이 연구의 목표는 가뭄이 농업에 미치는 영향을 해결하는 것입니다. 기후가 계속 변화함에 따라 가뭄이 증가하고 가뭄은 식량 안보에 영향을 미칩니다. 대사체학은 가뭄이 식품에 미치는 영향을 식별하고 정량화하는 데 중요합니다.
대사체학의 큰 과제는 식별된 화합물의 높은 수준의 확실성을 달성하는 것입니다. 옥시메이션 단계에서 하이드록실아민 대신 메톡시아민을 사용함으로써 메톡시기가 MSTFA와 반응하지 않기 때문에 후속 실릴화 단계의 효율성을 개선했습니다. 환경 스트레스에 대한 식물의 반응을 관찰하는 현재의 방법은 특정 과정이나 조직에 초점을 맞추고 있습니다.
이 방법은 최종 곡물 제품에서 화학 신호를 감지하여 보다 통합적입니다. 앞으로는 이 방법을 사용하여 가뭄과 간작이 보리에 어떤 영향을 미치는지 이해하고자 합니다. 보리는 식량 안보에 중요한 곡물이며, 우리는 기후 변화가 보리에 어떤 영향을 미칠지 이해하고자 합니다.
시작하려면 200mg의 보리 가루를 고체상 추출(SPE) 용매 저장고에 로드합니다. 밀가루에 메탄올 200마이크로리터를 20분 동안 담가 침지합니다. 진공 상태에서 30분 동안 증발을 통해 메탄올을 제거합니다.
건조되면 컬럼을 진공 매니폴드에 부착합니다. 디클로로메탄이 함유된 비극성 성분 분획 A를 10ml 바이알에 추출하고 밀가루가 마를 때까지 진공 매니폴드를 실행합니다. 다음으로, 메탄올과 탈이온수의 혼합물을 첨가하여 극성 성분 분획 B를 10ml 바이알에 추출합니다.
밀가루가 마를 때까지 진공 매니폴드를 실행합니다. 분수 A에 표준물질 1 및 표준물질 2를 첨가하고 반복적인 피펫팅으로 혼합합니다. 회전 증발기를 사용하여 감소된 압력 하에서 용매를 완전히 증발시킵니다.
그런 다음 바이알에 메탄올과 메톡시드나트륨을 첨가하기 전에 샘플을 메틸 tert-부틸 에테르(MTBE)에 다시 용해시킵니다. 에스테르 교환이 자기 교반 하에 실온에서 90분 동안 진행되도록 합니다. 용액에 수성 염산을 첨가하십시오.
산성화된 용액을 디클로로메탄과 혼합합니다. 긴 파스퇴르 피펫으로 바이알의 내용물을 수집하고 피펫에서 상을 분리하십시오. 수성 염산을 첨가하여 유기상을 세척합니다.
다시 말하지만, 긴 파스퇴르 피펫으로 바이알의 내용물을 수집하고 피펫에서 상이 분리되도록 합니다. 하부 유기상을 새 바이알로 옮기고 회전 증발기를 사용하여 건조되도록 증발시킵니다. 다음으로, 무수 황산나트륨을 SPE 컬럼에 첨가합니다.
증발된 샘플을 디클로로메탄에 용해시키고 SPE 컬럼에 로드합니다. 분획 1을 n-Hexane과 MTBE의 3개 부분으로 10ml 바이알에 용리합니다. 분획 1을 포함하는 용액을 회전 증발기에서 건조시키십시오.
n-Hexane에 시료를 재용해하고 GC/MS용 자동 시료 주입기 바이알로 옮깁니다. 다음으로 SPE 컬럼의 사전 분획 2를 n-Hexane 및 MTBE의 후속 3개 부분과 함께 10ml 바이알로 용리합니다. 프리 프랙션 2를 건조시키기 위해 증발시킨 후, 무수 피리딘에 재용해시키고 MSTFA를 첨가한다.
지퍼 타이를 사용하여 플런저를 제거한 상태에서 주사기 끝에 니트로 장갑을 고정합니다. 풍선에 무수 아르곤을 채우고 주사기에 일회용 바늘을 부착합니다. 무수 시약이 들어있는 병의 격막을 통해 풍선 주사기를 밀어 넣고 긴 바늘로 두 번째 주사기를 삽입하여 용매를 끌어 올립니다.
샘플 바이알을 무수 아르곤의 부드러운 흐름으로 세척합니다. 파라필름으로 바이알을 밀봉한 후 섭씨 70도의 오일 수조에 15분 동안 넣습니다. 실릴화 후 분획 2를 실온에서 5분 동안 냉각하고 오토샘플러 바이알에 넣습니다.
분수 B에 표준물질 3 및 4를 추가하고 반복적인 피펫팅으로 혼합합니다. 2 및 4 밀리리터의 분획 B 혼합물을 새 바이알로 옮겨 각각 분수 3 및 분획 4로 처리합니다. pre-fraction 3을 회전 증발기에서 건조시킬 때까지 증발시킨 다음 무수 피리딘으로 동시 증발시킵니다.
프리 분획 3을 무수 피리딘에 재용해시키고 트리메틸실리미다졸을 첨가합니다. 샘플 바이알을 무수 아르곤의 부드러운 흐름으로 세척합니다. 파라필름으로 샘플 바이알을 밀봉한 후 섭씨 70도의 오일 배스에서 20분 동안 가열합니다.
용액을 실온으로 냉각시킨 후 n-헥산과 탈이온수를 첨가합니다. 혼합물을 저어주고 긴 파스퇴르 피펫을 사용하여 상부 유기상을 자동 시료 주입기 바이알로 옮깁니다. pre-fraction 4를 회전 증발기에서 건조시킬 때까지 증발시킨 다음 무수 피리딘으로 동시 증발합니다.
샘플을 무수 피리딘에 재용해시키고 메톡실아민 염산염을 첨가합니다. 바이알을 무수 아르곤으로 세척한 후, 파라필름으로 밀봉된 바이알을 섭씨 70도의 오일 수조에서 30분 동안 옥사메이트합니다. 바이알이 실온으로 냉각되면 MSTFA를 넣고 오일 수조에서 20분 동안 실릴레이트합니다.
다음으로, n-헥산과 탈이온수를 바이알에 넣고 긴 파스퇴르 피펫을 사용하여 하부 수성상을 수집합니다. 마지막 세척 후, 회전 증발기를 사용하여 수성상을 건조로 증발시킨 다음 무수 아세토니트릴로 나머지 물질을 공증발시킵니다. 샘플을 무수 아세토니트릴 및 MSTFA에 재용해합니다.
바이알을 무수 아르곤으로 세척한 후 밀봉된 바이알을 섭씨 70도의 오일 배스에서 60분 동안 가열합니다. 지정된 주입 부피를 사용하여 GC/MS에 샘플을 로드합니다. 섭씨 250도의 주입 온도에서 분당 14밀리리터의 헬륨의 분할 흐름으로 샘플을 실행합니다.
분수 1과 2의 경우 분당 섭씨 4도의 비율로 컬럼 온도를 섭씨 100도에서 300도까지 높입니다. 섭씨 300도에 도달한 후 10분 동안 온도를 유지합니다. 분수 3의 경우 컬럼을 가열하고 전체 실행 동안 섭씨 300도에서 유지합니다.
분수 4의 경우 분당 2.5°C의 속도로 컬럼 온도를 섭씨 70도에서 142도로 높입니다. 온도를 섭씨 142도로 10분 동안 유지합니다. 그런 다음 분당 섭씨 4도에서 섭씨 142도에서 235도까지 온도를 높이고 10분 동안 유지합니다.
마지막으로 컬럼을 섭씨 320도에서 8분 동안 굽습니다.
