Maus Brustepithelzellen Form Mammospheres Während lactogenic Differenzierung

Zusammenfassung

HC11 lactogenic Differenzierung kann durch die Bildung von Kuppelbauten genannt mammospheres charakterisiert werden. Die Strukturen können durch Phasenkontrast-Mikroskopie aufgezählt werden, um bei der Quantifizierung lactogenic Differenzierung zu unterstützen.

Zusammenfassung

Eine phänotypische Maßnahme häufig verwendet, um den Grad der Differenzierung in lactogenic Maus Brustepithelzellen Zellkulturen zu bestimmen, ist die Bildung von kuppelförmigen Zellstrukturen genannt mammospheres

Protokoll

1. Die HC11 Zellen wurden bis zur Konfluenz für 6 Tage in RPMI 1640 Medium mit 10% fötalem Kälberserum, 5μg/ml Insulin, 10 mM HEPES, 10ng/ml epidermal growth factor (EGF), um Kompetenz zu etablieren ergänzt gewachsen.
2. Die Zellen wurden mit PBS gewaschen und gepflegt in Nährmedien ohne EGF für 24 Stunden.
3. Zur Induktion lactogenic Differenzierung wurden die Zellen bei der Differenzierung Medien, dh RPMI mit Dexamethason (10 ^-6 M), Insulin (5 ug / ml) und Prolaktin (5 ug / ml) genannt DIP inkubiert.
4. Bei den angegebenen Zeiten post-DIP Zusätzlich wurden mammospheres fotografiert und aufgelistet durch Phasenkontrast-Mikroskopie mit einer Olympus IX71-Mikroskop mit Digitalkamera.

Repräsentative Ergebnisse:

Geringe Leistungsaufnahme Vergrößerung der normalen Brustepithelzellen Zellmonoschichten und mehrere mammospheres sowie hohe Leistung Vergrößerung eines einzelnen mammosphere sind in Abbildung 1 gezeigt.


Abbildung 1. Mammospheres. (A) Normal Brustepithelzellen Zellmonoschichten sollte als eine flache Schicht von konfluenten Zellen angezeigt werden. (B) Nach 3-5 Tagen der DIP Stimulation mehrerer mammospheres erscheinen. Foto genommen 5 Tage nach der DIP hinaus. (C) Höhere Vergrößerung eines einzelnen Feld mit mammospheres bei 5 Tage nach der DIP hinaus.

Diskussion

Um für diese Technik erfolgreich zu sein und von bester Qualität, die Epithelzellen sind bei Konfluenz gehalten werden, bevor die mit lactogenic Hormone induziert. Es kann Situationen geben, wo es zahlreiche mammospheres, die die Quantifizierung erschwert werden. So quantitative Zwecke ist es am besten, die mammospheres zu einem Zeitpunkt fotografieren, wenn die Zahl der mammospheres kann gezählt werden.

Zwar gibt es verschiedene molekulare Marker verwendet werden, um den Grad der Differe...

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
RPMI	Invitrogen	21870076
Fetal Bovine Serum	Atlanta Biologicals	S11550
L-Glutamine	GIBCO, by Life Technologies	25030
PenStrep	GIBCO, by Life Technologies	15140
Hepes	Quality Biological, Inc.	118089060
EGF	Sigma-Aldrich	E9644
Insulin	GIBCO, by Life Technologies	12585-014
Dexamethasone	Sigma-Aldrich	D1756
Microscope	Olympus Corporation	IX71
Digital Camera	QImaging	Retiga 2000RV Fast 1394