פרוטוקול זה משמעותי מכיוון שהוא מפשט ומאפשר מדידות קרינה בחומרים עבים, ומאפשר לנו לאסוף מידע חשוב בעת חקר מערכות חיות. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת מדידות ספקטרליות מפוענחות מרחבית בחומרים קולטים מאוד באמצעות ציוד שניתן לבנות וניסויים שניתן להריץ במעבדות שדה. שיטה זו ניתנת להתאמה וליישום על כל מערכת חיה.
הטכניקה של ביצוע הגשושיות היא ניואנסים, אבל בפועל עושה מושלם. התאם את טכניקת המדידה בהתאם לחומר הנבדק ובצע שינויים שיביאו למיקום רקמה בטוח יותר וחיכוך נמוך יותר של הבדיקה. כדי להתחיל לבנות את שרוול הזכוכית עם פיפטה פסטר 5.75 אינץ '.
בעזרת תפס תנין הניתן להרכבה, הרכיבו את פיפטת הזכוכית בקצה הרחב כך שהקצה המחודד פונה כלפי מטה לכיוון הרצפה וכיוון הפיפטה מאונך לרצפה. הניחו פד של סרט חשמלי על ידית אחיזה מפלסטיק במשקל 50 גרם כדי לסייע במניעת החלקה ותלו את ידית האחיזה מהקצה המחודד של הפיפטה. בעזרת לפיד בוטאן קטן, מחממים את הקצה המחודד של הפיפטה כמתואר בכתב היד.
כאשר אורך פיפטה גדל בכחמישה סנטימטרים, מיד להסיר את הלהבה. לאחר מכן, השתמש מספריים קטנים או חותך זכוכית כדי לקצץ את הקצה הנמשך של פיפטה. תייק את כל האזורים החדים בקצה החתוך באמצעות נייר קרבורונדום ושטוף כל שברי זכוכית זעירים או אבק באמצעות אלכוהול איזופרופיל ואחריו אוויר דחוס.
השתמש בסכין גילוח כדי לנתק את הסיב האופטי ולהסיר מחבר SMA אחד של סיב אופטי עם סיום SMA. הקפד לחתוך קרוב לאחת מסיומות SMA. לאחר מכן הסר את חמשת הסנטימטרים הבאים של מעיל פלסטיק ופיברגלס, כך שהסיב האופטי החשוף ייחשף ויבלוט משאר המכלול כולו.
השתמשו בלפיד הבוטאן כדי לשרוף את ציפוי פולימר הפוליאמיד מסיבי הזכוכית. יש לשטוף באיזופרופנול ולנגב את סיבי הזכוכית החשופים באמצעות מגבון ללא סיבים. כעת הרכיבו את הקצה החשוף של הסיב האופטי ישירות במהדק צבת על שולחן או קצה מדף, והניחו לקצה ה-SMA של הסיב להיתלות לכיוון הרצפה.
כארבעה עד שישה סנטימטרים מהמקום שבו מוחזק הסיב האופטי החשוף במהדק הצבת, מוסיפים את המשקולות למשיכה באמצעות שני מלחציים קטנים בקצה הז'קט של הסיב. כדי למשוך את הסיבים, התחילו עם להבת לפיד הבוטאן דולקת. החזיקו את לפיד הבוטאן סנטימטר אחד מהסיב החשוף כמתואר בכתב היד.
ולאפשר לסיב להימתח, למשוך, להפריד ולרדת לרצפה. בדקו את הסיב מתחת למיקרוסקופ וקצצו את קצה הסיב במספריים קטנים לדיסקציה במידת הצורך. השתמשו בעט אטום מוקצף כדי להכהות את דפנות הסיב ולמנוע כניסת אור תועה.
משכו בעדינות את קצה העט על פני הסיב, והותירו רק אזור קטן בקצה חשוף. תחת מיקרוסקופ סטריאו, הכנס בזהירות את הסיב האופטי המחודד לקצה הרחב של פיפטת הזכוכית שהשתנתה ודחף את הסיב עד שכמילימטר אחד של סיבים חשופים יבלוט מהקצה המחודד של הפיפטה. באמצעות סרט חשמלי, מחברים את קצה הסיב האופטי לקצה הרחב של הפיפטה.
שים טיפה של דבק ציאנואקרילט על מחט מד קטנה. בזהירות לגעת טיפה של דבק בקצה לחתוך של פיפטה משוך, הימנעות הקצה החשוף של הסיב משוך. כדי לשנות את קצה הסיב עם כדור פיזור, ליצור את חומר הגלם על ידי ערבוב טיפה של דבק לריפוי UV עם אבקת דו תחמוצת טיטניום ביחס שווה.
חבר את הגשושית למיקרומניפולטור עם מחזיק מוט הרכבה כך שהגשושית תהיה בכיוון אופקי. מכינים מאגר עבודה של חומר הפיזור על ידי טבילת קצה חוט או מחט בתערובת המוכנה, כך שתיווצר טיפת דבק. הר את החוט או המחט עם הטיפה ליד קצה הבדיקה האופקית.
הפקד כדור פיזור על קצה הגשוש. השתמש במיקרומניפולטור כדי לדחוף את קצה הסיב האופטי של הגשושית לאט ובזהירות לתוך התערובת המוכנה. ואז במהירות היה שולף את הקצה מהדבק ורואה את כדור הפיזור במיקרוסקופ.
חזור על הפעולה עד שטיפה כדורית של דבק בגודל הרצוי מונחת על קצה הסיב האופטי. הכינו את הכלים להרכבת הדגימות. בעזרת לפיד בוטאן, מחממים את הקצה הגדול של פיפטת פסטר כדי להמיס חור בקוטר 0.5 ס"מ בתחתית צלחת פטרי מפלסטיק.
אטמו את החור בצד התחתון של הצלחת בעזרת סרט חשמלי או סרט מעבדה. לאחר מכן מלאו צלחת פטרי אחת רבע מהדרך וצלחת פטרי שנייה עד הסוף בג'לטין הנוזלי ותנו לו להתקרר לטמפרטורת החדר רק לפני הג'לציה. בצלחת אחת, מניחים את הביופסיה בכרית של ג'לטין צמיג שנוצר בחור בתחתית המנה.
בעזרת פיפטה של פסטר, מוסיפים בעדינות ג'לטין בטמפרטורת החדר סביב הביופסיה עד שתבשיל הפטרי מלא. עבור הדגימה הריקה, השתמש בצלחת מלאה בג'לטין בלבד. חבר את הגשושית לתושבת בכיוון אנכי כך שתצביע לכיוון מקור האור ואבטח את הגשושית באמצעות מלחציים, מהדקים לצינורות או סרט דבק לעמוד שולחן אופטי.
חבר את הקצה האופטי של הסיב האופטי של הגשושית לספקטרומטר סיב אופטי USB וחבר את הספקטרומטר למחשב באמצעות כבל USB. שמור על הבדיקה והמניפולטורים במיקום המדויק שבו הנתונים ייאספו. השתמש בצמר גפן, מחט מד עדינה או טפטפת כדי למרוח בזהירות כמות קטנה של חומר סיכה סיליקון על החלק של הבדיקה שיוכנס לתוך הרקמה כדי להפחית את החיכוך בין הצדדים של הבדיקה לבין דגימת הרקמה.
כעת, הסירו את הסרט המכסה את החור בצלחת הפטרי של הדגימה והניחו אותו במחזיק הדגימה, כדי לוודא שהוא מוחזק היטב במקומו על ידי חיכוך. השתמש במיקרומניפולטור כדי להוריד את הדגימה אל הגשושית ולאפשר לגשושית להיכנס לג'לטין דרך החור בחלק התחתון של צלחת הפטרי. המשיכו עד שהבדיקה נמצאת במרחק של כחמישה מילימטרים מתחתית שכבת הג'לטין.
הפעל את מקור האור. באמצעות תוכנת הספקטרומטר, התאם את זמן שילוב הספקטרומטר עד שהאות גבוה ככל האפשר, אך לא רווי. הגדר את מספר הסריקות הממוצע בין שתיים לחמש, ואת ערך הפיקסלים המחליקים לשישה.
זמני שילוב שמישים בשלב זה יכולים לנוע בין אלפית שנייה אחת ל- 15 אלפיות שנייה עבור תוכנית בסיסית זו. ודא שזמן האינטגרציה מתאים למדידה על ידי כך שתוודא שהספקטרום אינו רועש מדי או רווי. שנה את זמן השילוב במידת הצורך.
הזז את הדגימה למרחק מסוים באמצעות המיקרומניפולטור ובצע את המדידות. המשך לשמור את הספקטרום בכל מיקום אנכי בתוך הרקמה. המראה המיקרוסקופי של הגשושית העולה דרך הרקמה הוא דמיינו.
אחוז האור בעומקי רקמה שונים ביחס לקו הבסיס מוצג. הדבר החשוב ביותר לזכור הוא כי בדיקות אלה הן שבירות, אז קח את הזמן שלך וודא את צמתי הבדיקה מאובטחים לפני שתמשיך. לאחר ביצוע הגשוש, ניתן להתאים את טכניקות המדידה.
לדוגמה, ללא כדור הפיזור, ניתן להשתמש בגשושיות כדי למדוד קרינה המגיעה לגלאי מכיוון אחד. לאחר פיתוח הגשושית הזו, החוקרים הצליחו למדוד אור הן בתוך המוח והן ברקמת השומן בעכברים באמצעות וריאציה על מכשיר המדידה שלנו. זה עזר לענות על השאלה אם יש מספיק אור כדי להפעיל פוטורצפטורים שנמצאים עמוק בתוך הרקמה.
