Son on yılda, kapalı kafa travması olan kemirgenlerde hafif travmatik beyin hasarı modelleri geliştirilmiştir. Bununla birlikte, bu modellerin gelişmekte olan kemirgenlerde uygulanması, erişkin TBH literatürüne kıyasla seyrektir. Klinik alaka düzeyini ele almak için, bu çalışmada uzun süreli bozuklukları olan kapalı bir kafa travması veya CHILD TBI modeli geliştirilmiştir.
Uzun bir süredir, travmatik beyin hasarı, ciddi beyin yaralanmalarının sonuçlarına odaklanmıştır. Son yirmi yılda, hafif TBH etkileri bildirilmiştir, ancak çok az çalışma uzun vadeli sonuçları değerlendirmiştir. Nörogörüntülemedeki yeni bir gelişmeyle birlikte, pediatrik modeller için eksik olan uzun vadeli sonuçlara olan ilgi artmıştır.
CHILD bu boşluğu doldurmak için tasarlandı. CHILD modelini kullanarak, nöronal ölümler, değişmiş difüzyon MRG, modifiye nöronal aktivite ve plastisite, artmış glioz, ilerleyici davranışsal bozukluklar ve yaşla birlikte kardiyak disfonksiyon gibi beyindeki ilerleyici ve kalıcı değişiklikleri karakterize ettik. Yeni CHILD modelimiz, farklı laboratuvarlarda gerçekleştirilebilme ve tekrarlanabilir olma avantajını sunmaktadır.
Geniş çapta benimsenmesiyle, pediatrik sarsıntının uzun vadeli sonuçları hakkındaki bilgilerde bir genişleme bekleyebiliriz. CHILD modelini kullanarak, tekrarlayan stresin etkilerini ve sonuçlarını araştırmaya devam ediyoruz. Doğum ve ÇOCUK sonrası erken enfeksiyonun birleşik etkilerinin uzun vadeli sonuçlara nasıl katkıda bulunabileceğini araştırmaya başladık.
Ek olarak, tekrarlanan stresten sonra vasküler yatağın korunduğunu gözlemliyoruz, bu da erken enfeksiyondan sonra ön koşullandırmanın meydana gelebileceğini düşündürüyor, ancak bu daha fazla araştırmayı bekliyor. Başlamak için, anestezi indüksiyonu için odayı ve hipotermiyi önlemek için ısıtma pedleri kullanarak kurtarma kafeslerini önceden ısıtın. Stereotaksik cihazı, çarpma tertibatı 90 derecelik bir açıyla monte edilmiş olarak ayarlayın.
Stereotaksik cihazın tüm parçalarının uygun şekilde sıkıldığını ve sabitlendiğini doğrulayın. Pistonun çarpma tertibatına sıkıca vidalandığını onaylayın. Daha sonra, bir alüminyum levha kesin ve hayvanın dinlenmesi için bir ped oluşturmak için stereotaksik çerçeveyi folyo ile sarın.
Hayvanın ağırlığını desteklemek için laboratuvar bandı kullanarak folyonun konumunu ve gerginliğini sabitleyin. Daha sonra, çarpma tertibatını açın ve yaralanmanın ciddiyetine bağlı olarak çarpma hızını birinci derece için saniyede iki metreye veya ikinci derece için saniyede üç metreye ayarlayın. Daha sonra hayvanları bir tartı terazisinde tartın.
Fareyi uyuşturduktan sonra, farenin başını çarpma tertibatının altına yerleştirin. Yavrunun uzunluğunun tamamen uzadığından emin olun. Kafatası ile metal temasını en aza indirmek için üç milimetre çapındaki çarpma ucunun kauçukla kaplandığını onaylayın.
Şimdi, çarpma tertibatını indirmek için düğmeyi Uzat konumuna getirin. Çarpma tertibatını, farenin kulakları arasına yerleştirilecek şekilde kabaca indirin. Ardından, fareyi, piston ucu hayvanın soluna doğru bir piston ucu uzunluğuna eşdeğer bir uzunluk kadar ileri hareket edecek şekilde kaydırın.
Çarpma tertibatını Geri Çekme konumuna getirin. Ardından, yaralanmanın ciddiyetini belirlemek için piston konumunu ayarlayın. Yaralanmanın ciddiyetinden bağımsız olarak bekleme süresini 0,1 saniye olarak ayarlayın.
Darbeyi başlatmak için sağ düğmedeki Darbe'ye basın. Sistemin aşırı ısınmasını önlemek için sol düğmeyi hızlı bir şekilde Kapalı konuma çevirin. Ardından, fareyi sağ kanadına bir kurtarma kafesine yerleştirin.
Fare dört ayağı üzerinde yükseldiğinde yazma süresini izleyin ve kaydedin. Keşif davranışını sürdürdüğü zamana dikkat edin. Tamamen iyileştikten sonra, fareyi ev kafesine geri koyun.
Beyin bölümlerini ajitasyon altında PBS'de her biri 10 dakika boyunca dört kez yıkayın. Beyin bölümlerini bloke edici solüsyona aktarın ve oda sıcaklığında 10 dakika inkübe edin. Bloke edici çözeltideki seyreltilmiş birincil antikorları alın ve beyin bölümlerini ekleyin.
Bölümleri gece boyunca dört santigrat derecede inkübe edin. İnkübasyondan sonra, bölümleri çalkalama altında PBS'de her biri 10 dakika boyunca dört kez yıkayın. Bölümleri, 1 ila 1000 oranında seyreltilmiş ikincil floresan antikorlar içeren bloke edici çözeltiye aktarın ve oda sıcaklığında bir saat inkübe edin.
Bölümleri PBS'de dört kez yıkadıktan sonra, bir montaj ortamı kullanarak kızaklara monte edin. Görüntü elde edilene kadar dört santigrat derecede saklamadan önce her slayta bir kapak fişi ekleyin. Bir epifloresan mikroskobu ve Micro-Manager yazılımı kullanarak immünofloresan görüntüleri elde edin.
G2 grubundaki dişi fareler, aynı gruptaki erkeklere göre önemli ölçüde daha uzun süre ayakta durdu ve her iki cinsiyet de sahte kontrollere kıyasla daha uzun süreler gösterdi ve G1 ve G2 şiddet seviyeleri arasında daha büyük farklılıklar vardı. G2 grubundaki dişi fareler, erkeklere kıyasla keşfetmek için önemli ölçüde daha uzun süre sergiledi ve her iki cinsiyet, G1 ve G2 arasında ciddiyete bağlı önemli artışlarla birlikte, sahte kontrollere kıyasla daha yüksek sürelere sahipti. Artmış glial fibriler asidik protein boyaması ile kanıtlanan astrogliozis, yaralanma sonrası bir gün sahte kontrollere kıyasla G2 grubunun ipsilateral somatosensoriyel korteksinde gözlendi. NeuN immünohistokimyası, yaralanma sonrası bir günde önemli nöronal kayıp göstermedi.
