JoVE Logo
发表
联系我们

登录

需要订阅 JoVE 才能查看此. 登录或开始免费试用。

本文内容

  • 摘要
  • 摘要
  • 引言
  • 研究方案
  • 结果
  • 讨论
  • 披露声明
  • 致谢
  • 材料
  • 参考文献
  • 转载和许可

摘要

在这里, 我们提出了一个从大鼠锁骨下静脉采集血液样本的方案。

摘要

在动物实验中, 有足够的血量的采血是必不可少的。与其他更具攻击性的方法 (如后眼眶神经丛样本采集) 相比, 从大鼠尾脉采集血液很受欢迎, 压力也较小。然而, 这种采血方法有时受到不令人满意的成功率的限制。在这里, 我们介绍了一种方法, 血液收集通过锁骨下静脉穿刺。锁骨下静脉位于锁骨下, 这个静脉足够大, 以满足血液采集的体积要求。结果表明, 该方法是安全的, 适用于所需血量的采血取样。在大鼠尾静脉采血失败的情况下, 通过锁骨下静脉穿刺采血可作为一种替代采血方法。

引言

采血在动物研究中是必不可少的。采血的目标静脉包括眼眶后丛、颈静脉、隐静脉、尾血管和颈动脉1、2、3、4。有时, 血液可以从腹主动脉, 静脉, 甚至心脏5,6,7。在这种情况下, 必须牺牲动物, 不能用于后续观察;因此, 这些方法在日常实验工作中的使用较少。与上述方法相比, 从大鼠尾静脉采集血液很受欢迎, 压力较小 8。

然而, 从尾部静脉采集血液有时受到不令人满意的成功率的限制。有时, 用这种方法也很难获得足够的血量。由于锁骨下静脉足够大, 位于锁骨骨的正下方, 如果常规采血方法不成功, 锁骨下静脉穿刺可以成为采血的另一种方法。本文介绍了一种大鼠锁骨下静脉穿刺采血的方法。

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

研究方案

本研究获得湘雅第二医院 (中国长沙) 中南大学动物研究伦理委员会批准。该手稿是根据 arrive (动物研究: 活体实验报告) 指南9编写的。

1. 材料和动物准备

  1. 准备所需材料: 胶带、脱毛剂、75% 乙醇、采血管、2.5 毫升注射器与针头连接 (24 g、0.6 mm x25 毫米)、剃须刀、电子秤和仪表 (见材料表)。
  2. 使用 20只 sprague-dawley (sd) 大鼠, 年龄为 8-10, 体重153-200 克 (见材料表)。根据《实验动物护理和使用指南》对老鼠进行饲养10。
  3. 在标准条件下将老鼠放在一起, 免费获得食物和饮用水。将它们放在530厘米的2个笼子里, 配有刮木床上用品 (每个笼子2只老鼠)。将动物保持在温度控制的室温下, 温度在25°c 左右。
  4. 在锁骨下静脉穿刺前, 通过腹腔内注射, 在所有动物中引入全身麻醉 (戊巴比妥钠 40 mg kg)。
  5. 将老鼠置于仰角位置。将后肢固定在舒适的位置, 并将与躯干旁边的身体轴平行的上肢固定。
    注: 此过程不需要机械通风 (图 1)。
  6. 清洁锁骨下空间的两侧, 以去除毛皮 (与剃须器和脱毛剂, 见材料表) 和任何可见的污垢。用75% 乙醇擦拭颈部和胸部皮肤。用纱布保持穿刺区域清洁干燥。

2. 采血程序

注: 锁骨下静脉的两侧都适合穿刺, 在这里我们选择右侧进行穿刺。右锁骨的位置和方向由操作人员的左拇指标识 (图 2)。当上命运的 fossae 在针头的方向上时, 用食指轻轻触摸上的 fossae (图 2)。

  1. 用肝素溶液 (10 uu/ml) 冲洗无菌 2.5 ml 注射器。
  2. 将穿刺部位 0.5 mm 尾端定位到右侧锁骨的外部区域 (图 3)。将注射器轻轻移动到穿刺部位的皮肤上。针头进入锁骨下皮肤后, 用操作人员的右手施加负压 (图 4)。
    注: 平均血量和最大血量分别为 1.0 ml 和 1.4 ml。针的方向是定位向上的 fossae, 应该是几乎平行的锁骨只是后面的锁骨。通常情况下, 锁骨下静脉可以通过插入约2毫米的针在这个方向达到。一旦针头进入静脉, 血液将在负压下进入注射器。
    1. 保持负压, 直到抽到足够的血量 (图 5)。
  3. 如果锁骨下静脉采血不成功, 将针头撤回到皮下区域, 并将针头的方向稍微调整到胸骨内部。
    1. 如果三次尝试失败, 避免从同一一侧的锁骨下静脉, 并使用对侧进行血液采样。
  4. 采血后, 取出穿刺针, 对穿刺部位施加压力 1-2分钟, 止血。
    注: 压力必须非常温和, 以防止窒息。

3. 血液样品处理

  1. 将血液样本转移到抗凝血包衣真空管 (带 edta) 和离心机 10分钟, 在 1600 x 克收集血浆。
  2. 将上清液吸到干净的管中, 存放在-80°c (图 6)。

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

结果

这里共使用了 20只 sd 大鼠 (雄性 n示 10, 雌性？ 10)。血液收集是由熟练的操作人员进行的, 他们在大鼠的锁骨下静脉进行了20多个血液取样, 初学者操作人员则没有在大鼠或其他动物身上进行锁骨下静脉穿刺的经验。在操作之前, 初学者至少观察了由熟练操作人员完成的3个过程。

血液取样成功于17只大鼠通过右锁骨下静脉通道。?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

讨论

本文介绍了一种从锁骨下静脉抽血的替代方法, 表明该方法是可行的、安全的, 适用于大鼠的采血。该方法来源于11例起搏器铅植入术中锁骨下静脉穿刺.锁骨下静脉位于锁骨的后部和尾端, 是腋窝静脉的延续。它从第一肋骨的外缘延伸到前鳞片肌肉12的内侧边界。从这里, 它加入颈内静脉形成腕头静脉, 并流入超级腔静脉, 就在上星下 (图 8)。...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

披露声明

这项工作得到了国家自然科学基金81670269、81500355号和81670269赠款的支持。

致谢

未声明。

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

材料

NameCompanyCatalog NumberComments
ratsHunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd (Changsha, Hunan Province, China) 
stastical softwareSPSS Statistics 17
epilating agentFrance Yi Sha Cosmetics Co.,Ltd(Guangzhou, Guangdong Province ,China)
2.5 mL syringeShandong Weigao Group Medical Polymer Co.,Ltd(Weihai,Shandong Province ,China)
hair shaverShanghai FLYCO Electric Co., Ltd(Shanghai,China)
adhesive tape3M Deutschland GmbH(EdisonstraBe 6,59157 Kamen, Germany)
Pentobarbital sodiumMerck
75% ethanolDepartment of Pharmacy,The Second Xiangya Hospital of Central South Univesity
blood collection tubeHubei Jinxing Technology&Development Co.,Ltd (Wuhan Hubei Province,China) (2ml)
electronic scaleDongguan Shengheng Electronics Co.,Ltd (Dongguan,Guangdng Province,China)
canvas glovesfor anethesia
hepainNanjing Xinbai Pharmaceutical  Co.,Limited (Nanjing, Jiangsu Province, China) (2mL, 12500 IU)
physical salineHunan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd(Yueyang ,Hunan Province,China) (100ml)

参考文献

  1. Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. Journal of Pharmacology, Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).
  2. Korfmacher, W., et al. Utility of capillary microsampling for rat pharmacokinetic studies: Comparison of tail-vein bleed to jugular vein cannula sampling. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 76, 7-14 (2015).
  3. Feng, J., et al. Catheterization of the carotid artery and jugular vein to perform hemodynamic measures, infusions and blood sampling in a conscious rat model. Journal of Visualized Experiments. (95), (2015).
  4. Wickremsinhe, E. R., Renninger, M., Paulman, A., Pritt, M., Schultze, A. E. Impact of Repeated Tail Clip and Saphenous Vein Phlebotomy on Rats Used in Toxicology Studies. Toxicologic Pathology. 44 (7), 1013-1020 (2016).
  5. Takahashi, M., Makino, S., Kikkawa, T., Osumi, N. Preparation of rat serum suitable for mammalian whole embryo culture. Journal of Visualized Experiments. (90), e51969(2014).
  6. Cochran, B. J., et al. Determining Glucose Metabolism Kinetics Using 18F-FDG Micro-PET/CT. Journal of Visualized Experiments. (123), (2017).
  7. Beeton, C., Garcia, A., Chandy, K. G. Drawing blood from rats through the saphenous vein and by cardiac puncture. Journal of Visualized Experiments. (7), 266(2007).
  8. Zou, W., et al. Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System. Journal of Visualized Experiments. (130), (2017).
  9. Kilkenny, C., Altman, D. G. Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution. Lab Animal. 44 (4), 377-378 (2010).
  10. National Institute of Health. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. , 8th, National Academies Press (US). US (Washington DC). (2011).
  11. Antonelli, D., Feldman, A., Freedberg, N. A., Turgeman, Y. Axillary vein puncture without contrast venography for pacemaker and defibrillator leads implantation. Pacing and Clinical Electrophysiology. 36 (9), 1107-1110 (2013).
  12. Luis, A. L., et al. Microscopic magnetic resonance imaging of the thoracic venous system in rats with congenital diaphragmatic hernia. Pediatric Surgery International. 27 (2), 175-180 (2011).
  13. Tsukamoto, A., Serizawa, K., Sato, R., Yamazaki, J., Inomata, T. Vital signs monitoring during injectable and inhalant anesthesia in mice. Experimental Animals. 64 (1), 57-64 (2015).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

转载和许可

请求许可使用此 JoVE 文章的文本或图形

请求许可

探索更多文章

141

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

政策

使用条款

隐私

联系我们

向图书馆推荐

JoVE 新闻简报

科研

教育

发表

图书馆员

关于 JoVE

版权所属 © 2025 MyJoVE 公司版权所有，本公司不涉及任何医疗业务和医疗服务。