תאים אפיתל עכבר החלב טופס Mammospheres במהלך התמיינות Lactogenic

Summary

HC11 בידול lactogenic יכול להיות מאופיין על ידי היווצרות של מבנים כיפה המכונה mammospheres. מבנים ניתן המנויים על ידי מיקרוסקופ לעומת שלב כדי לסייע לכימות בידול lactogenic.

Abstract

מדד פנוטיפי נפוץ כדי לקבוע את מידת הבידול lactogenic בתוך החלב עכבר תרבויות אפיתל התא הוא היווצרות של מבנים דמויי כיפה תא המכונה mammospheres

Protocol

1. HC11 התאים גדלו על מפגש עבור 6 ימים בינוני 1640 RPMI בתוספת סרום 10% עגל עוברית, אינסולין 5μg/ml, HEPES 10 מ"מ, צמיחה 10ng/ml גורם אפידרמיס (EGF) להקים יכולת.
2. התאים נשטפו עם PBS ומתוחזק בתקשורת צמיחה ללא EGF למשך 24 שעות.
3. כדי להשרות התמיינות lactogenic התאים הודגרו בתקשורת בידול, כלומר RPMI עם dexamethasone (10 ^-6 M), אינסולין (5 מיקרוגרם / מ"ל) ופרולקטין (5 מיקרוגרם / מ"ל) המכונה מח"ש.
4. בנוסף לכל פוסט מח"ש פעמים כאמור, mammospheres צולמו המנויים על ידי מיקרוסקופית השלב בניגוד באמצעות מיקרוסקופ IX71 אולימפוס עם מצלמה דיגיטלית.

נציג תוצאות:

הגדלה חשמל נמוכה של החלב monolayers נורמלי לתא אפיתל mammospheres מרובים, כמו גם הגדלה של מתח גבוה mammosphere יחיד מוצגים באיור 1, בהתאמה.


באיור 1. Mammospheres. (א) רגיל monolayers החלב תא אפיתל צריך להיות מוצג כשכבת שטוחה של תאים ומחוברות. (ב) לאחר 3-5 ימים של גירוי מח"ש mammospheres מרובים תופיע. צולם 5 ימים הודעה מח"ש בנוסף. (ג) הגדלה גבוהה של שדה יחיד המכיל mammospheres ב 5 ימים שלאחר בנוסף מח"ש.

Discussion

על מנת הטכניקה הזו להיות מוצלחת באיכות הטובה ביותר, את לתאי האפיתל יש לשמור על מפגש קודם להיות מושרה עם הורמונים lactogenic. ייתכנו מצבים שבהם יש mammospheres רבים, מה שהופך את כימות קשה. לפיכך, למטרות כמותי עדיף לצלם את mammospheres בנקודת הזמן כאשר מספר mammospheres מסוגל לסמוך.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
RPMI	Invitrogen	21870076
Fetal Bovine Serum	Atlanta Biologicals	S11550
L-Glutamine	GIBCO, by Life Technologies	25030
PenStrep	GIBCO, by Life Technologies	15140
Hepes	Quality Biological, Inc.	118089060
EGF	Sigma-Aldrich	E9644
Insulin	GIBCO, by Life Technologies	12585-014
Dexamethasone	Sigma-Aldrich	D1756
Microscope	Olympus Corporation	IX71
Digital Camera	QImaging	Retiga 2000RV Fast 1394