Fare Meme Epitel Hücreleri lactogenic Farklılaşma sırasında Mammospheres formu

Özet

HC11 lactogenic farklılaşma mammospheres olarak anılacaktır kubbeli yapıların oluşumu ile karakterize edilebilir. Yapılar, faz kontrast mikroskobu ile numaralandırılan lactogenic farklılaşma niceleme yardımcı olabilir.

Özet

Fare meme epitel hücre kültürlerinde lactogenic farklılaşma derecesini belirlemek için yaygın olarak kullanılan fenotipik önlem mammospheres olarak anılacaktır kubbe şeklinde hücre yapılarının oluşması.

Protokol

1. HC11 hücreleri RPMI 1640 orta ve% 10 fetal sığır serumu, 5μg/ml İnsülin, 10 mM HEPES, yetkinlik kurmak için 10 ng epidermal büyüme faktörü (EGF) ile desteklenmiş 6 gün izdiham büyüdü.
2. Hücreler PBS ile yıkanır ve 24 saat için EGF olmadan büyüme ortamı muhafaza edildi.
3. Lactogenic farklılaşma ikna etmek için hücre farklılaşması medya, yani RPMI deksametazon (10 ^-6 M), insülin (5 mg / ml) ve prolaktin (5 mg / ml) olarak DIP atıfta inkübe edildi.
4. Belirtilen kez post-DIP Ayrıca, mammospheres fotoğrafları çekildi ve bir dijital fotoğraf makinesi ile Olympus IX71 mikroskop kullanılarak faz kontrast mikroskobu ile numaralandırılan.

Temsilcisi Sonuçlar:

Düşük güç büyütme, normal meme epitel hücre mono tabakaları ve birden fazla mammospheres yanı sıra, tek bir mammosphere yüksek güç büyütme, sırasıyla, Şekil 1'de gösterilmiştir.


Şekil 1. Mammospheres (a) Normal meme epitel hücre mono tabakaları konfluent hücrelerinin düz bir tabaka olarak görüntülenmesi gerekir. (B) DIP stimülasyon 3-5 gün sonra birden fazla mammospheres görünür. Fotoğraf 5 gün DIP Ayrıca yazılan. (C) DIP Ayrıca yazılan 5 gün mammospheres içeren tek bir alanda Yükseköğretim büyütme.

Tartışmalar

Amacıyla bu tekniğin başarılı olmak ve en iyi kalite, epitel hücreleri lactogenic hormonları ile indüklenen önce izdiham muhafaza edilmelidir. Ölçülmesi zor kılan pek çok mammospheres vardır durumlar olabilir. Böylece, kantitatif amaçlar için mammospheres sayısı sayılacak bir zaman noktasında mammospheres fotoğraflamak için en iyisidir.

Meme epitel hücrelerinin lactogenic farklılaşma derecesini belirlemek için kullanılan çeşitli moleküler belirteçlerin bulunm...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
RPMI	Invitrogen	21870076
Fetal Bovine Serum	Atlanta Biologicals	S11550
L-Glutamine	GIBCO, by Life Technologies	25030
PenStrep	GIBCO, by Life Technologies	15140
Hepes	Quality Biological, Inc.	118089060
EGF	Sigma-Aldrich	E9644
Insulin	GIBCO, by Life Technologies	12585-014
Dexamethasone	Sigma-Aldrich	D1756
Microscope	Olympus Corporation	IX71
Digital Camera	QImaging	Retiga 2000RV Fast 1394