고속 비디오 현미경 분석은 원발성 섬모 운동 장애의 첫 번째 라인 진단을위한 신뢰할 수있는 도구입니다. 이 기술은 상대적으로 수행하기 쉽고, 빠르고, 비용 효율적이며, 숙련 된 손에는 매우 신뢰할 수있는 도구입니다. 그리고 그것은 모든 연령 그룹의 환자에게 적용 할 수 있습니다.
비디오 현미경 검사는 또한 이차 섬모 기능을 보여줍니다. 예를 들어, 박테리아 또는 바이러스 감염으로 인한 것과 같습니다. 그러나 그것은 주로 원발성 섬모 운동 이상증을 진단하는 데 사용되었습니다.
과학자들은이 방법을 사용하여 살아있는 세포의 세포 내 과정이나 생물학적 기능을 시각화합니다. 이 절차에서 저를 돕는 것은 실험실 기술자 인 Tina Peromaa 부인이 될 것입니다.
호흡기 상피 세포를 수집하기 전에 환자에게 코를 완전히 날려 버리도록 요청하십시오. 환자가 준비가되면 한 손으로 환자의 머리를 고정시키고 다른 손에는 0.6mm 크기의 치간 브러시를 사용하여 콧구멍의 열등한 turbinate를 닦아 충분한 상피 세포 스트립을 수집하십시오. 수확된 세포 스트립을 세포 영양화된 DMEM을 함유하는 1.5 밀리리터 마이크로원심분리 튜브에 떨어뜨린다.
마이크로 원심분리 튜브의 뚜껑을 닫은 후 튜브를 광원에 대고 튜브를 흔들어 수확 된 세포 스트립과 대기업을 발견하십시오. 나중에 뚜껑이 제대로 닫힌 마이크로 원심분리 튜브를 폴리스티렌 상자에 넣으십시오. 상자를 닫기 전에 튜브가 상자 안에 고정되어 있는지 확인하십시오.
그런 다음 시편이 얼지 않도록 상자에 콜드 팩을 추가하십시오. 폴리스티렌 박스로부터 샘플이 포함된 마이크로 원심분리 튜브를 제거한 후, 하나의 튜브를 현미경 가열 유닛의 후드 아래에 놓아 고속 비디오 현미경 분석 또는 HSVMA를 위해 섭씨 37도까지 예열한다. 그런 다음 컴퓨터에서 카메라와 비디오 장치의 소프트웨어를 시작하십시오.
피펫을 사용하여 작은 샘플을 가져 와서 샘플 두 방울을 큐벳에 넣으십시오. 큐벳을 현미경 아래에 놓기 전에 뚜껑으로 덮으십시오. 100x 배율의 오일 침지 렌즈를 사용하고 광학 표면에 침지 오일 한 방울을 넣으십시오.
현미경 렌즈로 접시의 바닥에 접근하는 동안 적혈구가없고 점액 함량이 낮은 세포 클러스터를 검색하십시오. 대표적인 관심 영역 또는 ROI를 찾은 후 가장 큰 섬모 움직임을 가진 박동 섬모의 한 그룹에 집중하고 비디오 시퀀스를 녹화하십시오. 섬모를 때리는 쪽을 현명하고 위에서 기록하십시오.
대표적인 분석은 측면과 위에서 볼 수있는 정상적인 섬모 운동을 보여줍니다. DNAH11 유전자에 돌연변이가 있는 원발성 섬모 운동이상증 또는 PCD 환자의 샘플은 섬모 박동의 고전적인 뻣뻣한 최소 이동 패턴을 입증했습니다. 측면과 위에서 볼 때.
동일한 돌연변이를 가진 다른 PCD 환자에서, 박동 섬모의 다른 운동학적이지만 비효율적 인 패턴이 관찰되었다. 병리학적 섬모 비트 패턴과 섬모 박동 빈도는 재발하는 상부 기도 감염을 가진 환자에서도 관찰되었다. 양치 시술이 엄격하게 수행되는 경우 HSVMA 분석은 섬모 상피 세포가 적혈구의 코팅으로 덮여 있었기 때문에 수행 될 수 없었다.
절차에서 가장 중요한 단계는 칫솔질에서 충분한 호흡 세포를 얻고 비디오 분석을 위해이 물질을 잘 보존하는 것입니다. 나머지 물질은 섬모의 가능한 구조적 결함을 검출하거나 섬모 단백질의 결함 및 합성을 밝히기 위해 전자 현미경 검사 또는 면역 가루 현미경을 수행하는 데 사용할 수 있습니다.
