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Method Article
在本研究中,开发了一种基于双抗体的夹心检测技术,用于快速检测幽 门螺杆菌感染的粪便抗原。
幽门螺杆菌 可寄生于胃粘膜,感染后可引起一系列胃肠道疾病,与胃炎、胃溃疡、胃癌密切相关。在医疗基础设施落后和卫生条件不足的地区, 幽门螺杆菌 感染的高患病率仍然是一个重大的公共卫生问题。因此,在资源有限地区开发快速、简单且具有成本效益的幽门 螺杆菌 检测筛查方法至关重要。
在这项研究中,我们在广东省石潭村进行了基于社区的筛查,石潭村是一个偏远且不发达的地区,常住人口约为 300 人,受教育程度普遍较低。我们采用双抗体夹心测定法检测 幽门螺杆菌 粪便抗原,选择这种方法是因为它在资源匮乏环境中的潜在适用性。共有来自该村的 261 名参与者被招募,并使用这种技术分析了他们的粪便样本。为了进行比较验证,对相同的样品进行定量聚合酶链反应 (qPCR) 分析。与 qPCR 结果相比,粪便中幽 门螺杆菌 抗原检测的灵敏度和特异性分别为 60.24% 和 80.08%。结果表明,粪便抗原检测方法与 qPCR 之间具有很强的一致性 (Kappa = 0.630)。 本研究系统阐明了粪抗原检测幽门 螺杆菌 感染的原理、程序、方法和临床应用,旨在探索基于乳胶的双抗体夹心技术,并为其辅助诊断建立新的策略和实用指南。
幽门螺杆菌 (H. pylori, Hp) 是一种微需氧、螺旋形、革兰氏阴性菌1。由于其定植和慢性感染人胃的能力2,该病原体已被确定为胃腺癌发展的主要病因因素 3,4。2015 年,全球有 ~44 亿人患有幽门螺杆菌感染5。幽门螺杆菌感染的患病率表现出相当大的地理差异,与发达国家相比,发展中国家的患病率明显更高。值得注意的是,在低收入国家和某些弱势群体中,感染率可高达 75%6。
尽管胃镜检查等传统检测方法准确,但由于其侵入性、高成本和患者接受度低,它们在大规模筛查和常规随访中的应用受到限制7。因此,寻找无创、简单、快速的诊断方法已成为现代临床医学研究的重要方向。幽门螺杆菌无创诊断的主要目的是在没有内窥镜检查的情况下准确、安全、方便地检测患者是否感染了幽门螺杆菌。尿素呼气试验 (UBT)、幽门螺杆菌粪便抗原检测 (FAT)8 和血清学检测9 是常用的无创技术。
其中,UBT 是侵入性最小、最准确的程序10。UBT 的敏感性和特异性高于 95%11。在可用的无创诊断方法中,UBT 已被证明是最准确和可靠的,正如在伊拉克进行的一项验证研究所见,UBT 可能被推荐为首选,因为它与其他方法相比性能更高12。然而,UBT 也有其缺点,例如成本高和需要质谱分析,这限制了在偏远或资源有限的环境中的应用13。
迫切需要开发一种快速、无创且具有成本效益的诊断方法来检测 幽门螺杆菌 感染,尤其是在资源有限的地区。在本研究中,我们开发了一种基于双抗体夹心检测技术的幽 门螺杆 菌粪便抗原快速检测技术,可以快速、有效、低成本地检测粪便样本中的 幽门螺杆菌 抗原。这项技术具有显着优势,包括经济性、非侵入性、用户友好性和对偏远地区的适应性。我们假设检测 幽门螺杆菌 粪便抗原的双抗体夹心法将表现出与 qPCR 相当的敏感性和特异性,将其定位为无创临床诊断的可行工具。
我们全面详细介绍了幽门 螺杆菌 感染粪便抗原检测的原则、程序、方法学优势和临床适用性。为了验证其实用性,我们在中国广东省清远市石潭村进行了流行病学调查和筛查,这是一个偏远且不发达的地区,常住人口约为 400 人,受教育程度有限。我们的结果表明,本文设计的粪便中 幽门螺杆菌 抗原的快速检测技术可以在 20 min 内完成。强调粪便中幽 门螺杆菌 抗原的快速检测是在偏远和落后地区快速可靠地诊断 幽门螺杆 菌感染的潜在且有前途的工具。
本横断面研究已获得广东省人民医院伦理委员会批准(批准文号:KY2024-445-01),研究期间所有研究对象的个人数据均严格保密。所有参与者在实验前都签署了书面知情同意书。选取广东省清远市石潭村居民 2024 年作为研究对象,年龄和性别没有限制。下述双抗体夹心试验(定性实验)由专业医护人员和技术人员根据说明书进行。选择该村的所有常住人口进行这项研究,无论他们是否健康或有症状或任何与胃肠道疾病相关的现有疾病。
1. 患者选择
2. 粪便 幽门螺杆菌 感染抗原检测程序
注意: 幽门螺杆菌 粪便抗原检测的算法旨在确保结果的准确性和可靠性,同时考虑到简单性和卫生性。整个过程分为样本采集、样本处理、样本储存、检测、结果判读五个步骤。样品检测工作流程图和示意图如图 1 和 图 2 所示。
3. DNA提取
4. qPCR 检测 幽门螺杆菌 和对抗生素的耐药性
注意:我们通过扩增 ureA 基因进行了 qPCR 来检测幽门螺杆菌感染。所有阴性质控产品均为无菌纯净水。幽门螺杆菌核酸检测试剂盒中的阳性质量控制产物是灭活的幽门螺杆菌标准珠 (ATCC 43504)。具有典型 S 形曲线的 CT ≤ 30 被认为是阳性的。
5. 统计分析
问卷调查
该研究共招募了 261 名参与者,包括 144 名女性和 117 名男性,年龄从 4 岁到 99 岁不等。受试者的平均年龄为 48.30 ± 17.61 岁。有 17 名未成年人 (0-17 岁),202 名成人 (18-64 岁) 和 42 名老年 (>64 岁)。问卷结果如 表 1 所示。大多数 (90.8%) 的受试者认为有必要进行 幽门螺杆菌 筛查。
本村粪便?...
幽门螺杆菌是全世界最广泛的细菌感染之一15。问卷结果显示,55.2% 的人群对幽门螺杆菌缺乏认识,而 90.8% 的人认为幽门螺杆菌筛查是必要的。这些发现强调了在经济落后和偏远地区实施幽门螺杆菌筛查计划的重要性16。尽管尿素呼气试验 (UBT) 是一种常见的诊断方法,但其高成本和不适合儿童和孕妇限制?...
作者没有需要声明的利益冲突。
没有
Name | Company | Catalog Number | Comments |
DNA extraction kit | Jiangsu mole biotechnology co., ltd | 20230223 | None |
H. pylori fecal antigen detection kit | Hangzhou nuohui healthy technology co., ltd | 20213401126 | None |
H. pylori nucleic acid detection kit | Jiangsu mole biotechnology co., ltd | 20230226 | None |
Real-time fluorescence quantitative PCR | Shanghai Hongshi medical treatment technology co., ltd | 20183221659 | None |
Statistical Product and Service Solutions | IBM company | None | None |
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