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12.14 : 荧光和磷光:仪器

荧光计和荧光分光计是用于测量分子荧光的两种仪器。这些仪器在对激发和发射波长的方式进行选择以及光源类型的使用方面有所不同。荧光计使用了吸收干涉滤光片来对激发和发射波长进行选择。荧光计中的激发源通常是低压汞蒸气灯,它能够发出分布在紫外线和可见光区域的较强光线。虽然荧光计适合定量工作并且可以对荧光强进行度测量,但它们不能对激发光谱或发射光谱进行记录。

相比之下,荧光分光计则使用单色仪来对激发和发射波长进行选择。这些仪器采用了高压氙弧灯来作为激发源,从而产生连续发射光谱。荧光分光计可以对激发或发射光谱进行记录,从而使其能够进行更加详细的荧光分析。它们同样适用于定量测量。

对于分子磷光来说,需要使用一种叫做磷光计的专门仪器来对磷光和荧光进行区分。磷光的寿命比荧光的寿命更长,因此在磷光发射的激发和测量之间加入了延迟。这个过程可以通过使用两个异相旋转的斩波器来实现。当激发源聚焦在样品上时,斩波器会阻挡荧光的发射,当对磷光发射进行测量时,斩波器则会对激发源进行阻挡。为了防止激发态会因发生外转换(一种无辐射弛豫形式,其中的能量会被转移到溶剂或样品基质中,而不是以光的形式进行发射)而失活,用于磷光测量的样品通常会溶解在合适的有机溶剂,并且在液氮温度下进行冷冻。这样就形成了一种光学透明的固体基质,可以最大限度地减少外转换的发生。或者也可以将样品固定在固体基质上,从而能够在室温下对磷光进行测量。

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