小鼠儿科脑震荡模型：闭合性颅脑损伤伴长期疾病 （CHILD）

在过去的十年中，在闭合性颅脑损伤的啮齿动物中开发了轻度创伤性脑损伤模型。然而，与成人 TBI 文献相比，这些模型在发育啮齿动物中的实施很少。为了解决临床相关性问题，本研究开发了一种具有长期疾病的闭合性颅脑损伤，或 CHILD TBI 模型。

长期以来，创伤性脑损伤一直集中在严重脑损伤的后果上。在过去的二十年里，已经报道了轻微的 TBI 影响，但很少有研究评估其长期后果。随着神经影像学的新发展，人们对儿科模型中缺失的长期结果越来越感兴趣。

CHILD 旨在填补这一空白。使用 CHILD 模型，我们表征了大脑内进行性和持续性的变化，例如神经元死亡、弥散 MRI 改变、神经元活动和可塑性改变、神经胶质增生增加、进行性行为扰动和随着年龄的增长而出现功能障碍。我们的新 CHILD 模型具有在不同实验室中执行和可重现的优势。

随着广泛采用，我们可以预期对小儿脑震荡长期后果的了解会得到扩展。使用 CHILD 模型，我们将继续研究重复压力的影响和后果。我们已经开始研究出生后早期感染和 CHILD 的综合影响如何促进长期结局。

此外，我们观察到反复压力后血管床的保护，表明早期感染后可能正在进行预处理，但这有待进一步调查。首先，提前使用加热垫加热麻醉诱导室和恢复笼，以防止体温过低。将立体定位装置与撞击器安装在 90 度角。

验证立体定位装置的所有部件是否已正确拧紧和固定。确认活塞已牢固地拧入撞击器中。接下来，切割一块铝板并用箔纸包裹立体定位框架，为动物创建一个可以休息的垫子。

使用实验室胶带固定铝箔的位置和张力，以支撑动物的体重。之后，打开冲击器控制器，根据受伤的严重程度，将冲击速度调整为一级每秒 2 米或二级调整每秒 3 米。然后，在称重天平上称量动物。

麻醉鼠标后，将鼠标头部放在撞击器下方。确保幼犬的长度完全伸展。确认直径为 3 毫米的撞击器尖端覆盖有橡胶，以尽量减少金属与颅骨的接触。

现在，将旋钮切换到 Extend 位置以降低撞击器。粗略降低撞击器，使其位于鼠标的耳朵之间。然后，滑动鼠标，使活塞尖端向前移动相当于一个活塞尖端长度和一个尖端长度到动物左侧。

将撞击器设置为 Retract 位置。然后，调整活塞位置以确定受伤的严重程度。将停留时间设置为 0.1 秒，无论受伤严重程度如何。

按下右侧旋钮上的 Impact 以启动冲击。快速将左旋钮转到 Off 位置以防止系统过热。然后，将鼠标放在恢复笼的右侧。

监控和记录鼠标四条腿都向后时的写入时间。请注意它恢复探索性行为的时间。完全恢复后，将鼠标放回其家笼中。

在搅拌下用 PBS 洗涤脑切片 4 次，每次 10 分钟。将脑切片转移到封闭溶液中，并在室温下孵育 10 分钟。在封闭溶液中取稀释的一抗，并添加脑切片。

将切片在 4 摄氏度下孵育过夜。孵育后，在搅拌下用 PBS 洗涤切片 4 次，每次 10 分钟。将切片转移到含有稀释 1 至 1000 的二抗的封闭溶液中，并在室温下孵育 1 小时。

在 PBS 中洗涤切片四次后，使用封固剂将它们安装到载玻片上。在将它们储存在 4 摄氏度直至图像采集之前，为每个载玻片添加盖玻片。使用落射荧光显微镜和 Micro-Manager 软件采集免疫荧光图像。

G2 组中的雌性小鼠表现出比同一组雄性更长的站立时间，与假对照组相比，两性都表现出更长的时间，G1 和 G2 严重程度之间的差异更大。与雄性相比，G2 组中的雌性小鼠表现出明显更长的探索时间，与假对照组相比，两性都有更高的时间，G1 和 G2 之间有显着的严重程度依赖性增加。与假对照组相比，在受伤后 1 天在 G2 组的同侧体感皮层中观察到星形胶质细胞增生，表现为神经胶质纤维酸性蛋白染色增加。NeuN 免疫组化显示损伤后 1 天无显著神经元丢失。