Yüksek hızlı Video mikroskopi analizi, primer siliyer diskinezinin ilk basamak teşhisi için güvenilir bir araçtır. Bu tekniğin uygulanması nispeten kolay, hızlı, uygun maliyetli ve deneyimli ellerde çok güvenilir bir araçtır. Ve her yaş grubundan hastalar için geçerlidir.
Video mikroskobu ayrıca ikincil siliyer fonksiyonu da ortaya koymaktadır. Örneğin, bakteriyel veya viral enfeksiyonlar nedeniyle. Ancak esas olarak primer siliyer diskinezi tanısı koymak için kullanılmıştır.
Bilim adamları bu yöntemi canlı hücrelerdeki hücre içi süreçleri veya biyolojik fonksiyonları görselleştirmek için de kullanırlar. Bu prosedürde bana yardımcı olacak kişi laboratuvar teknisyenimiz Bayan Tina Peromaa olacak.
Solunum epitel hücrelerini toplamadan önce, hastadan burnunu iyice üflemesini isteyin. Hasta hazır olduğunda, hastanın başını bir elinizle sabit tutun ve diğer yandan yeterli epitel hücre şeritleri toplamak için burun deliğinin inferior konkasını fırçalamak için 0.6 milimetre büyüklüğünde bir interdental fırça kullanın. Hasat edilen hücre şeritlerini, hücre beslenen DMEM'yi içeren 1.5 mililitrelik bir mikrosantrifüj tüpüne bırakın.
Mikrosantrifüj tüpünün kapağını kapattıktan sonra tüpü ışık kaynağına karşı tutun ve hasat edilen hücre şeritlerini ve konglomeraları keşfetmek için tüpü sallayın. Daha sonra, mikrosantrifüj tüplerini, kapakları düzgün bir şekilde kapatılmış olarak bir polistiren kutuya yerleştirin. Kutuyu kapatmadan önce, tüplerin kutunun içine sabitlendiğinden emin olun.
Ardından, numunenin dondurulmasını önlerken kutuya soğuk bir paket ekleyin. Numuneleri içeren mikro santrifüj tüplerini polistiren kutusundan çıkardıktan sonra, yüksek hızlı video mikroskopi analizi veya HSVMA için 37 santigrat dereceye kadar ısınmak üzere mikroskop ısıtma ünitesinin kaputunun altına bir tüp yerleştirin. Ardından, kamerayı ve bilgisayardaki video ünitesinin yazılımını başlatın.
Küçük bir numune almak için bir pipet kullanın ve numunenin iki damlasını bir küvete yerleştirin. Mikroskop altına yerleştirmeden önce küveti bir kapakla örtün. 100x büyütmeli bir yağ daldırma lensi kullanın ve optiğin yüzeyine bir damla daldırma yağı koyun.
Mikroskop merceği ile çanağın dibine yaklaşırken, kırmızı kan hücreleri olmayan ve düşük mukus içeriğine sahip hücre kümelerini arayın. Temsili bir ilgi alanı veya ROI bulduktan sonra, en büyük kirpik hareketlerine sahip dayak kirpiklerinin bir grubuna odaklanın ve bir video dizisi kaydedin. Hücreleri kirpik tarafı akıllıca ve yukarıdan döverek kaydedin.
Temsili analiz, yandan ve yukarıdan görülen normal kirpik hareketlerini gösterir. DNAH11 geninde bir mutasyona sahip primer siliyer diskinezi veya PCD hastasının örneği, siliyer atımın klasik sert minimal hareketli modelini gösterdi. Yandan ve yukarıdan bakıldığında.
Aynı mutasyona sahip başka bir PKD hastasında, dövülen kirpiklerin farklı bir hiperkinetik ancak verimsiz paterni gözlendi. Tekrarlayan üst solunum yolu enfeksiyonları olan bir hastada patolojik siliyer beat paterni ve siliyer beat sıklığı da görüldü. Fırçalama prosedürü titizlikle gerçekleştirilirse, siliyer epitel hücreleri kırmızı kan hücrelerinin bir kaplaması ile kaplandığı için HSVMA analizi yapılamaz.
İşlemdeki en önemli adım, fırçalamalardan yeterli solunum hücresi elde etmek ve bu materyali video analizi için iyi korunmuş halde tutmaktır. Kalan materyal, kirpiklerdeki olası yapısal kusurları tespit etmek veya kusurları ve siliyer proteinlerin sentezini ortaya çıkarmak için elektron mikroskobu veya immünoflouresense mikroskobu yapmak için kullanılabilir.
