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Method Article
几种给药途径可用于将间充质干细胞 (MSC) 输送到大脑。在本研究中,MSC 通过椎腔内注射在整个神经轴和大脑中递送。将 MSCs 注射到大鼠的脊髓腔中,并跟踪和定量干细胞迁移。
间充质干细胞 (MSC) 已被研究用于治疗各种疾病。在涉及大脑和脊髓缺陷的神经退行性疾病中,给药途径非常重要,因为 MSC 必须迁移到大脑和脊髓。本文描述了一种将 MSC 注射到椎管(椎管内腔注射)的方法,该方法可以在大鼠模型中靶向大脑和脊髓。将 100 万个 MSCs 注射到腰椎 2-3 水平的大鼠椎管中。给药后,大鼠在注射后 0 、 6 和 12 小时实施安乐死。采用光学成像和定量实时聚合酶链反应 (qPCR) 追踪注射的 MSCs。本研究的结果表明,随后可以在 12 小时时在大脑和脊髓中检测到通过脊髓给药的 MSCs。椎管腔内注射的优点是不需要全身麻醉,副作用小。然而,必须克服 MSCs 向大脑迁移率低的缺点。
间充质干细胞
在疾病条件下,MSC 通过旁分泌作用1 分泌疾病特异性治疗物质,据报道,这些物质可以调节免疫反应、恢复受损组织和去除有毒物质2。因此,MSC 疗法被认为在治疗阿尔茨海默病和肌肉减少症等多因素疾病方面比单靶点疗法更有效 3,4,5,6。此外,与药物相比,MSC 具有归巢作用,通过识别体内的炎性细胞因子或趋化因子移动到受损组织区域 7,8。不幸的是,只有一部分细胞到达受损区域,并且 MSC 的活力在迁移过程中会降低 9,10,11,12。因此,为了最大限度地提高 MSC 的治疗效果,有必要将活细胞输送到目标位点。因此,在施用 MSC 时,根据目标疾病的性质选择合适的给药途径非常重要。
注射路线
向患者施用治疗药物的途径有很多种。最常见的方法是静脉注射到体循环中、口服给药以及皮下或肌肉注射。在神经退行性疾病中,向大脑输送治疗剂的主要障碍是血脑屏障 (BBB)。BBB 通过血管和脑实质之间的紧密连接来保护大脑免受外部病原体的侵害13,14。然而,BBB 也自相矛盾地阻止了治疗剂进入脑实质。因此,通过 BBB 是脑部疾病疗法发展的主要障碍15,16。脑内注射是通过外科手术将目标物质直接注射到大脑中来克服这一缺点 17,18,19。然而,应考虑手术干预的副作用,特别是因为针头在手术过程中会损害神经元细胞。
椎管腔内给药
鞘内给药 - 将药物施入椎管或蛛网膜下腔 - 通过脑脊液 (CSF) 将药物输送到大脑或神经轴,是脑内注射的可行替代方案。鞘内注射可根据注射部位细分:侧脑室、大脑池和脊髓腔。这三种途径都允许药物或细胞在整个脑脊液中扩散到大脑和脊髓中。在脑室内和脑池内注射的情况下,药物输送到大脑可能更有效,因为药物是在靠近大脑的地方注射的。然而,椎管腔内注射的优点是不需要全身麻醉或手术插入脑室内储液器,一般安全20,必要时可以重复进行。
本研究的目的是验证椎管腔内给药作为将 MSC 输送到大脑和脊髓的一种手段。首先,在大鼠模型中建立椎管内腔。接下来,用亲脂性示踪剂 DiD (DiIC18(5);1,1-二十八烷基-3,3,3,3-四甲基吲哚二羰菜盐、4-氯苯磺酸盐)标记 MSCs,以评估干细胞迁移到脊髓和大脑的效率。进行离体光学成像以评估细胞分散。这种简单的方案可以在没有手术干预的情况下进行,不仅可以用于管理干细胞,还可以用于管理药物、抗体、造影剂和其他旨在输送到脊髓或大脑的物质。
注意:这项研究已获得三星医疗中心三星生物医学研究所 (SBRI) 机构动物护理和使用委员会(批准号:20170125001,日期:2017 年 1 月 25 日)的批准。作为国际实验动物护理评估和认证协会的认可机构,SBRI 按照实验动物资源研究所制定的指导方针行事。
1. 人沃顿氏胶源 MSC 的制备
2. WJ-MSCs的椎管腔内注射
3. 椎管腔内注射的评价
为了评价椎管腔内注射 MSCs 的疗效,本研究中使用了 DiD 标记的 MSCs。在将 MSC 注射到脊髓腔之前,使用光学成像和荧光显微镜在体外评估标记效果(图 1)。使用方案第 3.1 节中描述的程序用 DiD 标记试剂对 MSC 进行染色后,拍摄接种 DiD 标记的 MSC 的培养板的光学图像(图 1A)。DiD 标记的 MSC (+DiD) 以红色显示;未用 DiD 染料标?...
应根据目标疾病、患者病情和要给药的药物类型来选择间充质干细胞治疗的最佳给药途径。在细胞疗法中,包括 MSC 疗法,必须考虑通过 CSF 将干细胞直接注射到大脑中或鞘内注射,因为细胞无法通过 BBB19。与脑室内注射不同,椎管腔内注射相对无创,不会在大脑中造成神经元损伤,并且副作用风险低20。通过腰椎穿刺进入 CSF 是一种可?...
作者没有什么可披露的。
这项研究得到了韩国国家研究基金会(NRF)的基础研究计划的资助,由教育部资助(NRF-2017R1D1A1B03035940),以及韩国健康技术研发项目通过韩国健康产业发展研究所(KHIDI)资助的资助,由韩国卫生与福利部资助(资助编号: HI14C3484 和 HI18C0560)。感谢意得辑 (www.editage.co.kr) 的英文编辑。
Name | Company | Catalog Number | Comments |
0.25% Trypsin-EDTA | Gibco-invitrogen | 25200114 | Cell culture |
Fetal bovine serum | biowest | S1520 | Culture medium supplement |
gentamicin | Gibco-invitrogen | 15710-072 | Culture medium supplement |
Gentra Puregene Tissue Kit | QIAGEN | 158689 | gDNA isolation |
MEM, no glutamine, no phenol red | Gibco | 51200038 | WJ-MSC fomulation for injection |
Miminum Essential Medium alpha | Gibco-invitrogen | 12571063 | WJ-MSC culture medium |
Power SYBR Green PCR Master Mix | Applied Biosystems | 4368577 | quantitative real time PCR reagent |
QuantStudio 6 Flex Real-Time PCR System | Thermo fisher | 4485694 | quantitative real time PCR |
trypan blue | Gibco | 15250061 | Injection |
Vybrant DiD Cell-Labeling Solution | invitrogen | V22887 | Stem cell labeling solution |
Xenogen IVIS Spectrum system | Perkin Elmer | 124262 | Optical imaging device |
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