袖带技术在小鼠原位肝移植中的血管重建

Summary

该协议为在小鼠原位肝移植中使用袖带技术进行血管重建提供了技术信息。

Abstract

小鼠原位肝移植是研究肝缺血和再灌注损伤潜在机制的有效方法。然而，技术挑战对利用这种宝贵的实验模型并将这些技能传授给下一代构成了障碍。该手术最具挑战性的方面是血管重建，包括门静脉 （PV）、肝下下腔静脉 （IHIVC） 和肝上下腔静脉。使用塑料袖带而不是缝合线，可以更顺利地进行 PV 和 IHIVC 重建。通过将由静脉导管制成的袖带连接到移植物血管的尖端并将袖带插入受体血管来重建血管。两个最关键的方面是正确地观察血管的内腔和避免使用过度的力。我们的目标是提供在接受者手术中使用袖带技术进行血管重建的技术概述。这些袖带技术的技术技巧有望帮助显微外科医生促进血管重建并推进他们的研究。

Introduction

小鼠原位肝移植（MOLT）是一种有效的实验方法，于1991年首次报道¹。这种利用转基因小鼠和各种研究试剂的实验模型在研究冷暖缺血和再灌注损伤方面发挥了关键作用。然而，该模型的高技术复杂性阻碍了肝移植基础医学的发展^2。MOLT 涉及三个主要步骤：（1） 从供体小鼠中取出肝脏，（2） 背台手术，以及 （3） 将肝脏植入受体。在这些受体手术中，血管吻合术构成了最大的挑战。虽然肝上下腔静脉吻合术通常通过手工缝合完成²，但肝下下腔静脉 （IHIVC） 和门静脉 （PV） 可以使用塑料袖带代替手工缝合线更有效地重建。

肝期表示切除受体的天然肝脏和移植物植入之间的间隔。为确保一致的结果，必须将肝脏分离时间限制在20分钟以内。因此，采用这一模式的研究仅限于^特定机构3,4,5,6,7,8,9。....

Protocol

该实验方案得到了京都大学动物实验委员会的批准。该研究使用了从商业来源获得的 C57BL/6 小鼠，年龄超过 10 周，体重在 25 g 至 30 g 之间（参见 材料表）。所有动物均用2.5%异氟烷麻醉（遵循机构批准的方案），在特定的无病原体条件下维持，所有实验程序均按照京都大学的《动物实验条例》进行。用于研究的适当仪器列在 材料表 中，如图 1 和 图 2 所示。

1. 动物选择

1. 使用体重为25-30克的小鼠。
   注意：虽然小鼠肝脏同种异体移植物² 在主要组织相容性复合物屏障中被普遍接受，但我们在这项研究中选择了同基因 MOLT 模型，以关注冷缺血再灌注损伤¹⁰ 的详细机制。不建议使用体重小于 25 g 的小鼠，因为不可能将内部支架插入细胆管。同样，由于血管周围存在大量腹内脂肪，因此不建议体重超过 30 克的小鼠。

2. 袖口制作

1. 分别为 PV 和 IHIVC 准备 20 G 和 16 G 静脉导管。

Discussion

学习血管重建是成功实现 MOLT 最具挑战性的方面。鉴于小鼠⁵ 的体型较小，袖带的质量显着影响了重建的难度。本文提供了袖带准备、连接和重建的详细方案。

虽然与以前的报告在袖带准备和连接方面没有重大差异 ^2,5，^但应考虑一些小问题。首先，袖带手柄的厚度应限制在总周长的 1/6 左右。如果太薄，手柄很容?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
16 G intravenous catheter	TERUMO	SR-FF2032	IHIVC cuff
20 G intravenous catheter	TERUMO	SR-FF1651	PV cuff
8-0 braid silk	Natsume Seisakusho	CR9-80B2	8-0 silk
Belzer UW Cold Storage Solution	Astellas		Organ preservation fluid
Bulldog clamp	B BRAUN	FB329R	Bulldog clamp
C57BL/6 mice	Oriental Bio Service
Isoflurane inhalation solution	Viatris		Anesthesic
Micro Blunted Tips 0.1 mm x 0.06 mm	F.S.T	11253-20	Straight microforceps
Micro Serrefine Clamp Applicator with Lock	F.S.T	18056-14	Vessel clip applicator
Micro Serrefines	F.S.T	18055-4	Vessel clip
No.11 Spare Blades	FEATHER Safety Razor	11	Blades
Ophthalmic scissor, round handle	B BRAUN	FD103R	Microscissor
Plastic rectangular-shaped container	Daiso		10 cm long, 15 cm wide and 6 cm high
SuperGrip Tips	F.S.T	00649-11	Curved microforceps
SZX7	Olympus	SZX7	Microscope