هذا البروتوكول مهم لأنه يبسط ويسمح بقياسات الإشعاع في المواد السميكة ، مما يسمح لنا بجمع معلومات مهمة عند دراسة الأنظمة الحية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسمح بإجراء قياسات طيفية تم حلها مكانيا في مواد عالية الامتصاص باستخدام معدات يمكن بناؤها وتجارب يمكن إجراؤها في المختبرات الميدانية. يمكن تكييف هذه الطريقة وتطبيقها على أي نظام حي.
تقنية صنع المجسات دقيقة ، لكن الممارسة تجعلها مثالية. اضبط تقنية القياس اعتمادا على المادة التي يتم فحصها وقم بإجراء تغييرات تؤدي إلى وضع أنسجة أكثر أمانا وتقليل احتكاك المسبار. للبدء في بناء الغلاف الزجاجي باستخدام ماصة باستور مقاس 5.75 بوصة.
باستخدام مشبك تمساح قابل للتركيب ، قم بتركيب الماصة الزجاجية من الطرف العريض بحيث يكون الطرف المدبب متجها لأسفل نحو الأرض ويكون اتجاه الماصة عموديا على الأرض. ضع وسادة من الشريط الكهربائي على قبضة بلاستيكية سعة 50 جراما للمساعدة في منع الانزلاق وتعليق قبضة الرذيلة من الطرف المدبب للماصة. باستخدام شعلة البوتان الصغيرة ، قم بتسخين الطرف المدبب من الماصة كما هو موضح في المخطوطة.
عندما يزداد طول الماصة بحوالي خمس بوصات ، قم بإزالة اللهب على الفور. بعد ذلك ، استخدم مقصا صغيرا أو قاطعا زجاجيا لتقليم الطرف المسحوب من الماصة. قم بحفظ أي مناطق حادة من الطرف المشذب باستخدام ورق carborundum واشطف أي شظايا زجاجية صغيرة أو غبار باستخدام كحول الأيزوبروبيل متبوعا بالهواء المضغوط.
استخدم شفرة حلاقة لقطع الألياف الضوئية وإزالة موصل SMA واحد من الألياف الضوئية المنتهية ب SMA. تأكد من قطع ما يقرب من أحد نهايات SMA. ثم قم بإزالة الخمسة سنتيمترات التالية من الأغلفة البلاستيكية والألياف الزجاجية بحيث تتعرض الألياف الضوئية العارية وتبرز من بقية المجموعة بأكملها.
استخدم شعلة البوتان لحرق طلاء بوليمر البولي أميد من الألياف الزجاجية. شطف مع الأيزوبروبانول ومسح الألياف الزجاجية العارية باستخدام مناديل خالية من النسالة. الآن قم بتركيب الطرف العاري من الألياف الضوئية مباشرة في مشبك ذو طيات على طاولة أو حافة رف ، واترك الطرف المنتهي ب SMA من الألياف يتدلى نحو الأرض.
على بعد حوالي أربع إلى ست بوصات من مكان تثبيت الألياف الضوئية العارية في المشبك ذو الطيات ، أضف الأوزان للسحب باستخدام مشبكين صغيرين على الطرف المغلف من الألياف. لسحب الألياف ، ابدأ بشعلة شعلة البوتان. امسك شعلة البوتان على بعد سنتيمتر واحد من الألياف العارية كما هو موضح في المخطوطة.
واترك الألياف تتمدد وتسحب وتفصل وتسقط على الأرض. افحص الألياف تحت المجهر وقم بقص نهاية الألياف بمقص تشريح صغير إذا لزم الأمر. استخدم قلما غير شفاف رغوي لتغميق جوانب الألياف ومنع دخول الضوء الشارد.
اسحب طرف القلم برفق عبر الألياف ، مع ترك مساحة صغيرة فقط في الطرف مكشوفة. تحت مجهر ستيريو ، أدخل الألياف الضوئية المدببة بعناية في الطرف العريض من الماصة الزجاجية المعدلة وادفع الألياف حتى يخرج ملليمتر واحد تقريبا من الألياف العارية من الطرف المدبب للماصة. باستخدام الشريط الكهربائي ، قم بتأمين الطرف المغلف من الألياف الضوئية إلى الطرف العريض من الماصة.
ضع قطرة من لاصق cyanoacrylate على إبرة قياس صغيرة. المس بعناية قطرة المادة اللاصقة على الحافة المقطوعة للماصة المسحوبة ، وتجنب النهاية العارية للألياف المسحوبة. لتعديل طرف الألياف باستخدام كرة مبعثرة ، قم بإنشاء المادة الخام عن طريق خلط قطرة من مادة لاصقة قابلة للشفاء بالأشعة فوق البنفسجية مع مسحوق ثاني أكسيد التيتانيوم بنسبة متساوية.
قم بتوصيل المسبار بمعالج دقيق بحامل قضيب تثبيت بحيث يكون المسبار في اتجاه أفقي. قم بإعداد خزان عمل لمادة التشتت عن طريق غمس طرف سلك أو إبرة في الخليط المحضر بحيث تتشكل قطرة من المادة اللاصقة. قم بتركيب السلك أو الإبرة مع القطرة بالقرب من طرف المسبار الأفقي.
إيداع كرة مبعثرة على طرف المسبار. استخدم المعالج الدقيق لدفع طرف الألياف الضوئية للمسبار ببطء وبعناية في الخليط المحضر. ثم بسرعة سحب الطرف من الغراء وعرض الكرة المتناثرة في المجهر.
كرر حتى يتم ترسيب قطرة كروية من المادة اللاصقة بالحجم المطلوب على طرف الألياف الضوئية. تحضير الأطباق لتركيب العينات. باستخدام شعلة البوتان ، قم بتسخين الطرف الكبير من ماصة باستور لإذابة ثقب قطره 0.5 سم في قاع طبق بتري البلاستيكي.
أغلق الفتحة الموجودة على الجانب السفلي من الطبق بشريط كهربائي أو شريط مختبر. ثم املأ طبق بتري ربع الطريق وطبق بتري ثان على طول الطريق بالجيلاتين السائل واتركه يبرد إلى درجة حرارة الغرفة قبل قليل من الهلام. في طبق واحد ، ضع الخزعة في وسادة الجيلاتين اللزج التي تشكلت في الفتحة الموجودة في قاع الطبق.
باستخدام ماصة باستور ، أضف الجيلاتين بدرجة حرارة الغرفة برفق حول الخزعة حتى يمتلئ طبق بتري. بالنسبة للعينة الفارغة ، استخدم الطبق المملوء بالجيلاتين فقط. قم بتوصيل المسبار بحامل موجه رأسيا بحيث يشير نحو مصدر الضوء وقم بتأمين المسبار بمشابك أو مشابك خرطوم أو شريط بعمود طاولة بصري.
قم بتوصيل الطرف المنتهي ب SMA للألياف الضوئية للمسبار بمطياف الألياف البصرية USB وقم بتوصيل مقياس الطيف بالكمبيوتر باستخدام كابل USB. احتفظ بالمسبار والمتلاعبين في الموضع المحاذي الدقيق حيث سيتم جمع البيانات. استخدم قطعة قطن أو إبرة قياس دقيقة أو قطارة لتطبيق كمية صغيرة من مادة تشحيم السيليكون بعناية على جزء المسبار الذي سيتم إدخاله في الأنسجة لتقليل الاحتكاك بين جوانب المسبار وعينة الأنسجة.
الآن ، قم بإزالة الشريط الذي يغطي الفتحة الموجودة في طبق بتري للعينة وضعه في حامل العينة ، مع التأكد من تثبيته بإحكام في مكانه عن طريق الاحتكاك. استخدم المعالج الدقيق لخفض العينة على المسبار والسماح للمسبار بدخول الجيلاتين عبر الفتحة الموجودة على الجانب السفلي من طبق بتري. استمر حتى يصبح المسبار حوالي خمسة ملليمترات من أسفل طبقة الجيلاتين.
قم بتشغيل مصدر الضوء. باستخدام برنامج مقياس الطيف ، اضبط وقت تكامل مقياس الطيف حتى تكون الإشارة عالية قدر الإمكان ، ولكن ليس مشبعة. اضبط عدد عمليات المسح المتوسطة بين اثنين وخمسة ، وقيمة بكسل التجانس على ستة.
يمكن أن تختلف أوقات التكامل القابلة للاستخدام في هذه المرحلة بين واحد إلى 15 مللي ثانية لهذا الخط الأساسي. تحقق من أن وقت التكامل مناسب للقياس من خلال التأكد من أن الطيف ليس صاخبا جدا ولا مشبعا. قم بتغيير وقت التكامل إذا لزم الأمر.
حرك العينة لأسفل مسافة محددة باستخدام المناور الدقيق وقم بإجراء القياسات. استمر في حفظ الأطياف في كل موضع رأسي داخل الأنسجة. يتم تصور المظهر المجهري للمسبار القادم من خلال الأنسجة.
يتم عرض النسبة المئوية للضوء في أعماق الأنسجة المختلفة بالنسبة إلى خط الأساس. أهم شيء يجب تذكره هو أن هذه المجسات هشة ، لذا خذ وقتك وتأكد من أن تقاطعات المسبار آمنة قبل المتابعة. بعد إجراء المسبار ، يمكن تكييف تقنيات القياس.
على سبيل المثال ، بدون كرة التشتت ، يمكن استخدام المجسات لقياس الإشعاع الذي يصل إلى الكاشف من اتجاه واحد. بعد تطوير هذا المسبار ، تمكن الباحثون من قياس الضوء داخل كل من الدماغ والأنسجة الدهنية في الفئران باستخدام تباين في جهاز القياس الخاص بنا. ساعد هذا في الإجابة على سؤال حول ما إذا كان هناك ما يكفي من الضوء لتنشيط المستقبلات الضوئية الموجودة في أعماق الأنسجة.
