ، ضع أنبوبا واحدا تحت غطاء محرك وحدة تسخين المجهر لتسخين ما يصل إلى 37 درجة مئوية لتحليل مجهر الفيديو عالي السرعة أو HSVMA. بعد ذلك ، ابدأ تشغيل الكاميرا وبرنامج وحدة الفيديو على الكمبيوتر.

استخدم ماصة لأخذ عينة صغيرة ووضع قطرتين من العينة في كوفيت. قم بتغطية الكوفيت بغطاء قبل وضعه تحت المجهر. استخدم عدسة غمر الزيت مع تكبير 100x ووضع قطرة من زيت الغمر على سطح البصرية.

أثناء الاقتراب من الجزء السفلي من الطبق باستخدام عدسة المجهر ، ابحث عن مجموعات الخلايا بدون خلايا دم حمراء وذات محتوى مخاط منخفض. بعد العثور على منطقة تمثيلية ذات أهمية ، أو ROI ، ركز على مجموعة واحدة من أهداب الضرب مع أكبر حركات الأهداب وسجل تسلسل فيديو. سجل الخلايا مع ضرب جانب الأهداب الحكيمة ومن الأعلى.

يظهر التحليل التمثيلي حركات الأهداب العادية التي ينظر إليها بشكل جانبي حكيم ومن الأعلى. أظهرت عينة من خلل الحركة الهدبية الأولية ، أو مريض PCD ، مع طفرة في جين DNAH11 النمط الكلاسيكي القاسي المتحرك بالحد الأدنى من الضربات الهدبية. عند النظر إليها من الجانب وأعلى.

في مريض آخر من مرضى PCD يعانون من نفس الطفرة ، لوحظ نمط مختلف مفرط الحركة ولكنه غير فعال من أهداب الضرب. كما شوهد نمط ضربات هدبي مرضي وتواتر ضربات هدبي في مريض يعاني من التهابات متكررة في مجرى الهواء العلوي. إذا تم تنفيذ إجراء التنظيف بالفرشاة بصرامة ، فلا يمكن إجراء تحليل HSVMA حيث تم تغطية الخلايا الظهارية الهدبية بطبقة من خلايا الدم الحمراء.

الخطوة الأكثر أهمية في الإجراء هي الحصول على خلايا تنفسية كافية من الفرشاة والحفاظ على هذه المواد محفوظة جيدا لتحليل الفيديو. يمكن استخدام المواد المتبقية لإجراء الفحص المجهري الإلكتروني أو المجهر المناعي للكشف عن العيوب الهيكلية المحتملة في الأهداب أو للكشف عن العيوب وتخليق البروتينات الهدبية.