치료용 조혈 줄기세포/전구세포를 채취하기 위한 In vivo Osteo-organoid 접근법

우리는 오랫동안 생체 재료 연구에 종사해 왔으며, 바이러스, 활성 뼈 복구 재료 개발 중인 재료 생물학자와 성장 인자, 준비 및 활성화를 위한 기술자라는 선구적인 개념을 도입했습니다. 우리는 질병 치료를 위한 자동 결절, 조직 및 세포의 주문형 생산을 달성하기 위해 생체 활성 물질을 사용하는 In Vivo Osteo-Organoid 접근 방식을 개발했습니다. 줄기세포의 개체 증식이라는 전통적인 기술은 줄기세포의 생리적 기능을 유지하는 데 한계가 있습니다.

당사의 프로토콜은 자극을 보존하면서 풍부한 양의 줄기세포를 보장하기 위해 개별 배양의 미세환경을 구축합니다. 시작하려면 재조합 인간 재고 용액과 개봉하지 않은 젤라틴 스폰지를 멸균된 깨끗한 벤치에 놓습니다. 멸균 된 가위를 사용하여 젤라틴 스펀지를 균일 한 크기의 48 조각으로 자르고 48웰 플레이트에 옮깁니다.

재조합 인간 스톡 용액을 여러 번 피펫팅하여 완전히 혼합합니다. 용액 30마이크로리터를 흡입하고 젤라틴 스펀지에 방울로 추가합니다. 그런 다음 48웰 플레이트를 파라필름 층으로 밀봉합니다.

클린 벤치에서 플레이트를 제거하고 섭씨 영하 20도의 온도에 놓습니다. 먼저 마취된 마우스를 수술 부위로 옮기고 생체 활성 골격을 왼쪽 다리에 쉽게 이식할 수 있도록 오른쪽 측면 누운 위치에 배치합니다. 면도기를 사용하여 왼쪽 다리의 수염을 면도하고 클로르헥시딘과 알코올을 번갈아 가며 3회씩 면도한 부위를 소독합니다.

절개 후 안과 가위를 경골 방향으로 주머니 근육에 삽입하여 후속 재료 이식을 위한 공간을 제공합니다. 이제 재조합 인간이 적재 된 준비된 생체 활성 골격을 가져 와서 안과 겸자를 사용하여 원통형으로 꼬집습니다. 이전에 만든 슬릿을 따라 근육 주머니에 골격을 이식합니다.

이식 12주 후 마우스를 마취하고 뒷다리를 몸통에서 조심스럽게 분리합니다. 소형 가위를 사용하여 골오가노이드에서 근육 조직을 꼼꼼하게 제거합니다. 깨끗한 골오가노이드 샘플을 보장하기 위해 거즈를 사용하여 부착된 연조직을 제거합니다.

조직학적 분석을 위해 4% 파라포름알데히드 용액에 골오가노이드의 일부를 실온에서 24시간 동안 고정합니다. 먼저 재조합 인간이 포함된 골격을 이식한 마우스에서 골오가노이드를 채취하여 모르타르에 골오가노이드를 넣고 칼슘과 마그네슘 이온이 없는 HBSS 1ml를 추가합니다. 수술용 가위를 사용하여 샘플을 자른 다음 절구와 절굿공이로 부드럽게 부수십시오.

결과를 40마이크로미터 세포 여과기를 통해 세포 현탁액에 전달합니다. 그런 다음 300G에서 섭씨 4도에서 5분 동안 원심분리한다. 그 후, 상등액을 버리십시오.

세포 펠릿을 300마이크로리터의 HBSS에 다시 현탁시키고 잘 혼합하여 균일한 세포 현탁액을 얻습니다. 마취된 치명적으로 조사된 마우스를 섭씨 37도로 설정된 가열 패드에 놓습니다. 완전한 마취를 확인한 후 머리를 오른쪽으로 향하게 하여 마우스를 왼쪽 측면 누운 자세로 놓습니다.

25게이지 바늘이 있는 1ml 주사기를 사용하여 준비된 세포 현탁액 200마이크로리터를 흡인합니다. 시술을 위해 눈을 노출시키려면 머리 꼭대기와 턱선을 따라 손가락을 놓고 피부를 부드럽게 앞뒤로 당깁니다. 베벨이 아래를 향하도록 바늘을 약 30도 각도로 눈의 내측 안각에 조심스럽게 삽입합니다.

바늘이 눈 바닥에 닿을 때까지 바늘로 안구의 윤곽을 따라 부드럽게 따라갑니다. 세포 현탁액을 지정된 부위에 부드럽고 천천히 주입합니다. 주입을 완료한 후 회복을 위해 마우스를 케이지로 되돌립니다.