خلال العقد الماضي ، تم تطوير نماذج لإصابات الدماغ الرضحية الخفيفة في القوارض المصابة بإصابات مغلقة في الرأس. ومع ذلك ، فإن تنفيذ هذه النماذج في تطوير القوارض متناثر مقارنة بأدبيات إصابات الدماغ الرضية للبالغين. للتعامل مع الأهمية السريرية ، طورت هذه الدراسة إصابة في الرأس المغلقة مع اضطرابات طويلة الأمد ، أو نموذج إصابات الدماغ الرضية للأطفال.
لفترة طويلة ، ركزت إصابات الدماغ الرضحية على عواقب إصابات الدماغ الشديدة. في العقدين الماضيين ، تم الإبلاغ عن تأثيرات خفيفة لإصابات الدماغ الرضية ، لكن القليل من الدراسات قيمت العواقب طويلة المدى. مع تطور جديد في التصوير العصبي ، هناك اهتمام متزايد بالنتائج طويلة المدى التي كانت مفقودة لنماذج طب الأطفال.
تم تصميم CHILD لسد هذه الفجوة. باستخدام نموذج CHILD ، قمنا بتمييز التغيرات التدريجية والمستمرة داخل الدماغ مثل الوفيات العصبية ، والتصوير بالرنين المغناطيسي للانتشار المتغير ، والنشاط العصبي المعدل واللدونة ، وزيادة الدبقي ، والاضطرابات السلوكية التدريجية ، والخلل الوظيفي في القلب مع تقدم العمر. يقدم نموذج CHILD الجديد الخاص بنا ميزة إجراؤه وقابليته للتكرار في مختبرات مختلفة.
مع التبني على نطاق واسع ، يمكننا أن نتوقع امتدادا في المعرفة حول العواقب طويلة المدى لارتجاج المخ لدى الأطفال. باستخدام نموذج CHILD ، نواصل التحقيق في آثار وعواقب الإجهاد المتكرر. لقد بدأنا بالفعل في متابعة كيف يمكن أن تساهم الآثار المشتركة للعدوى المبكرة بعد الولادة والطفل في النتائج طويلة الأجل.
بالإضافة إلى ذلك ، نلاحظ حماية سرير الأوعية الدموية بعد الإجهاد المتكرر ، مما يشير إلى أنه قد يحدث التكييف المسبق بعد الإصابة المبكرة ، لكن هذا ينتظر مزيدا من التحقيق. للبدء ، قم بتسخين الغرفة لتحريض التخدير وأقفاص التعافي مسبقا باستخدام وسادات الاحترار لمنع انخفاض حرارة الجسم. اضبط الجهاز التجسيمي مع تركيب المصطادم بزاوية 90 درجة.
تحقق من شد وتأمين جميع أجزاء الجهاز التجسيمي بشكل صحيح. تأكد من أن المكبس مشدود بإحكام في الاصطدام. بعد ذلك ، قم بقص لوح الألمنيوم ولف الإطار التجسيمي بورق الألمنيوم لإنشاء وسادة للحيوان للراحة عليها.
قم بتأمين موضع وتوتر الرقاقة باستخدام شريط مختبر لدعم وزن. بعد ذلك ، قم بتشغيل وحدة التحكم في الاصطدام واضبط سرعة التأثير على مترين في الثانية للدرجة الأولى أو ثلاثة أمتار في الثانية للدرجة الثانية ، بناء على شدة الإصابة. ثم قم بوزن على ميزان وزن.
بعد تخدير الماوس ، ضع رأس الماوس أسفل الاصطدام. تأكد من أن الجرو ممتد بالكامل في الطول. تأكد من أن طرف الاصطدام الذي يبلغ قطره ثلاثة ملليمترات مغطى بالمطاط لتقليل ملامسة المعدن للجمجمة.
الآن ، قم بتبديل المقبض إلى وضع التمديد لخفض التأثير. قم بخفض الاصطدام تقريبا ، بحيث يتم وضعه بين أذني الفأر. بعد ذلك ، حرك الماوس بحيث يتم تحريك طرف المكبس للأمام بما يعادل طول طرف مكبس واحد وطول طرف واحد على يسار.
اضبط الاصطدام على وضع السحب. ثم اضبط موضع المكبس لتحديد شدة الإصابة. اضبط وقت المكوث على 0.1 ثانية ، بغض النظر عن شدة الإصابة.
اضغط على التأثير على المقبض الأيمن لبدء التأثير. بسرعة ، أدر المقبض الأيسر إلى وضع إيقاف التشغيل لمنع ارتفاع درجة حرارة النظام. ثم ضع الماوس على جناحه الأيمن في قفص الاسترداد.
راقب وسجل وقت الكتابة عندما يخلف الماوس على الأرجل الأربع. لاحظ الوقت الذي يستأنف فيه السلوك الاستكشافي. بمجرد التعافي تماما ، أعد الفأر إلى قفص منزله.
اغسل أقسام الدماغ أربع مرات لمدة 10 دقائق لكل منها في PBS تحت التحريض. انقل أقسام الدماغ إلى محلول الانسداد واحتضانها لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. خذ الأجسام المضادة الأولية المخففة في محلول الانسداد وأضف أقسام الدماغ.
احتضان الأقسام بين عشية وضحاها عند أربع درجات مئوية. بعد الحضانة ، اغسل الأقسام أربع مرات لمدة 10 دقائق لكل منها في PBS تحت التحريض. انقل الأقسام إلى محلول مانع يحتوي على أجسام مضادة فلورية ثانوية مخففة من 1 إلى 1000 ، واحتضانها لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة.
بعد غسل الأقسام أربع مرات في PBS ، قم بتثبيتها على الشرائح باستخدام وسيط تثبيت. أضف قسيمة غطاء لكل شريحة قبل تخزينها عند أربع درجات مئوية حتى الحصول على الصورة. احصل على صور التألق المناعي باستخدام مجهر التألق اللامع وبرنامج Micro-Manager.
أظهرت إناث الفئران في مجموعة G2 وقتا أطول بكثير للوقوف من الذكور في نفس المجموعة ، وأظهر كلا الجنسين أوقاتا طويلة مقارنة بالضوابط الزائفة ، مع اختلافات أكبر بين مستويات الشدة G1 و G2. أظهرت إناث الفئران في مجموعة G2 وقتا أطول بكثير للاستكشاف مقارنة بالذكور وكان لكلا الجنسين أوقات أعلى مقارنة بالضوابط الزائفة ، مع زيادات كبيرة تعتمد على الشدة بين G1 و G2. لوحظ داء نجمي ، يتضح من زيادة تلطيخ البروتين الحمضي الليفي الدبقي ، في القشرة الحسية الجسدية المماثلة لمجموعة G2 مقارنة بالضوابط الزائفة في يوم واحد بعد الإصابة. أظهرت الكيمياء المناعية NeuN عدم وجود خسارة كبيرة للخلايا العصبية في يوم واحد بعد الإصابة.
