Мышь эпителиальных клеток молочной форме Mammospheres Во лактогенный Дифференциация

Резюме

HC11 лактогенный дифференциации можно охарактеризовать образование куполообразных сооружений, которые упоминаются как mammospheres. Структуры могут быть перечислены по фазе микроскопии отличие от помощи в количественном лактогенный дифференциации.

Аннотация

Фенотипические мера обычно используется для определения степени дифференциации в лактогенный молочной железы мыши эпителиальных клеточных культур является формирование куполообразной формы клеточных структур называют mammospheres

протокол

1. HC11 клетки были выращены до слияния в течение 6 дней в RPMI 1640 с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки, 5μg/ml Инсулин, 10 мМ HEPES, 10ng/ml эпидермального фактора роста (ЭФР) для установления компетенции.
2. Клетки промывали PBS и поддерживается в средствах массовой информации без роста EGF в течение 24 часов.
3. Для стимулирования лактогенный дифференциации клетки инкубировали в дифференциации средств массовой информации, то есть RPMI с дексаметазоном (10 ^-6 М), инсулин (5 мкг / мл) и пролактин (5 мкг / мл) называют DIP.
4. В установленное время после DIP того, mammospheres были сфотографированы и перечисленные фазового контраста микроскопии с использованием Olympus IX71 микроскоп с цифровой камерой.

Представитель Результаты:

Низкий увеличение мощности нормального эпителия молочной монослоя клеток и несколько mammospheres, а также большом увеличении мощности одной mammosphere показаны на рисунке 1, соответственно.


Рисунок 1. Mammospheres. () Нормальный молочной эпителиальных монослоев ячейки должно быть показано, как плоский слой вырожденных клеток. (Б) После 3-5 дней DIP стимуляцию нескольких mammospheres появляются. Фотография сделана 5 дней после того DIP. (С) Высшее увеличение одного поля, содержащего mammospheres на 5 дней после того DIP.

Обсуждение

Для того, чтобы эту технику, чтобы быть успешным и самого лучшего качества, эпителиальные клетки должна поддерживаться на уровне слияния до того, как индуцированные лактогенный гормонов. Там могут быть ситуации, когда Есть множество mammospheres, что делает количественного трудно. Таким обр?...

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
RPMI	Invitrogen	21870076
Fetal Bovine Serum	Atlanta Biologicals	S11550
L-Glutamine	GIBCO, by Life Technologies	25030
PenStrep	GIBCO, by Life Technologies	15140
Hepes	Quality Biological, Inc.	118089060
EGF	Sigma-Aldrich	E9644
Insulin	GIBCO, by Life Technologies	12585-014
Dexamethasone	Sigma-Aldrich	D1756
Microscope	Olympus Corporation	IX71
Digital Camera	QImaging	Retiga 2000RV Fast 1394