JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Burada, sıçan subklaviyan ven kan örnekleri toplamak için bir protokol mevcut.

Özet

Kan toplama yeterli kan hacmi ile hayvan deneylerinde esastır. Sıçan kuyruğu damardan kan toplama koleksiyonu retro-orbital pleksus örnek gibi diğer daha Agresif yöntemlerine göre popüler ve daha az stresli. Ancak, bu kan toplama yöntemi bazen yetersiz başarı oranı ile sınırlıdır. Burada, kan derlemesinin subklaviyan ven ponksiyon yoluyla bir yöntemi tanıtmak. Subklaviyan ven sadece köprücük kemiği altında bulunur ve bu damar kan toplama hacim gereksinimleri yerine getirmek için yeterli büyüklükte. Sonuçlarımız bu yöntem kan toplama örnekleme gerekli kan hacmi için güvenli ve uygun olduğunu göstermektedir. Kan toplama subklaviyan ven ponksiyon yoluyla bir alternatif kan toplama yöntemi başarısız kuyruk damar kan örnekleme sıçanlarda durumunda olarak hizmet verebilir.

Giriş

Kan toplama hayvan araştırma esastır. Hedef damarlar kan koleksiyonu için retro-orbital pleksus, juguler ven, safen ven, kuyruk kan damarları ve karotid arter1,2,3,4içerir. Bazen, kan abdominal aort, vena cava veya bile kalp5,6,7elde edilebilir. Böyle durumlarda, hayvanlar kurban edilmeli ve sonraki gözlem için kullanılamaz; Böylece, bu yöntemler kullanılır günlük deneysel çalışmalarında daha az. Sıçan kuyruğu damardan kan toplama popüler ve daha az stresli göre yukarıda belirtilen yöntemleri8.

Ancak, kuyruk damardan kan toplama bazen yetersiz başarı oranı ile sınırlıdır. Bazen, bu yöntemle yeterli kan hacmi elde etmek zordur. Subklaviyan ven yeterli büyüklükte ve sadece köprücük kemiği altında yer alan, subklaviyan ven ponksiyon rutin kan toplama yöntemleri başarısız varsa kan örnekleme için alternatif bir yöntem olabilir. Burada, sıçanlarda subklaviyan ven ponksiyon yoluyla kan koleksiyonunun bir yöntemini tanıtmak.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protokol

Bu çalışmada ikinci Xiangya Hospital (Changsha, Çin) hayvan araştırma merkezi Güney Üniversitesi Etik Komitesi tarafından kabul edildi. El yazması varış göre hazırlanmıştır (hayvan araştırma: deneyler In Vivo Reporting in) yönergeleri9.

1. malzeme ve hayvan hazırlık

  1. Gerekli malzemeler hazırlamak: yapışkan bant, epilasyon Ajan, % 75 etanol, kan toplama Tüp, 2.5 mL şırınga iğne (24 G, 0.6 mm x 25 mm), saç tıraş makinesi, elektronik ölçek ve ölçer ile (bkz. Tablo reçetesi) bağlı.
  2. 20 Sprague-Dawley (SD) fareler, yaşlı 8-10 hafta ve tartı 153-200 g ( Tablo malzemelerigörmek) kullanın. Fareler uygun olarak Kılavuzu için bakım ve kullanım Laboratuvar hayvanlarının10sürdürmek.
  3. House fareler yiyecek ve içme suyu ücretsiz erişim standart koşullar altında. Ahşap-tıraş yatak (kafes başına 2 fareler) ile 530 cm2 kafeslerde kalsınlar. Bir ısı kontrollü oda sıcaklığında yaklaşık 25 ° C'de hayvanlarda korumak
  4. Genel anestezi teşvik (sodyum Fentobarbital 40 mg/kg) mayi enjeksiyonuyla subklaviyan ven ponksiyon önce tüm hayvanlarda.
  5. Fareyi sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Hind ekstremitelerin rahat bir konumda düzeltmek ve üst ekstremite hemen yanında gövde vücut eksenine paralel düzeltin.
    Not: Bu yordam (Şekil 1) hiçbir mekanik havalandırma gereklidir.
  6. Her iki kürk kaldırmak için infraclavicular alanı temiz (bkz. Tablo reçetesisaç tıraş makinesi ve epilasyon Ajan ile) ve görünür herhangi bir kir. Boyun ve göğüs deri % 75 etanol ile silin. Ponksiyon için alan temiz ve gazlı bez ile kuru tutun.

2. kan toplama yordamı

Not: Her iki tarafın subklaviyan ven ponksiyon için uygundur ve burada sağ tarafındaki ponksiyon için seçin. Sağ köprücük yönünü ve konumunu işleç'ın sol başparmak (Şekil 2) tarafından tanımlanır. Gönül gözlenen olduğu gibi iğne (Şekil 2) yönünde gönül gözlenen yavaşça işaret parmağı ile dokunulmaz.

  1. Steril 2.5 mL şırınga heparin çözüm (10 IU/mL) ile yıkayın.
  2. 0,5 mm sağ köprücük (Şekil 3) dış 1/3 bölgeye kaudal ponksiyon sitesini bulun. Şırıngayı yavaşça ponksiyon sitesi cilt içine taşıyın. İğne infraclavicular cilt girer sonra operatörünün sağ eli (Şekil 4) ile negatif basınç uygulanır.
    Not: Ortalama ve maksimum kan hacmi are 1.0 mL ve 1.4 mL, anılan sıraya göre. İğne yönünü gönül gözlenen doğru konumlandırılmış ve köprücük kemiği için sadece arka neredeyse paralel olmalıdır. Genellikle, subklaviyan ven bu yönde yaklaşık 2 mm iğne ekleyerek ulaşmak mümkündür. İğneyi damardan girer sonra kan şırınga negatif basınç altında girer.
    1. Yeterli kan kan hacmi çizilmiş kadar negatif basınç korumak (Şekil 5).
  3. Subklaviyan ven kan toplama başarılı değilse, iğne deri altı bölgeye çekmek ve iğne biraz göğüs kemiğinin iç yönünü ayarlayın.
    1. Üç girişimleri başarısız olursa, aynı taraftan subklaviyan ven kaçının ve kontralateral yan kan örnekleme için kullanın.
  4. Kan toplama sonra ponksiyon iğnesi kaldırmak ve kanamayı durdurmak 1-2 dakika için bir delik sitesine basınç uygulayın.
    Not: Basınç boğulma önlemek için çok nazik olmalıdır.

3. kan işleme örnek

  1. Kan örneği bir antikoagülan kaplı vakum tüpü (EDTA) ve plazma toplamak için 1600 x g, 10 dk santrifüj içine aktarın.
  2. Süpernatant temiz tüp ve-80 ° C (Şekil 6) mağazasında Aspire edin.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Sonuçlar

Toplam 20 SD sıçan (erkek n = 10, kadın n = 10) burada kullanılmıştır. Sıçanlarda subklaviyan ven üzerinden 20'den fazla kan dağıtımları gerçekleştiren vasıflı operatörler tarafından ve kim yok subklaviyan ven delik açıldı acemi operatörler tarafından yapılacak kan collectionwas fareler veya diğer hayvanların deneyim. Operasyon öncesi, en az 3 yordamlar vasıflı operatörler tarafından yapılan yeni başlayanlar izledim.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Burada, subklaviyan ven kan çıkarılması için alternatif bir yöntem tanıtmak ve bu yöntem için kan örnekleme sıçanlarda mümkün, güvenli ve uygulanabilir olduğunu göstereceğiz. Bu yöntem kalp pili kurşun implantasyon hastalar11subklaviyan ven ponksiyon türetilir. Subklaviyan ven sadece arka ve köprücük kemiği kaudal bulunur ve aksiler ven bir devamıdır. Anterior scalene kas12medial kenarlığına ilk kaburga dış kenarlığı çalışır. Buradan, ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Açıklamalar

Bu eser Çin No 81670269, Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı, No 81500355 ve No 81500226 hibe tarafından desteklenmiştir.

Teşekkürler

Hiçbiri ilan etti.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
ratsHunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd (Changsha, Hunan Province, China) 
stastical softwareSPSS Statistics 17
epilating agentFrance Yi Sha Cosmetics Co.,Ltd(Guangzhou, Guangdong Province ,China)
2.5 mL syringeShandong Weigao Group Medical Polymer Co.,Ltd(Weihai,Shandong Province ,China)
hair shaverShanghai FLYCO Electric Co., Ltd(Shanghai,China)
adhesive tape3M Deutschland GmbH(EdisonstraBe 6,59157 Kamen, Germany)
Pentobarbital sodiumMerck
75% ethanolDepartment of Pharmacy,The Second Xiangya Hospital of Central South Univesity
blood collection tubeHubei Jinxing Technology&Development Co.,Ltd (Wuhan Hubei Province,China) (2ml)
electronic scaleDongguan Shengheng Electronics Co.,Ltd (Dongguan,Guangdng Province,China)
canvas glovesfor anethesia
hepainNanjing Xinbai Pharmaceutical  Co.,Limited (Nanjing, Jiangsu Province, China) (2mL, 12500 IU)
physical salineHunan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd(Yueyang ,Hunan Province,China) (100ml)

Referanslar

  1. Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. Journal of Pharmacology, Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).
  2. Korfmacher, W., et al. Utility of capillary microsampling for rat pharmacokinetic studies: Comparison of tail-vein bleed to jugular vein cannula sampling. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 76, 7-14 (2015).
  3. Feng, J., et al. Catheterization of the carotid artery and jugular vein to perform hemodynamic measures, infusions and blood sampling in a conscious rat model. Journal of Visualized Experiments. (95), (2015).
  4. Wickremsinhe, E. R., Renninger, M., Paulman, A., Pritt, M., Schultze, A. E. Impact of Repeated Tail Clip and Saphenous Vein Phlebotomy on Rats Used in Toxicology Studies. Toxicologic Pathology. 44 (7), 1013-1020 (2016).
  5. Takahashi, M., Makino, S., Kikkawa, T., Osumi, N. Preparation of rat serum suitable for mammalian whole embryo culture. Journal of Visualized Experiments. (90), e51969(2014).
  6. Cochran, B. J., et al. Determining Glucose Metabolism Kinetics Using 18F-FDG Micro-PET/CT. Journal of Visualized Experiments. (123), (2017).
  7. Beeton, C., Garcia, A., Chandy, K. G. Drawing blood from rats through the saphenous vein and by cardiac puncture. Journal of Visualized Experiments. (7), 266(2007).
  8. Zou, W., et al. Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System. Journal of Visualized Experiments. (130), (2017).
  9. Kilkenny, C., Altman, D. G. Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution. Lab Animal. 44 (4), 377-378 (2010).
  10. National Institute of Health. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. , 8th, National Academies Press (US). US (Washington DC). (2011).
  11. Antonelli, D., Feldman, A., Freedberg, N. A., Turgeman, Y. Axillary vein puncture without contrast venography for pacemaker and defibrillator leads implantation. Pacing and Clinical Electrophysiology. 36 (9), 1107-1110 (2013).
  12. Luis, A. L., et al. Microscopic magnetic resonance imaging of the thoracic venous system in rats with congenital diaphragmatic hernia. Pediatric Surgery International. 27 (2), 175-180 (2011).
  13. Tsukamoto, A., Serizawa, K., Sato, R., Yamazaki, J., Inomata, T. Vital signs monitoring during injectable and inhalant anesthesia in mice. Experimental Animals. 64 (1), 57-64 (2015).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

T psay 141kan toplamafaresubklaviyan ven ponksiyonrnekkuyruk venk pr c k kemi i

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır