Uzun süredir biyomalzeme araştırmalarıyla uğraşıyoruz, gelişmekte olan virüs, aktif kemik onarım malzemeleri ve büyüme faktörü, hazırlama ve aktivasyon için teknoloji uzmanları altında malzeme biyologlarının öncü konseptini tanıtıyoruz. Hastalık tedavisi için oto nodüllerin, dokuların ve hücrelerin talep üzerine üretimini sağlamak için biyoaktif malzemeler kullanarak bir In Vivo Osteo-Organoid yaklaşımı geliştirdik. Kök hücrelerin bireysel olarak genişletilmesine yönelik geleneksel teknoloji, kök hücrelerin fizyolojik işlevlerinin sürdürülmesinde sınırlamalarla karşı karşıyadır.
Protokolümüz, uyaranlarını korurken bol miktarda kök hücre sağlamak için bireysel bir kültürün mikro ortamını oluşturur. Başlamak için, rekombinant insan stok solüsyonunu ve açılmamış jelatin süngeri steril temiz bir tezgah üzerine yerleştirin. Jelatin süngeri 48 eşit büyüklükte parçaya kesmek için sterilize makas kullanın ve bunları 48 oyuklu bir plakaya aktarın.
İyice karıştırmak için rekombinant insan suyu çözeltisini birkaç kez pipetleyin. Solüsyondan 30 mikrolitre aspire edin ve jelatin süngere damla damla ekleyin. Ardından, 48 oyuklu plakayı bir parafilm tabakası ile kapatın.
Plakayı temiz tezgahtan çıkarın ve eksi 20 santigrat derece sıcaklığa yerleştirin. Başlamak için, anestezi uygulanmış fareyi cerrahi alana aktarın ve biyoaktif iskelenin sol bacağa kolayca implante edilmesi için sağ lateral yaslanmış pozisyonda konumlandırın. Bir tıraş makinesi kullanarak, sol bacağın kıllarını tıraş edin ve traş edilen alanı, her biri üç kez dönüşümlü klorheksidin ve alkol turları kullanarak dezenfekte edin.
Kesi yapıldıktan sonra, sonraki materyal implantasyonu için yer sağlamak için kesenin kasına tibia yönünde oftalmik makas yerleştirin. Şimdi, rekombinant insan yüklü hazırlanmış biyoaktif iskeleyi alın ve oftalmik forseps kullanarak silindirik bir şekle sıkıştırın. İskeleyi daha önce oluşturulan yarık boyunca kas cebine implante edin.
12 haftalık implantasyondan sonra, fareyi uyuşturun ve arka bacakyı gövdeden dikkatlice ayırın. Minyatür makas kullanarak, kas dokusunu osteo-organoidlerden titizlikle çıkarın. Temiz bir osteo-organoid örneği sağlamak için gazlı bez kullanarak bağlı yumuşak dokuları ortadan kaldırın.
Osteo-organoidlerin bir kısmını, histolojik analiz için oda sıcaklığında 24 saat boyunca% 4 Paraformaldehit çözeltisine sabitleyin. Başlamak için, rekombinant insan içeren bir iskele ile implante edilen farelerden osteo-organoidleri toplayın Osteo-organoidleri bir harç içine yerleştirin ve kalsiyum ve magnezyum iyonları olmadan bir mililitre HBSS ekleyin. Numuneleri doğramak için cerrahi makas kullanın ve ardından bir havan ve havan tokmağında hafifçe ezin.
Hücre süspansiyonundaki sonucu 40 mikrometrelik bir hücre süzgecinden geçirin. Ardından, dört santigrat derecede beş dakika boyunca 300 G'de santrifüjleyin. Daha sonra, süpernatanı atın.
Hücre peletlerini 300 mikrolitre HBSS'de yeniden süspanse edin ve homojen bir hücre süspansiyonu elde etmek için iyice karıştırın. Anestezi uygulanmış alt letoral ışınlanmış fareyi 37 santigrat dereceye ayarlanmış bir ısıtma yastığına yerleştirin. Tam anesteziyi sağladıktan sonra, fareyi başı sağa bakacak şekilde sol lateral yatış pozisyonunda konumlandırın.
25 gauge iğneli bir mililitrelik şırınga kullanarak, hazırlanan hücre süspansiyonunun 200 mikrolitresini aspire edin. İşlem için gözü açığa çıkarmak için, başın üstüne ve çene çizgisi boyunca bir parmağınızı yerleştirin ve cildi nazikçe geriye ve aşağı çekin. İğneyi, eğim aşağı bakacak şekilde gözün medial kantusuna yaklaşık 30 derecelik bir açıyla dikkatlice yerleştirin.
Nazikçe, göz küresinin konturunu iğne ile gözün tabanına ulaşana kadar takip edin. Hücre süspansiyonunu belirlenen alana düzgün ve yavaş bir şekilde enjekte edin. Enjeksiyonu tamamladıktan sonra, iyileşmeye izin vermek için fareyi kafesine geri koyun.
