Puntura della vena succlavia come metodo alternativo di raccolta del campione di sangue in ratti

Riepilogo

Qui, presentiamo un protocollo per raccogliere campioni di sangue dalla vena succlavia del ratto.

Abstract

Raccolta di sangue con abbastanza volume di sangue è essenziale negli esperimenti sugli animali. Raccolta del sangue dalla vena della coda dei ratti è popolare e meno stressante rispetto ad altri metodi più aggressivi come retro-orbitale plesso raccolta dei campioni. Tuttavia, questo metodo di raccolta di sangue a volte è limitato da un tasso di successo insoddisfacente. Qui, presentiamo un metodo per la raccolta del sangue attraverso la puntura della vena succlavia. La vena succlavia si trova appena sotto la clavicola e questa vena è grande abbastanza per soddisfare i requisiti di volume della raccolta del sangue. I nostri risultati indicano che questo metodo è sicuro e applicabile per il campionamento di raccolta di sangue con il volume di sangue necessario. Raccolta del sangue attraverso la puntura della vena succlavia potrebbe servire come un metodo di raccolta di sangue alternativi in caso di prelievo di sangue della vena della coda non riuscita in ratti.

Introduzione

Raccolta del sangue è essenziale nella ricerca animale. Le vene di destinazione per la raccolta del sangue includono il plesso di retro-orbitale, la vena giugulare, la vena safena, coda vasi sanguigni e l'arteria carotica^1,2,3,4. A volte, potrebbe essere ottenuto sangue dall'aorta addominale, della vena cava o anche il cuore^5,6,7. In tali occasioni, gli animali devono essere sacrificati e non possono essere utilizzati per l'osservazione successiva; così, questi metodi sono utilizzati meno nel quotidiano lavoro sperimentale. Raccolta del sangue dalla vena della coda dei ratti è popolare e meno stressante rispetto ad i suddetti metodi⁸.

Tuttavia, prelievo di sangue dalla vena caudale molte volte è limitato da un tasso di successo insoddisfacente. In alcuni casi, è anche difficile da ottenere abbastanza volume di sangue da questo metodo. Come la vena succlavia è abbastanza grande e si trova appena sotto l'osso della clavicola, puntura della vena succlavia può essere un metodo alternativo per il campionamento di sangue se i metodi di raccolta sistematica di anima non hanno esito positivo. Qui, presentiamo un metodo di raccolta del sangue mediante puntura della vena succlavia in ratti.

Protocollo

Questo studio è stato approvato dal comitato etico University South Central per ricerca animale dall'ospedale Xiangya secondo (Changsha, Cina). Il manoscritto è stato preparato secondo ARRIVE (Animal Research: Reporting di In Vivo esperimenti) linee guida⁹.

1. materiale e animale preparazione

1. Preparare i materiali richiesti: nastro adesivo, agente di epilazione, 75% etanolo, tubo di raccolta sangue, 2,5 mL siringa collegata con ago (24 G, 0,6 mm x 25 mm), capelli rasoio, bilancia elettronica e calibro (Vedi Tabella materiali).
2. Utilizzare 20 ratti Sprague-Dawley (deviazione standard), invecchiate 8-10 settimane e pesatura 153-200 g (Vedi Tabella materiali). Mantenere ratti in conformità con la guida per la cura e l'uso di animali da laboratorio¹⁰.
3. Ratti a casa in condizioni standard con accesso gratuito per cibo e acqua potabile. Tenerli in gabbie di² cm 530 con biancheria da letto di rasatura di legno (2 ratti per gabbia). Mantenere gli animali in una temperatura ambiente temperatura controllata intorno ai 25 ° c.
4. Indurre l'anestesia generale (sodio pentobarbital 40 mg/kg) in tutti gli animali tramite l'iniezione intraperitoneale prima della puntura della vena succlavia.
5. Posto il ratto in posizione supina. Difficoltà arti posteriori in una posizione comoda e difficoltà dell'arto superiore parallela all'asse del corpo appena al lato del tronco.
   Nota: Nessuna ventilazione meccanica è necessaria per questa procedura (Figura 1).
6. Pulire entrambi i lati dello spazio infraclavicular rimuovere pelliccia (con capelli rasoio e agente di epilazione, Vedi Tabella materiali) e lo sporco visibile. Pulire il collo e la pelle toracica con etanolo al 75%. Mantenere l'area per la puntura pulito e asciutto con una garza.

2. procedura di raccolta del sangue

Nota: Entrambi i lati della vena subclavian sono adatti per la puntura, e qui abbiamo scelto il lato destro per la puntura. La posizione e la direzione della clavicola di destra sono identificati da pollice sinistro dell'operatore (Figura 2). I fossae di suprasternal sono toccati delicatamente con il dito indice come i fossae di suprasternal è nella direzione dell'ago (Figura 2).

1. Sciacquare una siringa sterile da 2,5 mL con soluzione di eparina (10 IU/mL).
2. Individuare il sito di puntura 0,5 mm caudale nella regione di 1/3 esterno della clavicola di destra (Figura 3). Spostare delicatamente la siringa nella pelle del sito di puntura. Una volta che l'ago entra nella pelle infraclavicular, applicare una pressione negativa con la mano destra dell'operatore (Figura 4).
   Nota: Il volume di sangue medio e massimo sono mL 1,0 e 1,4 mL, rispettivamente. La direzione dell'ago è posizionata verso i fossae di suprasternal e dovrebbe essere quasi parallela alla clavicola appena posteriormente ad esso. Di solito, la vena succlavia è raggiungibile inserendo l'ago di circa 2 mm in questa direzione. Una volta che l'ago entri la vena, sangue nella siringa entrerà sotto pressione negativa.
   1. Mantenere la pressione negativa fino a quando viene disegnato un volume sufficiente di sangue (Figura 5).
3. Se non viene completata la raccolta di sangue della vena subclavian, ritirare l'ago alla zona sottocutanea e regolare la direzione dell'ago leggermente interno allo sterno.
   1. Se tre tentativi falliscono, evitare la vena succlavia dallo stesso lato e utilizzare l'arto controlaterale per il prelievo di sangue.
4. Dopo la raccolta del sangue, rimuovere l'ago di puntura e applicare pressione al sito della puntura per 1-2 minuti fermare l'emorragia.
   Nota: La pressione deve essere molto delicata per evitare il soffocamento.

3. trattamento del campione di sangue

1. Trasferire il campione di sangue in un tubo a vuoto rivestite con anticoagulante (con EDTA) e centrifugare per 10 min 1600 x g per la raccolta del plasma.
2. Aspirare il surnatante in una provetta pulita e conservare a-80 ° C (Figura 6).

Risultati

Un totale di 20 ratti di SD (maschio n = 10, femmina n = 10) sono stati usati qui. Collectionwas di sangue eseguito da operatori specializzati, che si sono esibiti più di 20 campionamenti di sangue dalla vena succlavia in ratti e dagli operatori principianti, che non hanno nessuna puntura della vena succlavia esperienza nei ratti o altri animali. Prima delle operazioni, i principianti guardato almeno 3 procedure fare da operatori specializzati.

Discussione

Qui, presentiamo un metodo alternativo per l'estrazione del sangue dalla vena succlavia e mostriamo che questo metodo è fattibile, sicura e applicabile per il prelievo di sangue in ratti. Questo metodo è derivato dalla puntura della vena succlavia in impianto di piombo dello stimolatore cardiaco per pazienti¹¹. La vena succlavia si trova solo posteriore e caudale alla clavicola ed è una continuazione della vena ascellare. Va dal confine esterno della prima nervatura il bordo mediale del muscolo...

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
rats	Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd (Changsha, Hunan Province, China)
stastical software	SPSS Statistics 17
epilating agent	France Yi Sha Cosmetics Co.,Ltd(Guangzhou, Guangdong Province ,China)
2.5 mL syringe	Shandong Weigao Group Medical Polymer Co.,Ltd(Weihai,Shandong Province ,China)
hair shaver	Shanghai FLYCO Electric Co., Ltd(Shanghai,China)
adhesive tape	3M Deutschland GmbH(EdisonstraBe 6,59157 Kamen, Germany)
Pentobarbital sodium	Merck
75% ethanol	Department of Pharmacy,The Second Xiangya Hospital of Central South Univesity
blood collection tube	Hubei Jinxing Technology&Development Co.,Ltd (Wuhan Hubei Province,China) (2ml)
electronic scale	Dongguan Shengheng Electronics Co.,Ltd (Dongguan,Guangdng Province,China)
canvas gloves	for anethesia
hepain	Nanjing Xinbai Pharmaceutical  Co.,Limited (Nanjing, Jiangsu Province, China) (2mL, 12500 IU)
physical saline	Hunan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd(Yueyang ,Hunan Province,China) (100ml)