12.14 : פלואורסנציה ופוספורסנציה: מכשור

פלואורומטרים וספקטרופלואורומטרים הם שני סוגים של מכשירים המשמשים למדידת פלואורסנציה מולקולרית. מכשירים אלו שונים באופן שבו הם בוחרים את אורכי הגל של העירור והפליטה ואת סוג מקורות האור שהם משתמשים בהם. פלואורומטרים משתמשים במסנני הפרעה סופגים כדי לבחור את אורכי הגל של העירור והפליטה. מקור העירור בפלואורומטר הוא בדרך כלל מנורת אדי כספית בלחץ נמוך הפולטת קווים אינטנסיביים המפוזרים ברחבי תחומי האולטרה-סגול והאור הנראה. בעוד שפלואורומטרים מתאימים לעבודה כמותית ויכולים למדוד עוצמת פלואורסנציה, הם אינם יכולים להקליט ספקטרות עירור או פליטה.

לעומת זאת, ספקטרופלואורומטרים משתמשים במונוכרומטור לבחירת אורכי הגל של העירור והפליטה. מכשירים אלו משתמשים במנורת קשת קסנון בלחץ גבוה כמקור עירור, אשר מייצרת ספקטרום פליטה רציף. ספקטרופלואורומטרים יכולים להקליט ספקטרות עירור או פליטה, ומאפשרים ניתוח מפורט יותר של הפלואורסנציה. הם גם מתאימים למדידות כמותיות.

במקרה של פוספורסנציה מולקולרית, נדרש מכשור מיוחד הנקרא פוספורימטריה כדי להבחין בין פוספורסנציה לפלואורסנציה. לפוספורסנציה זמן חיים ארוך יותר מאשר לפלואורסנציה, ולכן נוסף עיכוב בין העירור למדידת פליטת הפוספורסנציה. ניתן להשיג זאת באמצעות שני חוסמים שמסתובבים מחוץ לפאזה. החוסמים חוסמים את פליטת הפלואורסנציה כאשר מקור העירור ממוקד על הדגימה וחוסמים את מקור העירור כאשר מודדים את פליטת הפוספורסנציה. כדי למנוע דה-אקטיבציה של המצב המעורר על ידי המרה חיצונית, צורה של הרפיה ללא קרינה שבה האנרגיה מועברת לממס או למטריצת הדגימה במקום להיפלט כאור, דגימות למדידות פוספורסנציה מומסות בדרך כלל בממס אורגני מתאים ומוקפאות בטמפרטורת חנקן נוזלי. פעולה זו יוצרת מטריצה מוצקה שקופה מבחינה אופטית המפחיתה את ההמרה החיצונית למינימום. לחלופין, ניתן לייצב את הדגימה על מצע מוצק, מה שמאפשר מדידת פוספורסנציה בטמפרטורת החדר.