L’analyse par microscopie vidéo à grande vitesse est un outil fiable pour le diagnostic de première ligne de la dyskinésie ciliaire primaire. Cette technique est relativement facile à exécuter, rapide, rentable et entre des mains expérimentées, un outil très fiable. Et il est applicable pour les patients de tous les groupes d’âge.
La microscopie vidéo révèle également une fonction ciliaire secondaire. Comme, par exemple, en raison d’infections bactériennes ou virales. Mais il a été principalement utilisé pour diagnostiquer la dyskinésie ciliaire primaire.
Les scientifiques utilisent également cette méthode pour visualiser les processus intracellulaires ou les fonctions biologiques dans les cellules vivantes. Mme Tina Peromaa, notre technicienne de laboratoire, m’assistera dans cette procédure.
Avant de prélever les cellules épithéliales respiratoires, demandez au patient de bien se moucher. Lorsque le patient est prêt, gardez la tête du patient fixe d’une main et utilisez une brosse interdentaire de 0,6 millimètre de taille dans l’autre main pour brosser le cornet inférieur de la narine afin de recueillir suffisamment de bandelettes de cellules épithéliales. Déposer les bandes cellulaires récoltées dans un tube de microcentrifugation de 1,5 millilitre contenant le DMEM nourri par la cellule.
Après avoir fermé le couvercle du tube de microcentrifugation, maintenez le tube contre la source de lumière et secouez le tube pour découvrir les bandes et conglomérats cellulaires récoltés. Plus tard, placez les tubes de microcentrifugation avec les couvercles correctement fermés dans une boîte en polystyrène. Avant de fermer la boîte, assurez-vous que les tubes sont fixés à l’intérieur de la boîte.
Ajoutez ensuite un compresse froid à la boîte tout en évitant de congeler l’échantillon. Après avoir retiré les tubes de microcentrifugation contenant les échantillons de la boîte en polystyrène, placez un tube sous une hotte de l’unité de chauffage du microscope pour réchauffer jusqu’à 37 degrés Celsius pour l’analyse de microscopie vidéo à grande vitesse ou HSVMA. Ensuite, démarrez la caméra et le logiciel de l’unité vidéo sur l’ordinateur.
Utilisez une pipette pour prélever un petit échantillon et placez deux gouttes de l’échantillon dans une cuvette. Couvrir la cuvette avec un couvercle avant de la placer sous le microscope. Utilisez une lentille d’immersion dans l’huile avec un grossissement de 100x et placez une goutte d’huile d’immersion sur la surface de l’optique.
Tout en s’approchant du fond de la boîte avec la lentille du microscope, recherchez les amas de cellules sans globules rouges et avec une faible teneur en mucus. Après avoir trouvé une région d’intérêt représentative, ou ROI, concentrez-vous sur un groupe de cils battants avec les plus grands mouvements de cils et enregistrez une séquence vidéo. Enregistrez les cellules avec des cils battants du côté et d’en haut.
L’analyse représentative montre les mouvements normaux des cils vus de côté et d’en haut. L’échantillon d’un patient atteint de dyskinésie ciliaire primaire, ou PCD, avec une mutation du gène DNAH11 a démontré le schéma classique de battement ciliaire rigide et minimal. Vu de côté et au-dessus.
Chez un autre patient atteint de PCD présentant la même mutation, un schéma hypercinétique mais inefficace des cils battants a été observé. Un schéma pathologique de battement ciliaire et une fréquence de battement ciliaire ont également été observés chez un patient présentant des infections récurrentes des voies respiratoires supérieures. Si la procédure de brossage est effectuée rigoureusement, l’analyse HSVMA n’a pas pu être effectuée car les cellules épithéliales ciliées étaient recouvertes d’un revêtement de globules rouges.
L’étape la plus importante de la procédure est d’obtenir suffisamment de cellules respiratoires des brossages et de garder ce matériau bien conservé pour l’analyse vidéo. Le matériel restant peut être utilisé pour effectuer la microscopie électronique ou la microscopie immunoflourescense afin de détecter d’éventuels défauts structurels dans les cils ou de révéler des défauts et la synthèse de protéines ciliaires.
