الهدف من هذا البحث هو معالجة آثار الجفاف على الزراعة. مع استمرار تغير المناخ ، هناك زيادة في الجفاف ، ويؤثر الجفاف على الأمن الغذائي. تعتبر الأيض مهمة لتحديد وتحديد تأثير الجفاف على طعامنا.
يتمثل التحدي الكبير في علم التمثيل الغذائي في تحقيق مستوى عال من اليقين للمركبات المحددة. باستخدام الميثوكسيأمين بدلا من الهيدروكسيلامين في خطوة التأكسد، قمنا بتحسين كفاءة خطوة السيليلة اللاحقة لأن مجموعة الميثوكسي لن تتفاعل مع MSTFA. تركز الطرق الحالية لمراقبة استجابات النبات للإجهاد البيئي على عمليات أو أنسجة محددة.
في حين أن هذه الطريقة أكثر تكاملا من خلال الكشف عن الإشارات الكيميائية في منتج الحبوب النهائي. في المستقبل ، نود استخدام هذه الطريقة لفهم كيفية تأثير الجفاف والزراعة البينية على الشعير. الشعير حبة مهمة للأمن الغذائي ، ونريد أن نفهم كيف سيؤثر تغير المناخ عليه.
للبدء ، قم بتحميل 200 ملليغرام من دقيق الشعير في خزان المذيبات في الطور الصلب ، أو SPE. نقع الدقيق مع 200 ميكرولتر من الميثانول لمدة 20 دقيقة حتى ينقع. قم بإزالة الميثانول من خلال التبخر تحت الفراغ لمدة 30 دقيقة.
عند التجفيف ، قم بتوصيل العمود بمشعب فراغ. استخرج جزء المكونات غير القطبية A مع ثنائي كلورو الميثان في قارورة سعة 10 ملليلتر ، وقم بتشغيل مشعب التفريغ حتى يجف الدقيق. بعد ذلك ، أضف مزيجا من الميثانول والماء منزوع الأيونات لاستخراج جزء المكونات القطبية B في قارورة سعة 10 ملليلتر.
قم بتشغيل مشعب التفريغ حتى يجف الدقيق. أضف المعيار 1 والمعيار 2 إلى الكسر A واخلطه عن طريق سحب العينات المتكرر. تبخر المذيب بالكامل تحت ضغط منخفض باستخدام مبخر دوار.
ثم أعد إذابة العينة في ميثيل ثلاثي بوتيل الأثير ، أو MTBE ، قبل إضافة الميثانول وميثوكسيد الصوديوم إلى القارورة. اسمح للأسترة بالاستمرار لمدة 90 دقيقة في درجة حرارة الغرفة تحت التحريك المغناطيسي. أضف حمض الهيدروكلوريك المائي إلى المحلول.
امزج المحلول المحمض مع ثنائي كلورو ميثان. اجمع محتويات القارورة باستخدام ماصة باستور طويلة، واترك المراحل تنفصل في الماصة. اغسل المرحلة العضوية بإضافة حمض الهيدروكلوريك المائي.
مرة أخرى ، اجمع محتويات القارورة باستخدام ماصة باستور طويلة واترك المراحل تنفصل في الماصة. انقل المرحلة العضوية السفلية إلى قارورة جديدة وتبخر حتى تجف باستخدام مبخر دوار. بعد ذلك ، أضف كبريتات الصوديوم اللامائية إلى عمود SPE.
قم بإذابة العينة المتبخرة في ثنائي كلورو ميثان وتحميلها على عمود SPE. الكسر المزخرف 1 مع ثلاثة أجزاء من n-Hexane و MTBE في قارورة سعة 10 ملليلتر. تبخر المحلول الذي يحتوي على الكسر 1 حتى يجف على مبخر دوار.
أعد إذابة العينة في n-Hexane وانقلها إلى قارورة أخذ العينات التلقائية ل GC / MS. بعد ذلك ، قم بإخراج الكسر المسبق 2 من عمود SPE مع ثلاثة أجزاء لاحقة من n-Hexane و MTBE في قارورة سعة 10 ملليلتر. بعد تبخير الكسر المسبق 2 للجفاف ، أعد إذابته في البيريدين اللامائي وأضف MSTFA.
باستخدام أربطة مضغوطة ، قم بتثبيت قفاز نيترو على نهاية المحقنة مع إزالة المكبس. املأ البالون بالأرجون اللامائي وقم بإرفاق إبرة يمكن التخلص منها بالمحقنة. ادفع حقنة البالون عبر حاجز الزجاجة التي تحتوي على الكاشف اللامائي وأدخل حقنة ثانية بإبرة طويلة لسحب المذيب.
اغسل قارورة العينة بتيار لطيف من الأرجون اللامائي بعد إغلاق القارورة بالبارافيلم ، ضعها في حمام زيت 70 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. بعد السيللة ، قم بتبريد الجزء 2 في درجة حرارة الغرفة لمدة خمس دقائق وقم بتحميله في قارورة أخذ العينات الآلية.
أضف المعيارين 3 و4 إلى الكسر B واخلطه عن طريق سحب العينات المتكرر. انقل ملليلترين وأربعة ملليلترات من خليط الكسر B إلى قارورة جديدة لمعالجتها في الكسر 3 والكسر 4 على التوالي. تبخر الكسر المسبق 3 حتى يجف على مبخر دوار ، متبوعا بالتبخر المشترك مع البيريدين اللامائي
أعد إذابة الكسر المسبق 3 في بيريدين اللامائي وأضف ثلاثي ميثيل سيليميدازول. اغسل قارورة العينة بتيار لطيف من الأرجون اللامائي بعد إغلاق قارورة العينة بالبارافيلم ، سخنيها لمدة 20 دقيقة في حمام زيت 70 درجة مئوية.
بعد تبريد المحلول إلى درجة حرارة الغرفة ، أضف n-Hexane والماء منزوع الأيونات. حرك الخليط وانقل المرحلة العضوية العلوية إلى قارورة أخذ العينات الأوتوماتيكية باستخدام ماصة باستور طويلة. تبخر الكسر المسبق 4 حتى يجف على مبخر دوار ، متبوعا بالتبخر المشترك مع البيريدين اللامائي
أعد إذابة العينة في البيريدين اللامائي وأضف الميثوكسيلامين هيدروكلوريد. بعد غسل القارورة بالأرجون اللامائي ، قم بتأكسامات القارورة المختومة لمدة 30 دقيقة في حمام زيت 70 درجة مئوية. بمجرد أن تبرد القارورة إلى درجة حرارة الغرفة ، أضف MSTFA وقم بتسخينه لمدة 20 دقيقة في حمام زيت.
بعد ذلك ، أضف n-Hexane والماء منزوع الأيونات في القارورة واجمع الطور المائي السفلي باستخدام ماصة باستور طويلة. بعد الغسيل الأخير ، تبخر المرحلة المائية حتى تجف باستخدام مبخر دوار متبوعا بتبخير المادة المتبقية باستخدام الأسيتونيتريل اللامائي أعد إذابة العينة في الأسيتونيتريل اللامائي و MSTFA.
بعد غسل القارورة بالأرجون اللامائي ، سخني القارورة محكمة الغلق لمدة 60 دقيقة في حمام زيت 70 درجة مئوية. قم بتحميل العينات على GC/MS باستخدام وحدات تخزين الحقن المحددة. قم بتشغيل العينات بتدفق مقسم يبلغ 14 مل في الدقيقة من الهيليوم عند درجة حرارة حقن تبلغ 250 درجة مئوية.
بالنسبة للكسرين 1 و 2 ، قم بزيادة درجة حرارة العمود من 100 إلى 300 درجة مئوية بمعدل 4 درجات مئوية في الدقيقة. بعد الوصول إلى 300 درجة مئوية ، احتفظ بدرجة الحرارة لمدة 10 دقائق. بالنسبة للكسر 3 ، قم بتسخين العمود واستمركه عند 300 درجة مئوية طوال فترة التشغيل.
بالنسبة للكسر 4 ، قم بزيادة درجة حرارة العمود من 70 إلى 142 درجة مئوية عند 2.5 درجة مئوية في الدقيقة. حافظ على درجة الحرارة عند 142 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. ثم ارفعي درجة الحرارة من 142 إلى 235 درجة مئوية عند 4 درجات مئوية في الدقيقة ، مع الاستمرار لمدة 10 دقائق.
أخيرا ، اخبزي العمود على حرارة 320 درجة مئوية لمدة 8 دقائق.
