小鼠乳腺上皮细胞形成过程中Lactogenic分化的微球体

摘要

HC11 lactogenic分化的特点可以简称为微球体的半球形结构的形成。相衬显微镜的结构可以枚举援助量化lactogenic分化。

摘要

常用的表型措施，以确定在小鼠乳腺上皮细胞培养的lactogenic分化程度是圆顶形细胞结构的形成，被称为微球体

研究方案

1. 6天的RPMI 1640培养基中，10％小牛血清，5μg/ml胰岛素，10毫米的HEPES，在10ng/ml表皮生长因子（EGF），建立能力，HC11细胞生长汇合。
2. 细胞用PBS洗涤，并保持24小时，在没有表皮生长因子生长介质。
3. 为了诱导lactogenic分化的细胞培养分化的媒体，即地塞米松（10 ^{-6 M）}的RPMI，胰岛素（5微克/毫升）和催乳素（5微克/毫升），简称为DIP 。
4. 在规定的时间后DIP此外，微球体进行了拍照，并列举使用数码相机奥林巴斯IX71显微镜相衬显微镜。

代表性的成果：

正常乳腺上皮细胞单层和多个微球体的低功率放大，以及作为一个单一的微球体的高功率放大如图1所示，分别为。


图1。 （一） 微球体。正常乳腺上皮细胞单层应显示为一个平层的融合细胞。 （二），经过3-5天的DIP刺激出现多个微球体。拍照后5天的DIP此外。 （三）高倍率后的DIP另外5天微球体含有一个单一的领域。

讨论

为了使这项技术获得成功，最好的质量，必须保持上皮细胞在合流之前被lactogenic激素诱导。有可能有无数的微球体，这使得难以量化的情况下。因此，定量的目的，最好在一个时间点拍摄时的微球体，能算的微球体。

虽然有各种分子标记，用于确定乳腺上皮细胞的lactogenic分化程度，有几个用于2D文化细胞生长的形态标记。上皮细胞单层的能力，形成微型穹顶结构，牛奶蛋白?...

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
RPMI	Invitrogen	21870076
Fetal Bovine Serum	Atlanta Biologicals	S11550
L-Glutamine	GIBCO, by Life Technologies	25030
PenStrep	GIBCO, by Life Technologies	15140
Hepes	Quality Biological, Inc.	118089060
EGF	Sigma-Aldrich	E9644
Insulin	GIBCO, by Life Technologies	12585-014
Dexamethasone	Sigma-Aldrich	D1756
Microscope	Olympus Corporation	IX71
Digital Camera	QImaging	Retiga 2000RV Fast 1394