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Method Article
본 연구에서는 헬리코박터 파일로리균에 감염된 대변 항원을 신속하게 검출할 수 있도록 이중 항체를 기반으로 한 샌드위치 검출 기법을 개발하였다.
헬리코박터 파일로리는 위 점막에 기생할 수 있으며, 이는 감염 후 일련의 위장 질환을 유발할 수 있으며 위염, 위궤양 및 위암과 밀접한 관련이 있습니다. 의료 인프라가 열악하고 위생 시설이 불충분한 지역에서 헬리코박터 파일로리 감염의 높은 유병률은 여전히 중요한 공중 보건 문제로 남아 있습니다. 따라서 자원이 제한된 환경에서 H. pylori 검출을 위한 빠르고 간단하며 비용 효율적인 스크리닝 방법을 개발하는 것이 가장 중요합니다.
이 연구에서는 광둥(廣東)성 시탄(Shitan) 마을에서 지역사회 기반 검진을 실시했는데, 이 지역은 일반적으로 교육 수준이 낮고 약 300명의 거주자가 거주하는 외딴 저개발 지역이다. 우리는 H. pylori 분변 항원의 검출을 위해 이중 항체 샌드위치 분석을 사용했으며, 이는 자원이 부족한 환경에서 잠재적으로 적용할 수 있기 위해 선택된 방법입니다. 마을에서 총 261명의 참가자가 등록되었으며 이 기술을 사용하여 그들의 배설물 샘플을 분석했습니다. 비교 검증을 위해 동일한 샘플에 대해 정량적 중합효소연쇄반응(qPCR) 분석을 실시했습니다. qPCR 결과와 비교했을 때, 대변 내 헬리코박터 파일로리 항원 검출의 민감도와 특이도는 각각 60.24%와 80.08%였다. 그 결과 분변 항원 검출 방법과 qPCR(Kappa = 0.630) 간에 강력한 일치가 있음을 보여주었습니다.본 연구는 헬리코박터 파일로리 감염에 대한 분변항원 검출의 원리, 절차, 방법론 및 임상적 응용을 체계적으로 규명하고, 라텍스 기반 이중항체 샌드위치 기술을 탐구하고, 이를 보조진단하기 위한 새로운 전략과 실천 지침을 수립하는 것을 목표로 하였다.
헬리코박터 파일로리균(H. pylori, Hp)은 미호기성, 나선형 모양의 그람 음성 박테리아1입니다. 인간의 위를 식민지화하고 만성적으로 감염시키는 능력으로 인해 이 병원체는 위 선암종 발병의 주요 병인학적 요인으로 확인되었습니다 3,4. 2015년 한 해 동안 전 세계에서 ~44억 명의 사람들이 헬리코박터 파일로리 감염으로 고통받았다5. 헬리코박터 파일로리 감염의 유병률은 상당한 지리적 편차를 보이며, 개발도상국은 선진국에 비해 감염률이 현저히 높습니다. 특히 저소득 국가와 특정 취약 인구 집단의 감염률은 75%6에 달할 수 있습니다.
위내시경 검사와 같은 전통적인 검출 방법은 정확하지만, 침습성, 높은 비용 및 낮은 환자 수용성으로 인해 대규모 선별 검사 및 일상적인 추적 관찰에 적용하는 데 한계가 있습니다7. 따라서 비침습적이고 간단하며 신속한 진단 방법을 찾는 것은 현대 임상 의학 연구의 중요한 방향이 되었습니다. 헬리코박터 파일로리 균의 비침습적 진단의 주요 목적은 내시경 검사 없이 환자가 헬리코박터 파일로리 균에 감염되었는지 여부를 정확하고 안전하며 편리하게 검출하는 것입니다. 요소 호흡 검사(UBT), 헬리코박터 파일로리 분변 항원 검사(FAT)8 및 혈청학적 검사9 는 널리 사용되는 비침습적 기법입니다.
이 중 UBT는 가장 방해가 적고 가장 정확한 시술이다10. UBT의 민감도와 특이도는 95%11 이상입니다. 이라크에서 실시된 검증 연구에서 볼 수 있듯이 UBT는 사용 가능한 비침습적 진단 방법 중 가장 정확하고 신뢰할 수 있는 것으로 나타났으며, UBT는 다른 방법에 비해 성능이 우수하기 때문에 첫 번째 선택으로 권장될 수 있습니다12. 그러나 UBT는 높은 비용과 질량 분광 분석의 필요성과 같은 단점도 가지고 있으며, 이로 인해 원격 또는 리소스가 제한된 설정에서 응용 프로그램이 제한됩니다13.
헬리코박터 파일로리 감염을 검출하기 위한 신속하고 비침습적이며 비용 효율적인 진단 방법의 개발은 특히 자원이 제한된 지역에서 매우 필요합니다. 본 연구에서는 배설물 시료에서 H. pylori 항원을 빠르고 효과적이며 저렴한 비용으로 검출할 수 있는 이중 항체 샌드위치 검출 기술을 기반으로 H. pylori 분변 항원에 대한 신속한 검출 기술을 개발했습니다. 이 기술은 경제성, 비침습성, 사용자 친화성 및 외딴 지역에 대한 적응성을 포함하여 상당한 이점을 제공합니다. 우리는 H. pylori 분변 항원을 검출하기 위한 이중 항체 샌드위치 방법이 qPCR에 필적하는 민감도와 특이성을 입증하여 비침습적 임상 진단을 위한 실행 가능한 도구로 자리매김할 것이라는 가설을 세웠습니다.
우리는 H. pylori 감염에 대한 대변 항원 검출의 원리, 절차, 방법론적 강점 및 임상적 적용 가능성을 포괄적으로 자세히 설명했습니다. 실용성을 검증하기 위해 중국 광둥성 칭위안시 시탄촌에서 역학 조사와 검사를 실시했는데, 이 마을은 약 400명의 상주 인구와 제한된 교육 성취도를 가진 외딴 저개발 지역입니다. 우리의 결과는 여기에서 설계된 대변에서 H. pylori 항원의 신속한 검출 기술이 20분 이내에 완료될 수 있음을 보여줍니다. 대변에서 H. pylori 항원의 신속한 검출은 외진 및 낙후 지역에서 H. pylori 감염을 빠르고 신뢰할 수 있게 진단할 수 있는 잠재력적이고 유망한 도구라는 점이 강조됩니다.
이 단면 연구는 광둥성 인민병원 윤리위원회(승인 번호: KY2024-445-01)의 승인을 받았으며 모든 연구 대상자의 개인 데이터는 연구 기간 동안 엄격하게 기밀로 유지되었습니다. 모든 참가자는 실험 전에 서면 동의서에 서명했습니다. 2024년 광둥성 칭위안시 시탄촌 주민들을 연구 대상으로 선정했으며, 연령과 성별에 대한 제한은 없었다. 아래에 설명된 이중 항체 샌드위치 분석(정성적 실험)은 지침에 따라 전문 의료 및 기술 인력에 의해 수행되었습니다. 이 연구를 위해 마을의 전체 영구 인구는 건강하거나 증상이 있는지 또는 위장 질환과 관련된 기존 질병이 있는지 여부에 관계없이 선택되었습니다.
1. 환자 선택
2. 분변 H. pylori 감염 항원 검출 절차
참고: 헬리코박터 파일로리 대변 항원 검사 알고리즘은 단순성과 위생을 고려하여 결과의 정확성과 신뢰성을 보장하도록 설계되었습니다. 전체 프로세스는 샘플 채취, 샘플 처리, 샘플 보관, 검출 및 결과 해석의 5단계로 나뉩니다. 샘플 감지의 작업 흐름도와 개략도는 그림 1 과 그림 2에 나와 있습니다.
3. DNA 적출
4. H. pylori 검출 및 항생제에 대한 내성을 위한 qPCR
참고: ureA 유전자를 증폭하여 H. pylori 감염을 검출하기 위해 qPCR을 수행했습니다. 모든 부정적인 품질 관리 제품은 멸균 된 정제수입니다. H. pylori 핵산 검출 키트의 positive quality control 제품은 불활성화된 H. pylori 표준 비드(ATCC 43504)입니다. 전형적인 S자형 곡선을 가진 CT ≤ 30은 양수로 간주됩니다.
5. 통계 분석
설문지 설문조사
4세에서 99세 사이의 연령을 가진 여성 144명과 남성 117명으로 구성된 총 261명의 참가자가 연구에 등록되었습니다. 피험자의 평균 연령은 48.30세± 17.61세였다. 미성년자(0-17세) 17명, 성인 202명(18-64세), 노인 42명(>64세)이 참가자였다. 설문지 결과는 표 1에 나와 있습니다. 피험자의 대다수(90.8%)는 헬리코박터 파일로리 선별 ?...
헬리코박터 파일로리균은 전 세계적으로 가장 널리 퍼져 있는 세균 감염 중 하나이다15. 설문지 결과에 따르면 인구의 55.2%는 헬리코박터 파일로리균에 대한 인식이 부족한 반면, 90.8%는 헬리코박터 파일로리 선별 검사가 필요하다고 답했다. 이러한 결과는 경제적으로 취약한 외딴 지역에서 헬리코박터 파일로리 선별 프로그램...
저자는 선언할 이해 상충이 없습니다.
없음
Name | Company | Catalog Number | Comments |
DNA extraction kit | Jiangsu mole biotechnology co., ltd | 20230223 | None |
H. pylori fecal antigen detection kit | Hangzhou nuohui healthy technology co., ltd | 20213401126 | None |
H. pylori nucleic acid detection kit | Jiangsu mole biotechnology co., ltd | 20230226 | None |
Real-time fluorescence quantitative PCR | Shanghai Hongshi medical treatment technology co., ltd | 20183221659 | None |
Statistical Product and Service Solutions | IBM company | None | None |
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