במהלך העשור האחרון פותחו מודלים של פגיעה מוחית טראומטית קלה במכרסמים עם פגיעת ראש סגורה. עם זאת, היישום של מודלים אלה בפיתוח מכרסמים הוא דליל בהשוואה לספרות TBI למבוגרים. כדי לטפל ברלוונטיות קלינית, מחקר זה פיתח פגיעת ראש סגורה עם הפרעות ארוכות טווח, או מודל CHILD TBI.
במשך זמן רב, פגיעה מוחית טראומטית התמקדה בהשלכות של פגיעות מוח חמורות. בשני העשורים האחרונים דווחו השפעות קלות של פגיעה מוחית טראומטית, אך מעט מחקרים העריכו את ההשלכות ארוכות הטווח. עם התפתחות חדשה בדימות מוחי, יש עניין גובר בתוצאות ארוכות הטווח שהיו חסרות עבור מודלים של ילדים.
CHILD נועד למלא את הפער הזה. באמצעות מודל CHILD, אפיינו שינויים מתקדמים ומתמשכים במוח כגון מוות עצבי, MRI דיפוזיה שונה, פעילות עצבית שונה ופלסטיות, גליוזה מוגברת, הפרעות התנהגותיות מתקדמות ותפקוד לבבי לקוי עם הגיל. מודל CHILD החדש שלנו מציג את היתרון של ביצוע ושחזור במעבדות שונות.
עם אימוץ רחב, אנו יכולים לצפות להרחבת הידע על ההשלכות ארוכות הטווח של זעזוע מוח בילדים. באמצעות מודל CHILD, אנו ממשיכים לחקור את ההשפעות וההשלכות של לחץ חוזר. כבר התחלנו לחקור כיצד ההשפעות המשולבות של זיהום מוקדם לאחר לידה וילד עשויות לתרום לתוצאות ארוכות טווח.
בנוסף, אנו צופים בהגנה על מיטת כלי הדם לאחר לחץ חוזר, דבר המצביע על כך שייתכן שקיימת התניה מוקדמת לאחר הדבקה מוקדמת, אך הדבר ממתין לחקירה נוספת. כדי להתחיל, לחמם את התא להשראת הרדמה ואת כלובי ההתאוששות מראש באמצעות כריות חימום כדי למנוע היפותרמיה. הגדר את המנגנון הסטריאוטקסי עם המשפיע מותקן בזווית של 90 מעלות.
ודא שכל חלקי המנגנון הסטריאוטקסי מהודקים ומאובטחים כראוי. ודא שהבוכנה מוברגת היטב לתוך המשפיע. לאחר מכן, לחתוך יריעת אלומיניום לעטוף את מסגרת סטריאוטקסי עם נייר כסף כדי ליצור כרית עבור החיה לנוח על.
אבטחו את המיקום והמתח של נייר הכסף באמצעות סרט מעבדה לתמיכה במשקל החיה. לאחר מכן, הפעל את בקר ההשפעה וכוונן את מהירות הפגיעה לשני מטרים לשנייה לדרגה אחת או שלושה מטר לשנייה לדרגה שתיים, בהתאם לחומרת הפציעה. לאחר מכן, לשקול את החיות על מאזן שקילה.
לאחר הרדמת העכבר, מקם את ראש העכבר מתחת למשפיע. ודאו שהגור מתוח במלואו לאורכו. ודא שקצה הפגיעה בקוטר שלושה מילימטר מכוסה בגומי כדי למזער מגע מתכת עם הגולגולת.
כעת, העבר את הידית למצב הרחבה כדי להקטין את המשפיע. הנמיכו בערך את המשפיע, כך שהוא ממוקם בין אוזני העכבר. לאחר מכן, החלק את העכבר כך שקצה הבוכנה יוזז קדימה באורך שווה ערך לאורך קצה בוכנה אחד ואורך קצה אחד משמאל לחיה.
הגדר את המשפיע למצב Retract. לאחר מכן, התאם את מיקום הבוכנה כדי לקבוע את חומרת הפציעה. הגדר את זמן השהייה ל- 0.1 שניות, ללא קשר לחומרת הפציעה.
לחץ על השפעה על הידית הימנית כדי להתחיל את הפגיעה. במהירות, סובב את הידית השמאלית למצב כבוי כדי למנוע התחממות יתר של המערכת. לאחר מכן, הניחו את העכבר על צידו הימני בכלוב התאוששות.
נטר ותעד את זמן הכתיבה כאשר העכבר נשען על ארבע רגליו. שים לב לזמן שבו הוא מחדש התנהגות גישוש. לאחר החלמתו המלאה, החזירו את העכבר לכלוב הביתי שלו.
שטפו את חלקי המוח ארבע פעמים במשך 10 דקות כל אחד ב-PBS תחת סערה. מעבירים את חלקי המוח לתמיסת החסימה ודגרים במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. קח את הנוגדנים הראשוניים המדוללים בתמיסת החסימה והוסף את חלקי המוח.
דוגרים על המקטעים למשך הלילה בארבע מעלות צלזיוס. לאחר הדגירה, שטפו את המקטעים ארבע פעמים במשך 10 דקות כל אחד ב-PBS תחת תסיסה. מעבירים את המקטעים לתמיסת חסימה המכילה נוגדנים פלואורסצנטיים משניים מדוללים 1 עד 1000, ודגרים במשך שעה בטמפרטורת החדר.
לאחר שטיפת החלקים ארבע פעמים ב- PBS, הרכיבו אותם על שקופיות באמצעות אמצעי הרכבה. הוסף פתק כיסוי לכל שקופית לפני אחסונם בארבע מעלות צלזיוס עד לקבלת תמונה. קבל תמונות immunofluorescence באמצעות מיקרוסקופ epifluorescence ותוכנת Micro-Manager.
נקבות עכברים בקבוצת G2 הפגינו זמן עמידה ארוך יותר באופן משמעותי מאשר זכרים באותה קבוצה, ושני המינים הראו זמן ממושך בהשוואה לבקרות דמה, עם הבדלים גדולים יותר בין רמות החומרה של G1 ו-G2. נקבות עכברים בקבוצת G2 הפגינו זמן רב יותר באופן משמעותי לחקור בהשוואה לזכרים, ולשני המינים היו זמנים גבוהים יותר בהשוואה לבקרות דמה, עם עליות תלויות חומרה משמעותיות בין G1 ל-G2. אסטרוגליוזיס, המתבטאת בצביעת חלבון גליה פיברילרי חומצי מוגברת, נצפתה בקליפת המוח הסומטוסנסורית-חושית האיפסילטרלית של קבוצת G2 בהשוואה לבקרות דמה ביום אחד לאחר הפציעה. האימונוהיסטוכימיה של NeuN לא הראתה אובדן עצבי משמעותי ביום אחד לאחר הפציעה.
