Vene subclavia Punktion als eine Alternative Methode zur Probe Blutentnahme bei Ratten

Zusammenfassung

Hier präsentieren wir ein Protokoll, um Blutproben von der Ratte subclavia Vene zu sammeln.

Zusammenfassung

Blutentnahme mit genügend Blutvolumen ist unerlässlich im Tierversuch. Blutentnahme aus der Vene Schweif von Ratten ist beliebt und weniger Stress im Vergleich zu anderen aggressiveren Methoden wie Retro-Orbital Plexus Kollektion probieren. Allerdings ist dieses Blut Erfassungsmethode manchmal durch eine unbefriedigende Erfolgsquote begrenzt. Hier stellen wir eine Methode für die Blutentnahme durch die Vene subclavia Punktion. Die subclavia Vene befindet sich direkt unter das Schlüsselbein und diese Ader ist groß genug, um das Volumen der Blutentnahme zu erfüllen. Unsere Ergebnisse zeigen, dass diese Methode sicher und anwendbar für Sammlung Blutabnahme mit der benötigten Blutvolumen. Blutentnahme durch die Vene subclavia Punktion könnte als eine alternative Blut Erfassungsmethode bei fehlgeschlagenen Schweif Vene Blut Stichproben bei Ratten dienen.

Einleitung

Blutentnahme ist in Tierversuchen unerlässlich. Die Ziel-Adern für die Blutentnahme gehören die Retro-Orbital-Plexus, die Halsschlagader der Stammvenen, Tail Blutgefäße und die Halsschlagader^1,2,3,4. Manchmal könnte Blut der abdominalen Aorta, Vena Cava oder sogar das Herz^5,6,7entnommen werden. Bei solchen Gelegenheiten die Tiere geopfert werden müssen und nicht für nachfolgende Beobachtung verwendet werden; so, mit diesen Methoden sind weniger in der täglichen experimentelle Arbeit. Blutentnahme aus der Vene Schweif von Ratten ist beliebt und weniger Stress im Vergleich zu den oben genannten Methoden⁸.

Blutentnahme aus der Vene Schweif ist jedoch manchmal durch eine unbefriedigende Erfolgsquote begrenzt. Gelegentlich ist es auch schwierig, genügend Blutvolumen von dieser Methode zu erhalten. Die subclavia Vene ist groß genug und befindet sich direkt unter dem Schlüsselbein-Knochen, läßt Vene subclavia Punktion sich eine alternative Methode für das um Blut zu probieren, wenn routinemäßige Blut Erhebungsmethoden nicht erfolgreich sind. Hier stellen wir eine Methode der Blutentnahme mittels Vene subclavia Punktion bei Ratten.

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Protokoll

Diese Studie wurde von der zentralen Ethikkommission South University für Animal Research aus dem zweiten Xiangya Krankenhaus (Changsha, China) genehmigt. Das Manuskript wurde nach Ankunft vorbereitet (Animal Research: Berichterstattung von In Vivo Experimente) Leitlinien-⁹.

1. Material und Tier Vorbereitung

1. Benötigte Materialien vorbereiten: Klebeband, Epilieren Agent, 75 % Ethanol, Blutsammelröhrchen, 2,5 mL Spritze mit Nadel (24 G, 0,6 x 25 mm), Haar Rasierer, elektronische Waage und Messgerät (siehe Tabelle der Materialien) verbunden.
2. Verwenden Sie 20 Sprague-Dawley (SD) Ratten, im Alter von 8 bis 10 Wochen und einem Gewicht von 153-200 g (siehe Tabelle der Materialien). Pflegen Sie gemäß dem Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren¹⁰Ratten.
3. Haus Ratten unter Standardbedingungen mit freiem Zugang zu Nahrungsmitteln und Trinkwasser. Halten sie in 530 cm² Käfige mit Holz-Rasur-Bettwäsche (2 Ratten pro Käfig). Halten Sie Tiere in einer temperaturgesteuerten Raumtemperatur bei etwa 25 ° C.
4. Induzieren Vollnarkose (Natrium-Pentobarbital 40 mg/kg) bei allen Tieren durch intraperitoneale Injektion vor der Vene subclavia Punktion.
5. Legen Sie die Ratte in Rückenlage. Befestigen Sie den hinteren Gliedmaßen in einer bequemen Position und befestigen Sie der oberen Extremität parallel zur Körperachse direkt neben dem Stamm.
   Hinweis: Keine mechanische Lüftung benötigt für dieses Verfahren (Abbildung 1).
6. Reinigen Sie beide Seiten des Raumes Infraclavicular Fell entfernen (mit Haar Rasierer und Epilieren Agent, siehe Tabelle of Materials) und sichtbaren Schmutz. Wischen Sie den Hals und thorakalen Haut mit 75 % Ethanol. Halten Sie den Bereich für die Punktion, sauber und trocken mit Gaze.

2. Blut Inkasso

Hinweis: Beide Seiten der subclavia Ader eignen sich für Punktion und hier wählen wir die Rechte Seite für Punktion. Die Lage und Richtung des rechten Schlüsselbeins werden durch die Betreiber linken Daumen (Abbildung 2) identifiziert. Suprasternal Gruben sind sanft mit dem Zeigefinger berührt, als die Suprasternal Gruben geht in die Richtung der Nadel (Abbildung 2).

1. Spülen einer sterilen 2,5 mL Spritze mit Heparin-Lösung (10 IU/mL).
2. Suchen Sie die Punktionsstelle 0,5 mm kaudalen zur äußeren Umgebung: 1/3 des rechten Schlüsselbeins (Abbildung 3). Verschieben Sie die Spritze sanft in die Haut an der Einstichstelle. Sobald die Nadel die Haut Infraclavicular tritt, gelten Sie Unterdruck mit Rechten des Betreibers (Abbildung 4).
   Hinweis: Die durchschnittliche und maximale Blutvolumen sind 1,0 mL 1,4 mL bzw.. Die Richtung der Nadel sollte befindet sich in Richtung der Suprasternal Gruben und fast parallel zum Schlüsselbein nur hintere darauf. In der Regel kann der subclavia Vene erreicht werden, durch die Nadel ca. 2 mm in diese Richtung. Sobald die Nadel die Vene gelangt, wird Blut die Spritze Unterdruck.
   1. Unterdruck bis genügend Volumen des Bluts gezeichnet wird (Abbildung 5).
3. Wenn die Blutentnahme subclavia Vene nicht erfolgreich ist, ziehen Sie die Nadel heraus zum subkutanen Bereich und passen Sie die Richtung der Nadel leicht innen auf dem Brustbein.
   1. Wenn drei Versuche fehlschlagen, vermeiden die subclavia Vene von der gleichen Seite und verwenden der kontralateralen Seite für die Blutabnahme.
4. Entfernen Sie nach der Blutentnahme die Punktionsnadel, und üben Sie Druck auf die Punktionsstelle für 1-2 Minuten, um Blutungen zu stoppen.
   Hinweis: Der Druck muss sehr sanft zu ersticken zu verhindern.

3. Blut Probe Verarbeitung

1. Übertragen Sie die Blutprobe in ein Antikoagulans-beschichtetem Vakuumröhre (mit EDTA) und Zentrifuge für 10 min bei 1600 X g Plasma zu sammeln.
2. Aspirieren des Überstands in ein sauberes Röhrchen und Store bei-80 ° C (Abbildung 6).

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Ergebnisse

Insgesamt 20 SD-Ratten (männliche n = 10, weibliche n = 10) wurden hier verwendet. Blut Collectionwas durchgeführt, indem qualifizierte Betreiber, die mehr als 20 Blut Kostproben aus der subclavia Vene an Ratten durchgeführt haben und die Anfänger-Betreiber, die keine Vene subclavia Punktion haben Erfahrung in Ratten oder andere Tiere. Vor Operationen beobachtete Anfänger mindestens 3 Verfahren durch qualifiziertes Personal durchgeführt.

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Diskussion

Hier stellen wir eine alternative Methode für die Extraktion von Blut aus der Vene subclavia und wir zeigen, dass diese Methode möglich, sichere und anwendbar für die Blutentnahme bei Ratten. Diese Methode wird von der subclavia Vene Punktion im Herzschrittmacher Blei Implantation für Patienten¹¹abgeleitet. Die subclavia Vene liegt nur posterior und kaudalen, das Schlüsselbein und ist eine Fortsetzung der axillären Ader. Er verläuft von der äußeren Grenze der ersten Rippe auf den medialen...

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Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
rats	Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd (Changsha, Hunan Province, China)
stastical software	SPSS Statistics 17
epilating agent	France Yi Sha Cosmetics Co.,Ltd(Guangzhou, Guangdong Province ,China)
2.5 mL syringe	Shandong Weigao Group Medical Polymer Co.,Ltd(Weihai,Shandong Province ,China)
hair shaver	Shanghai FLYCO Electric Co., Ltd(Shanghai,China)
adhesive tape	3M Deutschland GmbH(EdisonstraBe 6,59157 Kamen, Germany)
Pentobarbital sodium	Merck
75% ethanol	Department of Pharmacy,The Second Xiangya Hospital of Central South Univesity
blood collection tube	Hubei Jinxing Technology&Development Co.,Ltd (Wuhan Hubei Province,China) (2ml)
electronic scale	Dongguan Shengheng Electronics Co.,Ltd (Dongguan,Guangdng Province,China)
canvas gloves	for anethesia
hepain	Nanjing Xinbai Pharmaceutical  Co.,Limited (Nanjing, Jiangsu Province, China) (2mL, 12500 IU)
physical saline	Hunan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd(Yueyang ,Hunan Province,China) (100ml)