في الجسم الحي نهج العظم العضوي لحصاد الخلايا الجذعية / السلفية العلاجية المكونة للدم

لقد شاركنا منذ فترة طويلة في أبحاث المواد الحيوية ، ونقدم المفهوم الرائد لعلماء الأحياء المادية في ظل تطوير الفيروسات ، ومواد إصلاح العظام النشطة ، والتقنيين لعامل النمو والتحضير والتنشيط. قمنا بتطوير نهج Invivo Osteo-Organoid باستخدام المواد النشطة بيولوجيا لتحقيق الإنتاج عند الطلب للعقيدات الذاتية والأنسجة والخلايا لعلاج الأمراض. تواجه التكنولوجيا التقليدية للتوسع الفردي للخلايا الجذعية قيودا في الحفاظ على الوظائف الفسيولوجية للخلايا الجذعية.

يبني بروتوكولنا بيئة مكروية للثقافات الفردية لضمان كمية وفيرة من الخلايا الجذعية مع الحفاظ على محفزها. للبدء ، ضع محلول المخزون البشري المؤتلف وإسفنجة الجيلاتين غير المفتوحة على مقعد نظيف معقم. استخدم مقصا معقما لتقطيع إسفنجة الجيلاتين إلى 48 قطعة بحجم موحد ونقلها إلى طبق 48 بئرا.

ماصة محلول المخزون البشري المؤتلف عدة مرات لخلطه جيدا. استنشق 30 ميكرولترا من المحلول وأضفه بالتنقيط إلى إسفنجة الجيلاتين. ثم أغلق اللوحة المكونة من 48 بئرا بطبقة من البارافيلم

أخرجي الطبق من المقعد النظيف وضعيه على درجة حرارة 20 درجة مئوية تحت الصفر. للبدء ، انقل الفأر المخدر إلى منطقة الجراحة ، وضعه في وضع الاستلقاء الجانبي الأيمن لسهولة زرع السقالة النشطة بيولوجيا في الساق اليسرى. باستخدام آلة الحلاقة ، احلق شعر الساق اليسرى وقم بتطهير المنطقة المحلوقة باستخدام جولات متناوبة من الكلورهيكسيدين والكحول ، ثلاث مرات لكل منهما.

بعد إجراء الشق ، أدخل مقص العيون في عضلة الحقيبة في اتجاه الساق لتوفير مساحة لزرع المواد اللاحقة. الآن ، خذ السقالة النشطة بيولوجيا المحضرة المحملة بالإنسان المؤتلف وباستخدام ملقط العين ، وقرصها في شكل أسطواني. ازرع السقالة في جيب العضلات على طول الشق الذي تم إنشاؤه سابقا.

بعد 12 أسبوعا من الزرع ، قم بتخدير الفأر وافصل الطرف الخلفي عن الجذع بعناية. باستخدام مقص مصغر ، قم بإزالة الأنسجة العضلية بدقة من عضيات العظام. تخلص من أي أنسجة رخوة متصلة باستخدام الشاش لضمان نظافة عينة من العظم العضوي.

قم بإصلاح جزء من العظم العضوي في محلول بارافورمالدهيد 4٪ لمدة 24 ساعة في درجة حرارة الغرفة للتحليل النسيجي. للبدء ، قم بحصاد العظام العضوية من الفئران المزروعة بسقالة تحتوي على إنسان مؤتلف ضع عظام العظام العضوية في ملاط ، وأضف ملليلترا واحدا من HBSS ، بدون أيونات الكالسيوم والمغنيسيوم. استخدم مقصا جراحيا لتقطيع العينات ثم سحقها برفق في الهاون والمدقة.

مرر النتيجة في تعليق الخلية من خلال مصفاة خلية 40 ميكرومتر. ثم قم بطرده عند 300 جم لمدة خمس دقائق عند أربع درجات مئوية. بعد ذلك ، تخلص من الطافف.

أعد تعليق كريات الخلية في 300 ميكرولتر من HBSS واخلطها جيدا لتحقيق تعليق خلوي موحد. ضع الماوس المخدر تحت الإشعاع المميت على وسادة تسخين مثبتة على 37 درجة مئوية. بعد التأكد من التخدير الكامل ، ضع الفأر في الاستلقاء الجانبي الأيسر مع توجيه رأسه إلى اليمين.

باستخدام حقنة سعة ملليلتر واحد بإبرة قياس 25 ، قم بشفط 200 ميكرولتر من تعليق الخلية المحضر. لكشف العين للإجراء ، ضع إصبعا على الجزء العلوي من الرأس وعلى طول خط الفك ، واسحب الجلد برفق للخلف والأسفل. أدخل الإبرة بعناية بحيث يكون الشطبة متجهة لأسفل في القناة الإنسية للعين بزاوية 30 درجة تقريبا.

برفق ، اتبع محيط مقلة العين بالإبرة حتى تصل إلى قاعدة العين. حقن تعليق الخلية بسلاسة وببطء في المنطقة المخصصة. بعد الانتهاء من الحقن ، أعد الفأر إلى قفصه للسماح بالتعافي.