Пункция подключичной вены как альтернативный метод сбора образцов крови крыс

Резюме

Здесь мы представляем протокол для сбора образцов крови от крыс подключичную Вену.

Аннотация

Сбор крови с достаточным объемом крови имеет важное значение в подопытных животных. Забора крови из Вены хвост крысы является популярным и меньше стрессовых ситуаций по сравнению с другими более агрессивные методы, такие, как ретро орбиталь сплетения образец коллекции. Однако этот метод сбора крови иногда ограничивается неудовлетворительной успеха. Здесь мы представляем метод для сбора крови через пункция подключичной вены. Подключичную Вену расположен прямо под ключицы и этом ключе является достаточно большим, чтобы выполнить требования объем сбора крови. Наши результаты показывают, что этот метод является безопасным и применимо для сбора проб крови с объем требуемых крови. Сбор крови через пункция подключичной вены может служить метод коллекции альтернативных крови в случае неудачных хвост вен проб крови крыс.

Введение

Сбор крови имеет важное значение в исследований на животных. Целевой вен для сбора крови включают сплетения ретро орбиталь, яремную Вену, подкожной вены, хвост кровеносных сосудов и сонной артерии^1,2,3,4. Иногда крови могут быть получены от брюшной аорты, полой вены или даже сердца^5,6,7. В таких случаях животные должны быть принесены в жертву и не может использоваться для последующего наблюдения; Таким образом, эти методы используются в повседневной работе экспериментальных. Сбор крови из Вены хвост крысы является популярным и меньше стрессовых ситуаций по сравнению с вышеупомянутые методы⁸.

Однако забора крови из Вены хвост иногда ограничивается неудовлетворительной успеха. Иногда это также трудно получить достаточный объем крови этим методом. Как подключичную Вену достаточно большой и расположен прямо под ключицы кости, пункция подключичной вены может быть альтернативный метод для отбора проб крови, если обычной крови коллекции методы оказываются безуспешными. Здесь мы представляем метод сбора крови посредством пункция подключичной вены в крыс.

протокол

Это исследование был одобрен Комитетом Центральной Южной университета этики исследований животных из больницы Xiangya второй (Чанша, Китай). Манускрипт был подготовлен согласно прибытия (животное исследования: отчетности в Vivo экспериментов) рекомендации⁹.

1. материал и животных подготовка

1. Подготовить необходимые материалы: Скотч, агент эпиляции, 75% этанола, пробирки, 2,5 мл шприц, связанных с иглой (24 G, 0.6 мм x 25 мм), волос бритва, электронные весы и колеи (см. Таблицу материалы).
2. Используйте 20 крысах Sprague-Dawley (SD), возрасте 8-10 недель и массой 153-200 г (см. Таблицу материалы). Поддерживать крыс в соответствии с руководство по уходу и использованию лабораторных животных¹⁰.
3. Дом крысы при стандартных условиях с бесплатным доступом к продовольствию и питьевой воде. Держите их в клетках² 530 см с постельным бельем древесно стружечные (2 крысы в клетке). Сохранить животных в комнатной температуре контролируемой температурой около 25 ° c.
4. Вызвать общий наркоз (Натрий Пентобарбитал 40 мг/кг) в всех животных через внутрибрюшинной инъекции перед пункция подключичной вены.
5. Место крыса в лежачем положении. Исправьте задних конечностей в удобном положении и исправить параллельно оси тела просто рядом ствола верхней конечности.
   Примечание: Не механическая вентиляция необходима для выполнения этой процедуры (рис. 1).
6. Очистите обе стороны подключичный пространства для удаления шерсти (с волос бритва и эпиляции агента, см. Таблицу материалы) и любых видимых загрязнений. Протрите шеи и грудной клетки кожи с 75% этанола. Держите области для прокола, чистой и сухой марлей.

2. Процедура сбора крови

Примечание: Обе стороны подключичную Вену подходят для прокола, и здесь мы выбираем с правой стороны для прокола. Расположение и направление правой ключицы идентифицируются оператора большой палец левой руки (рис. 2). Супрастернальные ямки нежно коснулся с указательный палец, как супрастернальные ямки в направлении стрелки (рис. 2).

1. Промывайте стерильной 2,5 мл шприц с раствором гепарина (10 МЕ/мл).
2. Найти узел прокол 0,5 мм каудально к внешней области 1/3 правой ключицы (рис. 3). Аккуратно переместите шприц в кожу на сайте проколам. После того, как игла входит в кожу подключичный, отрицательное давление оператора правой рукой (рис. 4).
   Примечание: Объем средняя и максимальная крови являются 1.0 мл и 1.4 мл, соответственно. Направление иглы позиционируется к супрастернальные ямки и должно быть почти параллельно ключицы, он просто кзади. Обычно подключичной вены можно добраться, вставляя иглу около 2 мм в этом направлении. После того, как игла входит в Вену, кровь будет ввести шприц под отрицательным давлением.
   1. Поддерживать отрицательное давление до тех пор, пока достаточное количество крови обращается (рис. 5).
3. Если коллекция крови подключичную Вену не является успешным, снять иглу в подкожной области и Отрегулируйте направление иглы слегка интерьера к грудине.
   1. Если три попытки не удались, избежать подключичную Вену с той же стороны и использовать контралатеральную сторону для забора крови.
4. После сбора крови удалить прокола иглой и приложите давление к проколам сайт для 1-2 минут, чтобы остановить кровотечение.
   Примечание: Давление должно быть очень нежный для предотвращения удушья.

3. кровь образец обработки

1. Перенесите крови в антикоагулянт покрытием вакуумная трубка (с ЭДТА) и центрифуги для 10 мин на 1600 x g для сбора плазмы.
2. Аспирационная супернатант чистой трубки и хранить при температуре-80 ° C (рис. 6).

Результаты

В общей сложности 20 SD крысы (мужской n = 10, женский n = 10) были использованы здесь. Collectionwas крови, выполняются квалифицированными операторами, которые провели более 20 крови выборок из подключичной вены в крыс, а также начинающих операторов, которые имеют не пункция подключ...

Обсуждение

Здесь мы представляем альтернативный метод для извлечения крови из подключичной вены и мы показываем, что этот метод является осуществимым и применимо для забора крови крыс. Этот метод является производным от пункция подключичной вены в вживления ритмоводителя свинца для пациентов

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
rats	Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd (Changsha, Hunan Province, China)
stastical software	SPSS Statistics 17
epilating agent	France Yi Sha Cosmetics Co.,Ltd(Guangzhou, Guangdong Province ,China)
2.5 mL syringe	Shandong Weigao Group Medical Polymer Co.,Ltd(Weihai,Shandong Province ,China)
hair shaver	Shanghai FLYCO Electric Co., Ltd(Shanghai,China)
adhesive tape	3M Deutschland GmbH(EdisonstraBe 6,59157 Kamen, Germany)
Pentobarbital sodium	Merck
75% ethanol	Department of Pharmacy,The Second Xiangya Hospital of Central South Univesity
blood collection tube	Hubei Jinxing Technology&Development Co.,Ltd (Wuhan Hubei Province,China) (2ml)
electronic scale	Dongguan Shengheng Electronics Co.,Ltd (Dongguan,Guangdng Province,China)
canvas gloves	for anethesia
hepain	Nanjing Xinbai Pharmaceutical  Co.,Limited (Nanjing, Jiangsu Province, China) (2mL, 12500 IU)
physical saline	Hunan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd(Yueyang ,Hunan Province,China) (100ml)