이 프로토콜은 두꺼운 재료의 방사도 측정을 단순화하고 허용하여 살아있는 시스템을 연구할 때 중요한 정보를 수집할 수 있기 때문에 중요합니다. 이 기술의 주요 장점은 구성 가능한 장비와 현장 실험실에서 실행할 수 있는 실험을 사용하여 흡수율이 높은 재료에서 공간적으로 분해된 스펙트럼 측정이 가능하다는 것입니다. 이 방법은 모든 생활 시스템에 적용하고 적용 할 수 있습니다.
프로브를 만드는 기술은 미묘한 차이가 있지만 연습이 완벽합니다. 프로브되는 재료에 따라 측정 기술을 조정하고 조직 위치를 보다 안전하게 유지하고 프로브 마찰을 줄이는 변경을 수행합니다. 시작하려면 5.75인치 파스퇴르 피펫으로 유리 슬리브를 제작하십시오.
장착 가능한 앨리게이터 클립을 사용하여 테이퍼진 끝이 바닥을 향하고 피펫의 방향이 바닥에 수직이 되도록 넓은 끝으로 유리 피펫을 장착합니다. 미끄러짐을 방지하기 위해 50g 플라스틱 바이스 그립에 전기 테이프 패드를 놓고 파이펫의 테이퍼 끝에서 바이스 그립을 걸 수 있습니다. 작은 부탄 토치를 사용하여 원고에 설명된 대로 피펫의 테이퍼진 끝을 가열합니다.
피펫 길이가 약 5인치 증가하면 즉시 화염을 제거하십시오. 그런 다음 작은 가위나 유리 절단기를 사용하여 피펫의 당겨진 끝을 다듬습니다. 카보런덤 종이를 사용하여 손질된 끝 부분의 날카로운 부분을 정리하고 이소프로필 알코올과 압축 공기를 사용하여 작은 유리 파편이나 먼지를 헹굽니다.
면도날을 사용하여 광섬유를 절단하고 SMA 종단 광섬유의 SMA 커넥터 1개를 제거합니다. SMA 종단 중 하나에 가깝게 절단해야 합니다. 그런 다음 다음 5cm의 플라스틱 및 유리 섬유 재킷을 제거하여 노출된 광섬유가 노출되고 전체 어셈블리의 나머지 부분에서 돌출되도록 합니다.
부탄 토치를 사용하여 유리 섬유에서 폴리아미드 폴리머 코팅을 태웁니다. 이소프로판올로 헹구고 보푸라기가 없는 물티슈를 사용하여 맨 유리 섬유를 닦습니다. 이제 광섬유의 맨 끝을 테이블이나 선반 가장자리의 플라이어 클램프에 직접 장착하여 광섬유의 SMA 종단 끝이 바닥을 향하도록 합니다.
베어 광섬유가 플라이어 클램프에 고정되는 위치에서 약 4-6인치 떨어진 곳에서 광섬유의 재킷 끝에 두 개의 작은 클램프를 사용하여 당기기 위한 추를 추가합니다. 섬유를 당기려면 부탄 토치 불꽃을 켠 상태에서 시작하십시오. 원고에 설명된 대로 노출된 섬유에서 1cm 떨어진 곳에 부탄 토치를 잡습니다.
그리고 섬유가 늘어나고, 당기고, 분리되고, 바닥에 떨어지도록 합니다. 현미경으로 섬유를 확인하고 필요한 경우 작은 해부 가위로 섬유 끝을 다듬습니다. 폼 불투명 펜을 사용하여 섬유의 측면을 어둡게 하고 미광의 유입을 방지합니다.
펜촉을 섬유를 가로질러 부드럽게 잡아당겨 끝의 작은 부분만 덮지 않은 채로 둡니다. 실체 현미경으로 테이퍼형 광섬유를 변경된 유리 피펫의 넓은 끝에 조심스럽게 삽입하고 약 1mm의 노출된 파이버가 피펫의 테이퍼 끝에서 튀어나올 때까지 파이버를 밀어냅니다. 전기 테이프를 사용하여 광섬유의 재킷 끝을 피펫의 넓은 끝에 고정합니다.
시아노아크릴레이트 접착제 한 방울을 작은 게이지 바늘에 떨어뜨립니다. 당겨진 섬유의 맨 끝을 피하면서 당겨진 피펫의 절단 가장자리에 접착제 방울을 조심스럽게 만집니다. 산란 구로 섬유 팁을 수정하려면 UV 경화형 접착제 한 방울과 이산화 티타늄 분말을 동일한 비율로 혼합하여 원료를 만듭니다.
프로브가 수평 방향이 되도록 장착 막대 홀더가 있는 미세 매니퓰레이터에 프로브를 부착합니다. 접착제 방울이 형성되도록 준비된 혼합물에 와이어 또는 바늘의 끝을 침지하여 산란 물질의 작업 저장소를 준비합니다. 수평 프로브 끝 근처에 물방울이 있는 와이어나 바늘을 장착합니다.
프로브 끝에 산란 구를 증착합니다. 마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 프로브의 광섬유 끝을 준비된 혼합물에 천천히 조심스럽게 밀어 넣습니다. 그런 다음 접착제에서 팁을 빠르게 빼내고 현미경으로 산란 공을 봅니다.
원하는 크기의 구형 접착제 방울이 광섬유 끝에 증착될 때까지 반복합니다. 샘플을 장착하기 위해 접시를 준비합니다. 부탄 토치를 사용하여 파스퇴르 피펫의 큰 끝을 가열하여 플라스틱 페트리 접시 바닥에 있는 직경 0.5cm의 구멍을 녹입니다.
접시 바닥면의 구멍을 전기 테이프 또는 실험실 테이프로 밀봉하십시오. 그런 다음 하나의 페트리 접시를 4분의 1로, 두 번째 페트리 접시를 액체 젤라틴으로 완전히 채우고 겔화 직전에 실온으로 식힙니다. 한 접시에 접시 바닥의 구멍에 형성된 점성 젤라틴 쿠션에 생검을 놓습니다.
파스퇴르 피펫을 사용하여 페트리 접시가 가득 찰 때까지 생검 주위에 실온 젤라틴을 부드럽게 추가합니다. 빈 샘플의 경우 젤라틴으로 채워진 접시만 사용하십시오. 광원을 가리키도록 프로브를 수직 방향 마운트에 부착하고 클램프, 호스 클램프 또는 광학 테이블 포스트에 테이프로 프로브를 고정합니다.
프로브 광섬유의 SMA 종단 끝을 USB 광섬유 분광계에 연결하고 USB 케이블을 사용하여 분광계를 컴퓨터에 연결합니다. 프로브와 매니퓰레이터를 데이터가 수집될 정확한 정렬 위치에 두십시오. 면봉, 미세 게이지 바늘 또는 스포이드를 사용하여 조직에 삽입될 프로브 부분에 소량의 실리콘 윤활제를 조심스럽게 도포하여 프로브 측면과 조직 사이의 마찰을 낮춥니다.amp르.
이제 시료 페트리 접시의 구멍을 덮고 있는 테이프를 제거하고 시료 홀더에 넣고 마찰에 의해 제자리에 단단히 고정되도록 합니다. 미세 매니퓰레이터를 사용하여 샘플을 프로브 위로 내리고 프로브가 페트리 접시 밑면의 구멍을 통해 젤라틴에 들어가도록 합니다. 프로브가 젤라틴 층의 바닥에서 약 5mm가 될 때까지 계속합니다.
광원을 켭니다. 분광계 소프트웨어를 사용하여 신호가 가능한 한 높지만 포화되지 않을 때까지 분광계 통합 시간을 조정합니다. 평균 스캔 횟수를 2에서 5 사이로 설정하고 스무딩 픽셀 값을 6으로 설정합니다.
이 단계에서 사용 가능한 통합 시간은 이 기준선에 대해 1밀리초에서 15밀리초 사이일 수 있습니다. 스펙트럼이 너무 잡음이 많거나 포화되지 않는지 확인하여 적분 시간이 측정에 적합한지 확인합니다. 필요한 경우 통합 시간을 변경합니다.
마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 샘플을 지정된 거리 아래로 이동하고 측정을 수행합니다. 조직 내의 각 수직 위치에서 스펙트럼을 계속 저장합니다. 조직을 통해 올라오는 프로브의 미세한 모습이 시각화됩니다.
기준선을 기준으로 다른 조직 깊이에서 빛의 백분율이 표시됩니다. 기억해야 할 가장 중요한 점은 이러한 프로브가 깨지기 쉬우므로 진행하기 전에 시간을 갖고 프로브 접합부가 안전한지 확인하십시오. 프로브를 만든 후 측정 기술을 적용할 수 있습니다.
예를 들어, 산란 공이 없으면 프로브를 사용하여 단일 방향에서 검출기에 도달하는 광도를 측정할 수 있습니다. 이 프로브를 개발한 후 연구자들은 측정 장치의 변형을 사용하여 생쥐의 뇌와 지방 조직 내부의 빛을 측정할 수 있었습니다. 이것은 조직 깊숙이 존재하는 광수용체를 활성화하기에 충분한 빛이 있는지에 대한 질문에 답하는 데 도움이 되었습니다.
