בריחי וריד לנקב כאמצעי חלופי של איסוף דגימת דם בחולדות

Summary

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לאסוף דגימות דם מן הווריד בריחי של חולדה.

Abstract

איסוף דם עם מספיק נפח הדם חיונית בניסויים על בעלי חיים. איסוף דם מן הווריד של הזנב של חולדות הוא פופולרי פחות מלחיץ לעומת שיטות אחרות אגרסיבי יותר כמו רטרו-מסלולית מקלעת לטעום אוסף. עם זאת, שיטה זו של אוסף דם לפעמים מוגבל על ידי שיעור ההצלחה משביעת רצון. כאן, אנחנו מציגים את שיטת איסוף דם דרך הווריד בריחי הניקוב. תקחי את בריחי ממוקם בדיוק מתחת לעצם הבריח, הוריד הזה הוא מספיק גדול כדי למלא את דרישות האחסון של איסוף דם. התוצאות שלנו מראים כי בשיטה זו הוא בטוח וישימים לדיגום אוסף דם עם נפח הדם הנדרשת. איסוף דם דרך הווריד בריחי הניקוב יכול לשמש כמו שיטת איסוף דם חלופי במקרה של לקיחת דמים וריד הזנב שנכשלו בחולדות.

Introduction

איסוף דם חיוני בתחום המחקר בבעלי חיים. הורידים היעד עבור איסוף דם כוללים את מקלעת רטרו-מסלולית, ומוחלף על, וריד saphenous, כלי הדם הזנב את העורק הראשי^1,2,3,4. לפעמים, דם יכולה להיות מושגת העורק הראשי, הנבוב או אפילו את הלב^5,6,7. במקרים כאלה, בעלי החיים חייבים להיות מוקרבים ואין אפשרות להשתמש להשגחה הבאים; לכן, שיטות אלה משמשים פחות בעבודה היומיומית ניסיוני. איסוף דם מן הווריד של הזנב של חולדות הוא פופולרי ומלחיץ פחות לעומת שיטות⁸שהוזכרו לעיל.

עם זאת, איסוף דם מן הווריד של הזנב לפעמים מוגבל על ידי שיעור ההצלחה משביעת רצון. לפעמים, זה גם קשה להשיג מספיק נפח הדם בשיטה זו. כפי הווריד בריחי גדול מספיק והוא ממוקם בדיוק מתחת לעצם הבריח, ניקוב בריחי הווריד יכולה להיות שיטה חלופית עבור דגימה דם אם דם שגרתית אוסף שיטות נכשלות. כאן, אנחנו מציגים את שיטת איסוף דם דרך הווריד בריחי לנקב בחולדות.

Protocol

מחקר זה אושרה על ידי ועדת האתיקה המרכזית של אוניברסיטת דרום לחקר בעלי חיים מבית החולים Xiangya השני (צ'אנג-שא, סין). כתב היד הוכן לפי יגיעו (חיה מחקר: דיווח ב- Vivo ניסויים) הנחיות⁹.

1. החומר של בעלי חיים הכנה

1. להכין חומרים הדרושים: דבק, הסוכן epilating, 75% אתנול, דם אוסף שפופרת, מזרק 2.5 מ ל מחובר עם מחט (24 G, 0.6 מ"מ x 25 מ"מ), גילוח שיער, מידה אלקטרוניים מד (ראה טבלה של חומרים).
2. השתמש 20 חולדות ספראג-Dawley (SD), בגילאי 8-10 שבועות, במשקל 153-200 g (ראה טבלה של חומרים). לשמור על חולדות לפי המדריך בשביל טיפול, שימוש של חיות מעבדה¹⁰.
3. חולדות House בתנאים סטנדרטיים עם גישה חופשית שתייה ואוכל. לשמור אותם בכלובים² ס מ 530 עם מצעים עץ גילוח (שני עכברושים לכל הכלוב). לשמור על חיות מבוקרי טמפרטורה טמפרטורת החדר. ב בסביבות 25 º C.
4. זירוז הרדמה כללית (סודיום פנטוברביטל 40 מ"ג לק"ג) כל בעלי החיים באמצעות הזרקה בקרום הבטן לפני הניקוב בריחי וריד.
5. מקם את החולדה במצב פרקדן. לתקן את הגפיים האחוריות בתנוחה נוחה ולתקן את הגפיים העליונות מקביל לציר הגוף ליד תא המטען.
   הערה: אין אוורור מכני נדרש עבור הליך זה (איור 1).
6. לנקות את שני הצדדים של המרחב infraclavicular להסרת פרווה (עם גילוח שיער, הסוכן epilating, ראה טבלה של חומרים) ולכלוך לעין כל. נגב את הצוואר, בית החזה העור עם 75% אתנול. שמור על האזור עבור ניקוב נקי ויבש עם גזה.

2. הליך איסוף הדם

הערה: שני צידי הווריד בריחי מתאימים לנקב ולאחר כאן בחרנו את הצד הנכון עבור ניקוב. המיקום והכיוון של הבריח הימנית מזוהים על ידי האגודל השמאלית של המפעיל (איור 2). Fossae suprasternal הם נגע בעדינות עם האצבע. כמו fossae suprasternal הוא בכיוון של המחט (איור 2).

1. לשטוף מזרק 2.5 מ ל סטרילי עם הפרין פתרון (10 IU/mL).
2. אתר החדירה 0.5 מ מ סימטרית לאזור 1/3 החיצוני של הבריח הימנית (איור 3). הזז את המזרק בעדינות לתוך העור של החדירה. ברגע שהמחט מזין את העור infraclavicular, הפעילו לחץ שלילי עם יד ימין של המפעיל (איור 4).
   הערה: נפח הדם הממוצע ואת מירבית הן 1.0 mL ומל ' 1.4, בהתאמה. כיוון המחט נמצאת בעמדה כלפי fossae suprasternal לבין צריך להיות כמעט מקבילים עצם הבריח אחורי רק אליו. בדרך כלל, תקחי את בריחי ניתן להגיע על ידי החדרת המחט בערך 2 מ מ בכיוון הזה. ברגע שהמחט נכנסת את הווריד, דם יזין את המזרק בלחץ שלילי.
   1. לשמור על לחץ שלילי עד נמשך מספיק נפח הדם (איור 5).
3. אם האוסף דם בריחי וריד אינה מוצלחת, לשלוף את המחט אל אזור תת עורית ולהתאים את הכיוון של המחט מעט פנים לעצם החזה.
   1. אם שלושת הניסיונות, למנוע את הווריד בריחי מן הצד אותו ולהשתמש הצד contralateral עבור לקיחת דמים.
4. לאחר איסוף דם, הסר את המחט לנקב, והפעילו לחץ כדי החדירה במשך 1-2 דקות לעצור את הדימום.
   הערה: הלחץ חייב להיות עדין מאוד כדי למנוע חנק.

3. דם לטעום עיבוד

1. להעביר את דגימת הדם שפופרת ריק מצופים קרישה (עם EDTA) לתוך צנטריפוגה 10 דקות ב g x 1600 לאסוף פלזמה.
2. וארוקן את תגובת שיקוע צינור נקי ו החנות ב-80 מעלות צלזיוס (איור 6).

תוצאות

סכום כולל של 20 של חולדות SD (זכר n = 10, נקבה n = 10) שימשו כאן. Collectionwas דם המבוצעת על ידי מפעילי מיומן, אשר יש לבצע יותר מ-20 samplings דם הווריד בריחי בחולדות, ועל ידי האופרטורים מתחיל, שיש להם אין לנקב בריחי וריד ניסיון של חולדות או חיות אחרות. לפני פעולות, למתחילים צפו לפחות 3 הטיפולים ...

Discussion

כאן, אנו מציגים את שיטה חלופית לחילוץ דם מן הווריד של הבריח, אנו מראים כי בשיטה זו הוא ריאלי, בטוח ו ישימים עבור דגימה דם בחולדות. שיטה זו נגזרת הניקוב בריחי וריד ב קוצב הלב הראשי השרשה עבור חולים¹¹. הווריד בריחי ממוקם רק האחורי, סימטרית. יווארה לעצם הבריח, המשך הווריד בבית השחי. ה?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
rats	Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd (Changsha, Hunan Province, China)
stastical software	SPSS Statistics 17
epilating agent	France Yi Sha Cosmetics Co.,Ltd(Guangzhou, Guangdong Province ,China)
2.5 mL syringe	Shandong Weigao Group Medical Polymer Co.,Ltd(Weihai,Shandong Province ,China)
hair shaver	Shanghai FLYCO Electric Co., Ltd(Shanghai,China)
adhesive tape	3M Deutschland GmbH(EdisonstraBe 6,59157 Kamen, Germany)
Pentobarbital sodium	Merck
75% ethanol	Department of Pharmacy,The Second Xiangya Hospital of Central South Univesity
blood collection tube	Hubei Jinxing Technology&Development Co.,Ltd (Wuhan Hubei Province,China) (2ml)
electronic scale	Dongguan Shengheng Electronics Co.,Ltd (Dongguan,Guangdng Province,China)
canvas gloves	for anethesia
hepain	Nanjing Xinbai Pharmaceutical  Co.,Limited (Nanjing, Jiangsu Province, China) (2mL, 12500 IU)
physical saline	Hunan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd(Yueyang ,Hunan Province,China) (100ml)