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摘要

该方案提出了一种诱导肠系膜缺血再灌注损伤和使用活体显微镜观察肠系膜小静脉中中性粒细胞细胞外陷阱 （NET） 的方法。肠系膜上动脉的血流限制 1 h，然后进行再灌注，允许直接量化白细胞粘附和 NETosis。

摘要

肠缺血再灌注 （I/R） 损伤是一种急性疾病，其特征是由于肠系膜血管血流受限导致组织损伤，导致局部和全身病变，预后不良。缺血和再灌注都会触发一系列细胞和分子反应，其中炎症细胞是病理学的关键调节因子。这些与缺血性内皮的相互作用是由多个粘附受体介导的。已经建立了几种动物模型来模拟这种病理学并研究所涉及的分子途径。在这项研究中，I/R 损伤的显微外科模型与活体显微镜相结合，以可视化白细胞滚动、粘附和中性粒细胞胞外陷阱 （NET） 形成。该模型应用于内皮 PAR1 （F2r） 缺陷的转基因小鼠，以评估 PAR1 对缺血后 1 小时和再灌注后立即白细胞滚动和 NET 形成的影响。 在体内，采用 Acridine Orange 白细胞染色，并使用核酸染色观察 NETs。有趣的是，在缺乏内皮 PAR1 受体的小鼠中观察到白细胞粘附和 NET 形成减少。该模型能够对参与 I/R 损伤的关键调节因子进行 体内 分析。

引言

急性肠系膜缺血 （AMI） 是一种罕见的病理1 （具有很高的死亡风险2），其特征是由于腹腔轴或肠系膜上动脉或肠系膜下动脉的血栓导致肠系膜血流减少。在 60%-70% 的病例中，由于血栓形成或栓塞引起的肠系膜上动脉急性闭塞是导致急性肠缺血的原因 3。相比之下，在 5-15% 的病例中，肠系膜静脉血栓形成导致肠系膜缺血，涉及肠系膜上静脉，更罕见的是肠系膜下静脉4。缺血引起的缺氧和营养不良导致细胞水平的能量代谢紊乱5。例如，线粒体功能受损会激活多个信号转导通路，启动细胞死亡机制6。虽然快速再灌注能够恢复有氧代谢，但由于活性氧 （ROS） 产生7、钙超负荷8、内皮功能障碍9 和炎症反应10，流向缺血区域的血流恢复通常会导致广泛的组织损伤。

已经建立了许多采用肠系膜上动脉暂时性血管闭塞的实验动物模型来阐明缺血再灌注 （I/R） 损伤期间的分子机制11。将此类模型与活体显微镜 （IVM） 结合使用对于深入了解潜在的细胞相互作用和疾病进展至关重要11。缺血后不久观察到肠道屏障功能障碍12，上皮失去完整性13，导致细菌转移到肠外部位，如肠系膜淋巴结、脾脏、肝脏和肾脏12,14。再灌注进一步加重粘膜损伤15.小动脉中的炎症反应表现为白细胞在内皮细胞层上滚动和牢固的粘附，这取决于 L-选择素16、P-选择素 （CD62P）17、血小板 GPIIb/IIIa 和纤维蛋白原18 等分子。有趣的是，白细胞与肠系膜小静脉的粘附受肠道微生物群19 和 Toll 样受体 4 信号转导10 的影响。I/R 损伤也会触发中性粒细胞胞外陷阱 （NET） 形成10。源自活化的白细胞（如中性粒细胞）的细胞外 DNA 的治疗靶向可改善肠道 I/R 损伤的预后20。在肝脏中，I/R 损伤被驻留的微噬细胞点燃21，microRNA 抑制显著减轻细胞凋亡22。值得注意的是，肠系膜的 I/R 损伤会导致肠道菌群失调，这是可逆的，并在血运重建后得到解决23。

内皮也受到 I/R 损伤的破坏性影响，ROS 在此过程中起着关键作用24。观察到白细胞粘附到内皮细胞层、内皮损伤和一氧化氮 （NO） 代谢的改变9。然而，所涉及的分子途径尚未得到充分探索。

蛋白酶激活受体 1 （PAR1， F2r） 是一种由多种细胞（包括内皮细胞）表达的膜受体，在炎症条件下被激活25。当丝氨酸蛋白酶在 N 端裂解受体时，就会发生其激活，暴露出栓系配体，进而通过与分子的第二个细胞外环结合来激活受体26。内皮蛋白 C 受体 （EPCR）-PAR1 信号通路影响内皮 NO 稳态并促进外周缺血血流的恢复27。

在这项研究中，将 I/R 损伤应用于以内皮细胞特异性 PAR1 缺陷为特征的遗传小鼠模型，以可视化白细胞滚动、粘附和 NET 形成。I/R 显微手术后遗传小鼠模型和活体显微镜的结合通过突出疾病进展中涉及的特定细胞类型提供了有价值的见解。将 I/R 损伤应用于遗传小鼠模型有助于确定可用于改善疾病进程的潜在治疗靶点。此外，显示了内皮 PAR1 在 NETosis 中的显着性。

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研究方案

所有涉及小鼠的程序均由当地动物立法委员会（Landesuntersuchungsamt Rheinland-Pfalz，科布伦茨，德国;G21-1-041）。6-8 周龄雄性和雌性 B6。FVB-F2rtm1a（EUCOMM） Tg/Cdh5-cre）7Mlia/Tarc 小鼠用于研究。F2r （PAR1） 的内皮细胞特异性调节通过 VE-钙粘蛋白 Cre 启动子28 发生。在这项研究中，flox-F2r x VE-钙粘蛋白 Cre+ （F2RΔEC） 在内皮细胞上表现出降低的 F2r （PAR1） 表达，flox-F2r x VE-钙粘蛋白 Cre- （WT） 表达正常的内皮 F2r （PAR1） 水平。本研究中使用的试剂和设备的详细信息列在材料表中。

1. 手术准备

  1. 对必要的手术器械（超窄剪刀、直剪刀、镊子、血管夹等）进行消毒。
  2. 准备带有鼻锥和加热板的基于氧气和异氟醚的麻醉系统。

2. 动物准备

  1. 称量动物。
  2. 进行麻醉: 通过 腹膜内 （ip） 注射含有咪达唑仑 （5 mg/kg）、美托咪定 （0.5 mg/mL） 和芬太尼 （0.5 mg/kg） 的溶液麻醉小鼠（遵循机构批准的方案）。
  3. 用小动物电动剃须刀去除颈部和腹部手术区域的毛发。
  4. 将鼠标背靠在加热垫上，并通过鼻锥将其连接到 氧气系统。 用手术胶带将鼠标的肢体固定在加热垫上。确保乳胶鼻锥膜牢固地贴合鼠标头部。使用啮齿动物专用温度计监测动物的直肠体温。
  5. 涂抹脱毛霜以去除颈部手术区域残留的毛发，并用 70% 乙醇擦拭手术区域的皮肤。
  6. 进行脚趾捏试验（踏板反射）以确保动物完全麻醉。

3. 外科手术

  1. 颈静脉导管植入术
    1. 在气管上做一个横向切口 （~0.5 cm），去除覆盖颈部的皮肤，并隔离右颈静脉。
    2. 使用约 5 厘米的丝线，闭合静脉远端，并用手术钳固定。将三根丝线放在静脉下方约 2 厘米处:一根靠近远端，两根靠近颈静脉的近端。打一个手术结，但不要关闭血管。
    3. 准备一根填充有 0.9% NaCl 的聚乙烯导管（0.28 毫米内径，0.61 毫米外径），并用 1 mL 注射器塞住。用剪刀在第二个和第三个结之间切一个孔，然后将导管植入颈静脉。吸出注射器以确保导管中存在血液。
    4. 通过系丝线将导管固定在静脉中，确保其牢固固定。使用医用胶带固定注射器。
    5. 制备吖啶橙:在 1 mL 注射器中用无菌盐水（终浓度 0.5 mg/mL）以 1:4 稀释 2 mg/mL 储备液。将注射器置于黑暗中，并在小鼠中注射 50 μL。
    6. 制备核酸染料:在 1 mL 注射器中用无菌盐水（终浓度 5 μM）以 1:1000 稀释 5 mM 储备液。将注射器置于黑暗中，并在小鼠中注射 50 μL。
    7. 通过颈静脉导管体内注射吖啶橙（50 μg/μL，每只小鼠 50 μL），以可视化染色的白细胞和细胞外 DNA 荧光染料，类似于染色中性粒细胞细胞外陷阱 （NET）（5 μM，每只小鼠 50 μL）。NET 和白细胞同时成像。
  2. 肠系膜 I/R 损伤模型
    1. 用 70% 乙醇对腹部皮肤进行消毒。
    2. 使用手术剪刀沿 白线 进行 3-5 厘米的剖腹手术。
    3. 使用两个蘸有盐水的棉签，轻轻地取出肠道，并确定脂肪覆盖率最低的位置。将小肠支放在黑色面团上以减少背景信号。
    4. 在 I/R（缺血前期）之前采集视频。
    5. 用 NaCl 压缩水分，然后将肠道放入其中。确保肠道被热敷物包围，并在步骤 5.6 中保持水分。
    6. 用小血管夹闭塞肠系膜上动脉。
    7. 使用蘸有生理盐水的棉签轻轻地将肠道推回腹腔，并使用 7-0 缝合线闭合腹壁，以防止水分和温度流失。维持缺血 60 分钟，至少每 20 分钟检查一次麻醉。
    8. 1 小时后，通过移除夹子开始再灌注。
      注意:正确执行缺血程序会导致明显的变化。最初，由于缺乏血液流动，受影响的区域会显得苍白或白色。取下夹子后，血流会逐渐回到缺血区域，缺血区域会恢复正常颜色，表示闭塞成功。必须在整个缺血阶段持续密切观察小鼠。
    9. 缺血期结束后，将几滴生理盐水滴在夹住的区域，然后使用夹子涂抹器轻轻取下微血管夹。
    10. 使用蘸有盐水的棉签，再次轻轻取出肠道，将静脉的小分支放在黑色面团上，再次注入 50 μL 吖啶橙，并在同一位置（缺血后）捕获同一静脉的视频。

4. 活体高速视频落射荧光显微镜

  1. 使用配备长距离聚光镜、光栅、10 倍水浸物镜和电荷耦合器件相机的高速宽视场荧光显微镜观察白细胞和 NET。图像采集使用 30 ms 曝光时间和 Alexa Fluor 488（495/519） 和 Rhodamine Red （570/590） 滤光片进行。
  2. 使用成像软件进行图像采集和分析。
  3. 定量 0.06 mm² 感兴趣区域内的细胞募集。
  4. 将贴壁白细胞量化为细胞在 20 秒观察期内保持静止或附着在内皮衬里上。
  5. 将 NETs 鉴定为用白细胞和细胞外核酸荧光染料标记的细胞外结构。
  6. 在实验结束时通过颈椎脱位对动物实施安乐死（遵循机构批准的方案）。

5. 肝内皮细胞 （LEC） 分离和定量 RT-PCR

  1. 通过磁性细胞分选 （MACS） 分离 LEC29。
  2. 分离总 RNA。
  3. 通过将 2 μg 总 RNA 与 2 μL RT 缓冲液、0.8 μL dNTP 混合物、2 μL RT 随机引物、1 μL 逆转录酶和 4.2 μL 无菌蒸馏 H2O 混合，进行互补 DNA （cDNA） 合成27。
  4. 在以下条件下进行 cDNA 转录:25 °C 10 分钟，37 °C 120 分钟，85 °C 5 分钟。
  5. 使用 20 ng cDNA 进行 qPCR。
  6. 使用以下引物:F2r（正向）:TGAACCCCCGCTCATTCTTTC，F2r（反向）:CCAGCAGGACGCTTTCATTTTT，L32（正向）:CCTCTGGTGAAGCCCAAGATC，L32（反向）:TCTGGGTTTCCGCCAGTTT。 使用以下条件:95 °C 30 秒，45 次循环（95 °C 10 秒，60 °C 25 秒），60 °C 至 95 °C 6 秒，ΔΤ 1 °C。

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结果

为了研究内皮细胞依赖性对白细胞滚动和粘附以及 NET 形成的影响，最初，在内皮细胞中检查 VE-Cadherin Cre 诱导型 F2r 缺陷的疗效。采用磁性细胞分选分离肝内皮细胞。随后，分离 RNA，然后进行定量实时 PCR （qRT-PCR）。 F2rΔEC 小鼠中不存在在 VE-钙粘蛋白启动子控制下表达的 Cre 重组酶，与 WT 对照相比， F2r （PAR1） mRNA 水平显著降低（约三分之?...

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讨论

肠系膜 I/R 损伤联合活体显微镜检查应用于内皮细胞 F2r （PAR1） 缺陷的遗传小鼠模型，用于缺血 1 小时后白细胞和 NETs 的体内分析。肠系膜 I/R 损伤模型经常用于啮齿动物，缺血和再灌注时间从几分钟到几小时不等23,31，影响炎症结果32 和死亡率33。该模型还取决于几个因素，包?...

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披露声明

作者没有披露利益冲突。

致谢

C.R. 感谢 Forschungsinitiative Rheinland-Pfalz 和 ReALity（项目 MORE）、BMBF Cluster4Future CurATime（项目 MicrobAIome;03ZU1202CA）、Wilhelm Sander-Stiftung（编号 2022.131.1）和德国研究中心 （DZG） 创新基金"微生物组"（81X2210129）的资助。C.R. 是德国心血管研究中心 （DZHK） 的科学家。C.R. 是转化血管生物学中心 （CTVB）、免疫治疗研究中心 （FZI） 和美因茨约翰内斯古腾堡大学 Potentialbereich EXPOHEALTH 的成员。C.R. 是 DFG 研究单位 5644 INFINITE （RE 3450/15-1） 的成员。C.R. 获得了美因茨约翰内斯古腾堡研究学院的奖学金。K.K. 得到 DZHK"促进女科学家"卓越计划的支持，并且是 Young DZHK 的成员。Z.G 和 O.D. 是美因茨转化生物医学研究学院 （TransMed） 的博士生。

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材料

NameCompanyCatalog NumberComments
Acridine orangeSigma-Aldrich  A-6014
96-well plate Multiply PCR-Platten Sarstedt721977202.00
Anaesthesia Systems for RodentsGROPPLER medizintechnikUni Vet -Porta T-8
Aqua ad injectabilia IVMB Braun Melsungen53402101
black doughStaedtlermodelling clay
CD146 Microbeads, mouseMiltenyi Biotec130-092-007
cellSensOlympusOlympus cellSense Dimension Desktop 2.3software
charge-coupled device cameraHamamatsu PhotonicsORCA-R2camera
cotton swabsBöttger09-119-9100
Curved Hemostat 125mm/5"Indigo Instruments 22466
Depilatory creamBaleanot applicable
Dorbene Vetzoetis
Dumont ForcepsFine Science Tools11251-35
Ethanol p.a. 99,5 %Roth5504.20
Extra Narrow Scissors – Straight/Sharp-Sharp/10.5FST14088-10
FentanylJanssen-Cilag GmBH
Forceps "Dumont #5" (Inox, tip 0.1mm, length 11 cm)FST11251-20
GentleMACS C TubesMiltenyi Biotec130-093-236
GraphpadprismGraphpadPrism 10software
isoflurane Piramal4150097146757.00
iTaq UniversalSYBR Green Supermix 10x5mlBioRad1725125.00
Leukofix medical tapeBSNMedical0213600
Liver Dissociation Kit, mouseMiltenyi Biotec130-105-807
LS-Separation columns MACSMiltenyi Biotec130-042-401
MACS Smart Strainer 100 µmMiltenyi Biotec130-098-463
Microseal B Seal SealsBioradMSB1001
Midazolamhameln5918501.00
NaClBraun2350748
Needle holderFST12001-13
Nonabsorbable Braided Silk Suture, Size: 7/0, 91 Meters Fine Science Tools18020-70
Olympus BX51WI fluorescence microscopeOlympusmicroscope
PCR for Tube StripsSarstedt72985002.00
PCR Tube LidsSarstedt65989002.00
Plyethylene CatheterSmith Medical Deutschland GmbH800/100/100
Prolene (8648G), Polypropylen 6-0, Nahtmaterial Johnson & Johnson Medical GmbH 8695H
Relia Prep RNA Miniprep SystemsPromegaZ6112
Reverse Tanscription Kit (High Capacity cDNA)Applied Biosystems4368813.00
School scale KERN & SOHN GmbHEMB 500-1
Spring Scissors - Angled to SideFST15006-09
Stereo microscopeLeicaM50
Straight Hemostats 135mm/5.5"Indigo Instruments 22468
Syringe 1 mLBraun9166017V
SYTOX OrangeThermo Fisher ScientificS11368
Temperature Controller TC-1000FMI Föhr Medical Instruments GmbHnot applicable
Tissue Forceps - 1x2 TeethFST18057-14
vascular clampFine Science Tools18055-02
Vetiva miniWAHL1584-0480

参考文献

  1. Cudnik, M. T., et al. The diagnosis of acute mesenteric ischemia: A systematic review and meta-analysis. Acad Emerg Med. 20 (11), 1087-1100 (2013).
  2. Kassahun, W. T., Schulz, T., Richter, O., Hauss, J. Unchanged high mortality rates from acute occlusive intestinal ischemia: Six-year review. Langenbecks Arch Surg. 393 (2), 163-171 (2008).
  3. Florim, S., Almeida, A., Rocha, D., Portugal, P. Acute mesenteric ischemia: A pictorial review. Insights Imaging. 9 (5), 673-682 (2018).
  4. Kumar, S., Sarr, M. G., Kamath, P. S. Mesenteric venous thrombosis. N Engl J Med. 345 (23), 1683-1688 (2001).
  5. Dugbartey, G. J. Cellular and molecular mechanisms of cell damage and cell death in ischemia-reperfusion injury in organ transplantation. Mol Biol Rep. 51 (1), 473(2024).
  6. Ikeda, H., et al. Apoptosis is a major mode of cell death caused by ischemia and ischemia/reperfusion injury to the rat intestinal epithelium. Gut. 42 (4), 530-537 (1998).
  7. Gutierrez-Sanchez, G., Garcia-Alonso, I., Gutierrez Saenz De Santa Maria, J., Alonso-Varona, A., Herrero De La Parte, B. Antioxidant-based therapy reduces early-stage intestinal ischemia-reperfusion injury in rats. Antioxidants (Basel). 10 (6), 853(2021).
  8. Jia, Z., Chen, Q., Qin, H. Ischemia-induced apoptosis of intestinal epithelial cells correlates with altered integrin distribution and disassembly of f-actin triggered by calcium overload. J Biomed Biotechnol. 2012, 617539(2012).
  9. Gordeeva, A. E., et al. Vascular pathology of ischemia/reperfusion injury of rat small intestine. Cells Tissue Organs. 203 (6), 353-364 (2017).
  10. Ascher, S., et al. Gut microbiota restricts netosis in acute mesenteric ischemia-reperfusion injury. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 40 (9), 2279-2292 (2020).
  11. Kiouptsi, K., Casari, M., Mandel, J., Gao, Z., Deppermann, C. Intravital imaging of thrombosis models in mice. Hamostaseologie. 43 (5), 348-359 (2023).
  12. Wang, B., Huang, Q., Zhang, W., Li, N., Li, J. Lactobacillus plantarum prevents bacterial translocation in rats following ischemia and reperfusion injury. Dig Dis Sci. 56 (11), 3187-3194 (2011).
  13. Guan, Y., Worrell, R. T., Pritts, T. A., Montrose, M. H. Intestinal ischemia-reperfusion injury: Reversible and irreversible damage imaged in vivo. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 297 (1), G187-G196 (2009).
  14. Joao, S. A., Medeiros, A. C., Diniz, S. O. F., Cardoso, V. N., Brandt, C. T. Translocation of 99mTc labelled bacteria after intestinal ischemia and reperfusion. Acta Cir. Bras. 19 (4), (2004).
  15. Parks, D. A., Granger, D. N. Contributions of ischemia and reperfusion to mucosal lesion formation. Am J Physiol. 250 (6 Pt 1), G749-G753 (1986).
  16. Kurose, I., et al. Molecular determinants of reperfusion-induced leukocyte adhesion and vascular protein leakage. Circ Res. 74 (2), 336-343 (1994).
  17. Massberg, S., et al. Platelet-endothelial cell interactions during ischemia/reperfusion: The role of p-selectin. Blood. 92 (2), 507-515 (1998).
  18. Salter, J. W., Krieglstein, C. F., Issekutz, A. C., Granger, D. N. Platelets modulate ischemia/reperfusion-induced leukocyte recruitment in the mesenteric circulation. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 281 (6), G1432-G1439 (2001).
  19. Bayer, F., et al. Colonization with altered schaedler flora impacts leukocyte adhesion in mesenteric ischemia-reperfusion injury. Microorganisms. 9 (8), 1601(2021).
  20. Boettcher, M., et al. Therapeutic targeting of extracellular DNA improves the outcome of intestinal ischemic reperfusion injury in neonatal rats. Sci Rep. 7 (1), 15377(2017).
  21. Li, T. T., et al. Fbxw5 aggravates hepatic ischemia/reperfusion injury via promoting phosphorylation of ask1 in a traf6-dependent manner. Int Immunopharmacol. 99, 107928(2021).
  22. Huang, Z., et al. Inhibition of mir-450b-5p ameliorates hepatic ischemia/reperfusion injury via targeting cryab. Cell Death Dis. 11 (6), 455(2020).
  23. Munley, J. A., et al. Chronic mesenteric ischemia-induced intestinal dysbiosis resolved after revascularization. J Vasc Surg Cases Innov Tech. 9 (2), 101084(2023).
  24. Rubio-Gayosso, I., Platts, S. H., Duling, B. R. Reactive oxygen species mediate modification of glycocalyx during ischemia-reperfusion injury. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 290 (6), H2247-H2256 (2006).
  25. Grimsey, N. J., et al. Ubiquitin plays an atypical role in gPCR-induced p38 map kinase activation on endosomes. J Cell Biol. 210 (7), 1117-1131 (2015).
  26. Weithauser, A., Rauch, U. Role of protease-activated receptors for the innate immune response of the heart. Trends Cardiovasc Med. 24 (6), 249-255 (2014).
  27. Bochenek, M. L., et al. EPCR-PAr1 biased signaling regulates perfusion recovery and neovascularization in peripheral ischemia. JCI Insight. 7 (14), e157701(2022).
  28. Alva, J. A., et al. Ve-cadherin-cre-recombinase transgenic mouse: A tool for lineage analysis and gene deletion in endothelial cells. Dev Dyn. 235 (3), 759-767 (2006).
  29. Formes, H., et al. The gut microbiota instructs the hepatic endothelial cell transcriptome. iScience. 24 (10), 103092(2021).
  30. Tanaka, K., et al. In vivo characterization of neutrophil extracellular traps in various organs of a murine sepsis model. PLoS One. 9 (11), e111888(2014).
  31. How, C. K., et al. Induced pluripotent stem cells alleviate lung injury from mesenteric ischemia-reperfusion. J Trauma Acute Care Surg. 79 (4), 592-601 (2015).
  32. Gubernatorova, E. O., Perez-Chanona, E., Koroleva, E. P., Jobin, C., Tumanov, A. V. Murine model of intestinal ischemia-reperfusion injury. J Vis Exp. 111, e53881(2016).
  33. Henein, L., Clevenger, R., Keeran, K., Brinster, L. Rodent model of intestinal ischemia-reperfusion injury via occlusion of the superior mesenteric artery. J Vis Exp. (200), e64314(2023).
  34. Yoshiya, K., et al. Depletion of gut commensal bacteria attenuates intestinal ischemia/reperfusion injury. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 301 (6), G1020-G1030 (2011).
  35. Watanabe, T., et al. Activation of the myd88 signaling pathway inhibits ischemia-reperfusion injury in the small intestine. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 303 (3), G324-G334 (2012).
  36. Watanabe, T., et al. Toll-like receptor 2 mediates ischemia-reperfusion injury of the small intestine in adult mice. PLoS One. 9 (10), e110441(2014).
  37. Tatum, P. M., Harmon, C. M., Lorenz, R. G., Dimmitt, R. A. Toll-like receptor 4 is protective against neonatal murine ischemia-reperfusion intestinal injury. J Pediatr Surg. 45 (6), 1246-1255 (2010).
  38. Wu, M., Rowe, J. M., Fleming, S. D. Eicosanoid production varies by sex in mesenteric ischemia-reperfusion injury. Clin Immunol. 220, 108596(2020).
  39. Mester, A., et al. gender-related hemorheological alterations in intestinal ischemia-reperfusion in the rat. J Surg Res. 225, 68-75 (2018).
  40. Leung, F. W., Su, K. C., Passaro, E., Guth, P. H. Regional differences in gut blood flow and mucosal damage in response to ischemia and reperfusion. Am J Physiol. 263 (3 Pt 1), G301-G305 (1992).
  41. Megison, S. M., Horton, J. W., Chao, H., Walker, P. B. A new model for intestinal ischemia in the rat. J Surg Res. 49 (2), 168-173 (1990).
  42. Von Bruhl, M. L., et al. Monocytes, neutrophils, and platelets cooperate to initiate and propagate venous thrombosis in mice in vivo. J Exp Med. 209 (4), 819-835 (2012).
  43. Cahoon, J. M., et al. Acridine orange leukocyte fluorography in mice. Exp Eye Res. 120, 15-19 (2014).
  44. Jiang, D., Saffarzadeh, M., Scharffetter-Kochanek, K. In vitro demonstration and quantification of neutrophil extracellular trap formation. Bio Protoc. 7 (13), e2386(2017).
  45. Westhorpe, C. L., et al. In vivo imaging of inflamed glomeruli reveals dynamics of neutrophil extracellular trap formation in glomerular capillaries. Am J Pathol. 187 (2), 318-331 (2017).
  46. Rausch, P., et al. Analysis of factors contributing to variation in the c57bl/6j fecal microbiota across German animal facilities. Int J Med Microbiol. 306 (5), 343-355 (2016).
  47. Wang, S., et al. DNase-1 treatment exerts protective effects in a rat model of intestinal ischemia-reperfusion injury. Sci Rep. 8 (1), 17788(2018).
  48. Li, Y. H., Kuo, C. H., Shi, G. Y., Wu, H. L. The role of thrombomodulin lectin-like domain in inflammation. J Biomed Sci. 19 (1), 34(2012).
  49. Hayase, N., et al. Recombinant thrombomodulin on neutrophil extracellular traps in murine intestinal ischemia-reperfusion. Anesthesiology. 131 (4), 866-882 (2019).

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